愈创木酚检测试剂盒 Guaiacol Detection Kit


产品编号 产品名称 产品规格 产品等级 产品价格
KYO-06810 YSG Agar Plate
YSG琼脂平板
20 PLATE
KYO-08900 Va-YSG Medium
脂环酸芽孢杆菌/嗜热耐酸芽孢杆菌 培养基
2mL×100
KYO-08920 Guaiacol Detection Kit
愈创木酚检测试剂盒
100TEST
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愈创木酚检测试剂盒愈创木酚检测试剂盒                  Guaiacol Detection Kit

Guaiacol Detection Kit



◆背景

 愈创木酚检测试剂盒                  Guaiacol Detection Kit

嗜酸耐热菌Alicyclobacillus acidoterrestris是革兰氏阳性,产芽胞厌氧菌,在自然界中普遍存在。1984年透明苹果汁混浊事件后该物种被大量研究。生长在相对高的温度和酸性条件下的Alicyclobacillus类细菌,称为热-嗜酸性杆菌(TAB) [1, 2, 3].

TAB不能通过巴氏消毒法被灭菌,可能残留在合成的食物和饮料中。尚不清楚TAB是否对人体有害,但产生有异味的愈创木酚,会降解果汁和其他产品的质量。即使没有异味,在分配过程中轻微恶化引起的降解也会降低产品的质量。                                                                                                                               Va-YSG Medium  

避免TAB污染是非常困难的,特别是在土壤中。幸运的是,引起污染的   

A. acidocaldarius 和其他主要物种被认为是无害的,TAB引起的损害能够通愈创木酚检测试剂盒                  Guaiacol Detection Kit

过监测被认为有害的A. acidoterrestri来缩小。因为这些物种生长相对高温

和酸性的条件下,不能通过常规的提取培养的方式进行检测。                 

由于欧洲和其他区域经常发生果汁质变事件,2003年3月日本果汁联合会研发和出版了同一检测TAB方法 [4]。为了容易进行该项检测,我们研发了该试剂盒。该试剂盒不同于会产生异味的愈创木酚的A. acidoterrestri试剂盒Guaiacol Detection Kit Reference                                                                                        Guaiacol Detection Kit                                                                                                         

                                                                                                                                                                                       

           

 

◆试剂盒组成


YSG 琼脂板20 块板(货号KYO-06810)

TAB纯化的YSG琼脂培养基

10×2 板/1 盒

 

Va-YSG 培养基 (2mL) 100 个管子(货号KYO-08901)

加入到YSG培养基的Vanillic acid ,用于愈创木酚的形成

2 mL×100 管

 

愈创木酚检测试剂盒 100 次 (货号KYO-08921)

试剂 1: 50mM 苯二甲酸氢钾缓冲液

60 mL×2 瓶

试剂 2: 1.3 % 过氧化氢溶液

2.5 mL×1 管

试剂 3:过氧化物酶-磷酸缓冲液

2.5 mL×1 管

阳性对照: Guaiacol  (1050 ppm)

2.5 mL×1 管

 


◆TAB测试流程图-日本果汁协会

愈创木酚检测试剂盒                  Guaiacol Detection Kit

  

◆实验流程


1. 用接种环,10uL,在YSG琼脂板上提取的新克隆,该克隆还没有形成孢子。在“Va-YSG medium (2mL), ” (≥1×108cfu/mL)管内重悬该克隆。.

2. 孵育 45±1°C,3小时。

3. 加入1 mL“Guaiacol Detection Kit”的试剂1。

4. 加入20 μL“Guaiacol Detection Kit”的试剂 2 。

5. 加入20 μL 试剂3 of “Guaiacol Detection Kit”试剂3.

6. 混匀。

7. 放置5-10 分钟。

8. 检测培养基颜色的变化。*请在10分钟内观察颜色变化。


愈创木酚检测试剂盒                  Guaiacol Detection Kit


愈创木酚检测试剂盒                  Guaiacol Detection Kit

Brown color indicates contamination of AAT

愈创木酚检测试剂盒                  Guaiacol Detection Kit


空白 (阴性对照) 

使用没有接种的"Va-YSG medium (2mL)" ,进行步骤(2)-(8).


阳性对照

2 mL灭菌水和100 µL阳性对照混合,进行步骤 (3)-(8).

处理信息

• 请使用高压灭菌方式处理已经使用的培养基(121℃,超过30分钟)

• 保存条件: 2-10 ,避光。


• 保质期:制造后12个月

一般我们提供的产品保质期在3个月到10个月。

欲了解详情资料请点击:果汁中嗜热嗜酸菌的检测方法——膜过滤法和涂布法

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Q1:  我对TAB列举法有些问题。

          a. YSG灭菌水是什么意思,我想知道制备的比率。

          b.阳性/阴性测试:样品制备步骤提到的用YSG培养基稀释,稀释比例是多少?
          c.如果是水样品的话,是不是用相同方法?

A1:   (a,b)回答: 
           "YSG distilled water"是错误说法,正确的说法是“灭菌水”。制备比例的话,请参考下面的

           信息,不过具体案例具体分析。(参考数据来自日本果汁联合会R).
           ——————————————————–
           果汁      〔Brix 值〕   参考比例  
           ———————————————————
           苹果         〔70〕 ・・・・・・・・ 10 倍
           橙子       〔65〕 ・・・・・・・・ 10 倍
           红葡萄     〔65〕 ・・・・・・・・ 20-50 倍
           白葡萄    〔65〕 ・・・・・・・・ 20 倍
           胡萝卜         〔40〕 ・・・・・・・・・10 倍
           柠檬      〔50〕 ・・・・・・・・・10 倍   
           葡萄柚    〔55〕 ・・・・・・・・・20 倍
           桃子        〔55〕 ・・・・・・・・・10 倍
           ———————————————————
            c. 水样品的话,是不是用相同方法?
            回答(c):对不起,我们不能明确告知是否可以运用,我们手头没有相关记录。
           有一种软饮料“near water",来自调味品,不是果汁(或者少量)和水。我们听说该款产品可用

           于检测该类饮料。 

Q2:   果糖能够作为样品吗?

A2:   非常抱歉,我们这边没有关于愈创木酚检测糖果(果糖)样品的相关知识。所以我们建议参考简单

           流程,该流程修改自 “Japanese spore counting method of sugar samples”。如果你们有预处

           理微生物测试的流程,请按照你们的操作流程操作代替操作操作流程中的“样品制备“。该流程中

           有制备YSG液体培养基的方法。如果 您使用我们提供的流程,不需要使用接种环和YSG琼脂板。

Q3:   我们使用该试剂盒鉴定Alicyclobacillus acidoterrestris。我们的客户是做墨西哥沙拉的,它们也

           有类似愈创木酚的异味。我们是否可以用该试剂盒去检测沙拉中的愈创木酚(主要西红柿,红色)?红

           色是否会干扰?

A3:   我们这边没有数据是关于愈创木酚检测试剂盒检测沙拉酱的案例。如果您考虑观察方法,请参考下

           面的"注意事项" 。

           注意事项(1):来自样品的固体如果样品的固体中有AAT,必须采取胃部处理或者匀浆去除固体的致

           病菌。

           注意事项(2):材料中多酚的影响多酚是AAT(Alicyclobacillus acidoterrestris)生长抑制剂。因此,

           检测AAT必须稀释样品20~50倍。否则,无法检测出来。我们不清楚沙拉中有多少多酚。但是西红

           柿是含有多酚的。一般稀释10倍。可以考虑沙拉稀释超过20倍。

           注意事项(3):关于样品 的粘度。稀释降低粘度。因子样品必须适当稀释。请参考微生物稀释比例检测

           样品,不包括抗热嗜酸性细菌。注意事项(4):关于样品到标本上携带的颜色如果最终采用过氧化物酶

           方法,如果样品带有棕色的话,可能判断起来很麻烦。如果样品稀释的话,我认为不会引起大问题。

           注意事项(4):其他干扰材料如果使用过氧化物酶方法,通过过氧化物酶反应会使愈创木酚 (AAT产物,

           会引起异味)聚合并且变成棕色。我们认为沙拉酱包括不同的香味料可以作为材料。因此,如果有材料

           抑制过氧化物酶反应或者含有的物质可以起过氧化酶作用,通过过氧化物酶反应变成棕色,会引起假

           阳性或者假阴性的结果。

Q4:  如何接种TAB到YSG琼脂板上面?请提供流程。

A4:    根据Japan Fruit Juice Association,有3种方法

            1) 倾注平皿的方法

            2) 用曲面玻璃棒涂布平板的方法 
            3) MF 方法
            如果告知客户的样品和检测方法,我们可以推荐方法。

            对于您的信息,请让我们知道在我们手册里面TAB检测的流程。


Q5:    是否提供不含香草酸的YSG培养基?

A5:    是的,我们提供不含香草酸的YSG培养基。然而售价会高,也需要额外时间考虑生产。另外,小批量生产

            会比较难。

Q6:    是否有数据或者参考文献显示 Guaiacol detection kit的准确性? 我们的客户希望提供上述信息。

A6:    关于产品的准确性,Japan Institute of fruit juice认可检测操作手册还有手册上提到的批次准确性的数据。

            然后,英文版的操作搜出不提供准确性的信息。

            关于您的要求,请参考下面有研发者by developer(Motohiro Niwa)写的论文 "Development of a rapid 

            detection method of A. acidoterrestiris, Hazardous bacteria to acidic beverage"


Q7:   我们需要下面两者之一的微生物菌株A.acidobacillus 或者 A.acidoterrestris 去完成分析,制定质量政

            策。是否可以从你们那边获得?

A7:   非常抱歉我们不能提供细菌菌株。您可以通过ATCC和DSMZ的当地经销商联系购买。

           http://www.atcc.org/About/tabid/138/Default.aspx
           http://www.dsmz.de/
           下面的菌株是分泌愈创木酚的。
           ———————————————————-
          ・ A.acidoterrestris ATCC49025
          ・ A.acidoterrestris DSM2498
          ・ A.acidoterrestris DSM3923
          ・ A.acidoterrestris DSM3924

Q8:    该试剂盒是否可用于牛奶或者啤酒?

A8:     关于牛奶和啤酒,我们没有相关的信息。


Q9:    该试剂盒可以检测多少愈创木酚?

A9:     Va-YSG 培养基 和Guaiacol detection kit能够检测25ppm愈创木酚。


Q10:  是否与关于假阳性结果的信息?

A10:   如果样品中有过氧化物酶或则过氧化氢酶的话,我们试剂盒可能还有假阳性的结果。


Q11:  是否可用BAT培养基代替YSG琼脂?

A11:   他们的YSG琼脂用这个试剂盒是可以的。我们推荐使用Va-YSG (KYO- 08901)用于下一步实验室(在YSG琼

             脂上孵育后)。我们的试剂盒是基于 Japan Fruit Juice Association的操作流程, 不推荐使用BAT培养

              基。所以不能保证使用BAT培养基的结果。


Q12:  是否可用来检测糖果?

A12:   对不起我们这边没有这方面信。可以参考 “Japanese spore counting method of sugar samples”。

             如果您与细菌检测的预处理流程,请使用您的实验流程代替样品处理。该流程中,有YSG液体培养基

             的制备方法。如果 您使用我们建议的流程,需要接种环和YSG琼脂板。如果不适合您的样品,建议修改。


Q13:    该试剂盒是否可以检测Ethylvanillin 到Ethoxyphenol转变?Ethoxyphenol也会类似愈创木酚,会有

            异味?

A13:  该试剂盒有比色法的结果,通过过氧化物酶反应愈创木酚转变成四-愈创木酚检测愈创木酚。关于2-

            Ethoxyphenol, 也会发生过氧化物酶反应,会有比色法结果。然而我们之前没有测试过,也没有看

           到相关的文献,不能确定。在很多化学物质数据库中我们也没有找到关于异味是由Ethoxyphenol引

           起的信息。


Q14:  该试剂盒可检测蜂蜜吗?

A14:     对不起,我们没有做过类似实验。

愈创木酚检测试剂盒                  Guaiacol Detection Kit

Guaiakol_detection_kit_reference.pdf



【1】   G.Deinhard, et al., Bacillus acidoterrestris sp. nov., a new thermotolerant acidophile isolated from

            different soils. Syst. Appl. Microbiol. 10, 47-53 (1987)

【2】  GOTO, M., Spore-forming thermo-acidophilic bacilli of the genus Alicyclobacillus, Bokin Bobai, 28

           (8), 499-508 (2000), in Japanese

【3】  GOTO, K., Lecture on "Classification and identification of microbes" 1. Classification and properties

           of new thermo-acidophilic bacilli, January 2001 issue of Soft Drink Technical Data, 9-26 (2001), in 

           Japanese

【4】  Niwa, M., et al., Development of a rapid detection method of A.acidoterrestris, hazardous bacteria

           to acidic beverage. Fruit processing, 13, 102-107 (2003)

【5】  Japan Fruit Juice Association, On the unified test method for thermo-acidophilic bacilli, Report of 

           Japan Fruit Juice Association, 535, 4-12 (2003), in Japanese

【6】  Niwa, M., et al., A.acidoterretris rapid detection kit, Fruit processing, 13, 328-331 (2003)

【7】  Niwa, M., Control of deleterious bacteria in acidic beverages by using a guaiacol detection kit

           (peroxidase method), Japan Food Science, 2004-2, 23-28 (2004), in Japanese

【8】  Japan Laid-Open P2003-259A “Detection of guaiacol forming bacteria and/or its identification 

           method”