重组赖氨酰内肽酶RLys-C
◆概述
赖氨酰内肽酶最早从土壤细菌无色杆菌Achromobacter lyticus中分离得到，能够特异性识别与切割肽链中Lys羧基端肽键，常被用于蛋白测序及Lys-X化合物的酶催化合成。
艾美迪选用Achromobacter lyticus来源的，克服大肠杆菌重组表达技术难题进行制备。本品最适pH 9.0~9.5,等电点为pH 6.9~7.0；最适反应温度30~37℃，50℃以上稳定性下降。在适宜温度下，该酶稳定性良好，在4 mol/L尿素或0.2%SDS溶液中30℃孵育6 hr后，生物活性未发生降低。可广泛用于蛋白组学分析，蛋白、抗体类药物质量检测，多肽、蛋白类产品制备工艺中。
◆特性
● 高比活性，高特异性，可消化难以酶切的位点，空间构象复杂或疏水性较强的蛋白（如膜蛋白）同样适用
● 活性稳定，对尿素、乙腈等变性剂耐受能力强
● 批量化生产，连续批次质量稳定，批间差小
● 高纯度，重组表达避免了可能存在的杂酶残留（e.g. Arg-C，Lys-N等）
◆来源
重组 E. coli 菌株，其克隆有来自的无色杆菌（A. lyticus）的蛋白酶I基因。
◆酶活定义
在0.2 mol/L pH 9.0的Tris-HCl缓冲中，温度为37±2℃的条件下， 1 min催化底物AC-Lys-PNA生成1 μmol PNA所需的酶量为一个活性单位（AU）。
◆纯度
将 rLys-C以DTT 还原处理后， 还原电泳显示纯度＞99%
◆使用方法
本品为冻干粉，使用前先使用超纯水或25 mmol/L Tris-HCl，pH 8.0~8.5溶解。
◆应用实例
RLys-C酶切重组人门冬胰岛素原（Pro-Insulin-Aspart）
底物Pro-Insulin-Aspart分子量约为7 kDa，含有3个赖氨酸（K），采用 Lys-C 酶切的理论肽段示意图如下：
酶切条件：酶与底物的质量比为 1:10000，在50 mM Tris-HCl，pH 8.5中37℃酶切16 小时。
峰 A：酶切前肽段 Pro-Insulin-Aspart
峰 B：酶切后 B链+C肽+A链（去引导肽）
峰 C：酶切后B链+A链（去引导肽和C肽）
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名称
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RT
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Area
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Area%
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质谱量
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酶切位点
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对应肽段
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Pro-Insulin-Aspart
未酶切对照
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10.45
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155.045
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100%
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7096.94
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/
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酶切前
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以IMD-RLys-C-酶切产物
（酶：底物1:10000）
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11.57
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201.6
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100%
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5724.54
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①
②
③
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B链+A链
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以其他公司重组Lys-C酶产物
（酶：底物1:10000）
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10.49
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146.9
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61.78%
|
7096.94
|
/
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酶切前
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10.62
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81.5
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34.29%
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6006.84
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①
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B链+C肽+A链
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艾美迪 的 RLys-C 酶切产物为切除引导肽和 C 肽的门冬胰岛素前体，酶切位点①②③均酶切完全。
而其他公司产品仅部分切开酶切位点①，切除效率仅为34.29%，酶切位点②③均未被酶切，未能得到序列正确的门冬胰岛素前体。
◆与其他公司产品对比
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底物
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酶切位点对比
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艾美迪
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其他公司重组Lys-C
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重组人门冬胰岛素原
（Pro-Insulin Aspart）
分子量约为7 kDa，含有3个K
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①PK↓
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++
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+
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②DK↓
|
++
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–
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③GK↓
|
++
|
–
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重组人普通胰岛素原
（Pro-Insulin）
分子量约为7 kDa，含有3个K
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①PK↓
|
++
|
+
|
|
②PK↓
|
++
|
+
|
|
②AK↓
|
++
|
+
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PJ-10S小肽
分子量约为1 kDa，含有3个K
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①DK↓
|
++
|
+
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相同底物浓度的酶切条件下艾美迪的 RLys-C 的酶切效率显著高于其他品牌同类产品。以生成的肽段 YDDDDK 计算，艾美迪的RLys-C 的酶切率比其他品牌同类产品高约9倍；以生成的肽段 RGWK 计算，艾美迪的RLys-C的酶切效率比其他品牌同类产品高约8.6倍。
◆产品信息
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产品编号
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产品名称
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活性单位
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规格
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RLYS-C0401
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重组赖氨酰内肽酶
RLys-C
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3.0 AU/mg
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20 μg
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RLYS-C0403
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重组赖氨酰内肽酶
RLys-C
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3.0 AU/mg
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1 mg
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◆相关产品
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产品编号
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产品名称
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活性单位
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规格
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RME0101
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重组赖氨酰内肽酶/重组胰蛋白酶混合装
Lys-C + Trypsin
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3.0 AU/mg
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20 μg
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RME0102
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重组赖氨酰内肽酶/重组胰蛋白酶混合装
Lys-C + Trypsin
|
3.0 AU/mg
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20 μg x
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产品的详情请查看详细单页：重组赖氨酰内肽酶
