PrimeScript™ One Step RT-PCR Kit Ver.2 (Dye Plus)酶试剂盒Takara


PrimeScript One Step RT-PCR Kit Ver.2 (Dye Plus)
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Takara RR057A PrimeScript One Step RT-PCR Kit Ver.2 (Dye Plus) 50 Rxns ¥1,582 PrimeScript™ One Step RT-PCR Kit Ver.2 (Dye Plus) PrimeScript™ One Step RT-PCR Kit Ver.2 (Dye Plus) PrimeScript™ One Step RT-PCR Kit Ver.2 (Dye Plus)
Takara RR057B (A × 4) PrimeScript One Step RT-PCR Kit Ver.2 (Dye Plus) 50 Rxns × 4 ¥5,697 PrimeScript™ One Step RT-PCR Kit Ver.2 (Dye Plus) PrimeScript™ One Step RT-PCR Kit Ver.2 (Dye Plus) PrimeScript™ One Step RT-PCR Kit Ver.2 (Dye Plus)
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PrimeScript™ One Step RT-PCR Kit Ver.2 (Dye Plus) PrimeScript™ One Step RT-PCR Kit Ver.2 (Dye Plus) PrimeScript™ One Step RT-PCR Kit Ver.2 (Dye Plus) PrimeScript™ One Step RT-PCR Kit Ver.2 (Dye Plus)
 
 
■ 制品内容 (50 次量)
PrimeScript 1 Step Enzyme Mix 100 μl
2X 1 Step Buffer (Dye Plus) 625 μl × 2
Control F-1 Primer (20 μM)*1 20 μl
Control R-1 Primer (20 μM)*2 20 μl
Positive Control RNA (2×105 Copies/μl) 20 μl
RNase Free dH2O 625 μl × 2
 
*1 Positive Control RNA用上游引物。
*2 Positive Control RNA用下游引物。
 
 
■ 制品说明
PCR(Polymerase Chain Reaction;聚合酶链式反应)是一种体外扩增DNA的简单而有效的方法。虽然原理上PCR法是扩增DNA,RNA不能直接被扩增,但是经过反转录酶的作用把RNA反转录成cDNA后,PCR法便可应用于RNA的解析了。目前,RT-PCR方法已广泛应用于RNA的构造解析、cDNA的克隆及RNA水平上的表达解析等多种领域。
本试剂盒采用了一步(One Step)RT-PCR法。RNA→cDNA→PCR反应操作在同一反应体系中连续进行,反应中途不需添加任何试剂,避免污染危害。同时反应液中已含有电泳时所必需的色素试剂(蓝色和黄色色素),反应后可以直接进行电泳。反应液为鲜艳的绿色(Emerald Green),电泳时指示效果明显,容易观察样品的电泳位置。反转录反应使用了具有很强延伸能力的反转录酶PrimeScript RTase。该反转录酶对具有复杂二级结构的RNA模板也具有很强的延伸能力;PCR反应使用了扩增性能优越的Hot Start型DNA聚合酶TaKaRa Ex Taq HS,大大提高了本试剂盒的扩增性能和反应特异性。反应试剂已优化,以实现与不含染料和loading buffer的传统RT-PCR系统具有相同反应效果。在本试剂盒中,已将PrimeScript RTase、TaKaRa Ex Taq HS、RNase Inhibitor以及One Step RT-PCR用稳定剂等配制成了Premix型的PrimeScript 1 Step Enzyme Mix;同时把反应用Buffer、dNTP以及One Step Enhancer Solution配制成了Premix型的2×1 Step Buffer(Dye Plus)的形式,使实验操作时的反应液配制和电泳检测更为简单方便。
本试剂盒具有以下特点:
1. 进行高效的RT-PCR扩增。
2. 反应液制备简单,可直接进行凝胶电泳。
3. 反转录温度可以设定为50℃,能够有效抑制非特异性扩增。
4. 可减少由于错配和引物二聚体造成的非特异性反应。
本试剂盒中含有进行One Step RT-PCR反应用的全部试剂,可以方便有效地对RNA进行扩增分析。
 
■ 各种引物的序列
引物名称 各引物序列
  Control F-1 Primer        5′-CTGCTCGCTTCGCTACTTGGA-3′
  Control R-1 Primer        5′-CGGCACCTGTCCTACGAGTTG-3′
 
■ Positive Control RNA
本试剂盒中的Control RNA是以pSPTet3质粒 (质粒中的SP6启动子下游插入长约1.4 kb的pBR322来源的DNA片段,其DNA片段上含有抗四环素基因) 为模板由SP6 RNA聚合酶经体外转录而得到的。
 
PrimeScript™ One Step RT-PCR Kit Ver.2 (Dye Plus)
图1. Positive Control RNA:使用Control Primer可以扩增462 bp的DNA片段
 
■ 原理
PrimeScript One Step RT-PCR Kit Ver.2(Dye Plus)可在同一反应管中连续进行由PrimeScript RTase将RNA反转录为cDNA,再由TaKaRa Ex Taq HS扩增此cDNA的RT-PCR反应。
 
PrimeScript™ One Step RT-PCR Kit Ver.2 (Dye Plus)
图2. PrimeScript One Step RT-PCR Kit Ver.2 (Dye Plus) 原理图
 
■ 保存
-20℃。
 
■ 试剂盒特点
       RNA模板   适用于所有RNA
       扩增片段大小   ~8 kb
  PrimeScript 1 Step Enzyme Mix   PrimeScript RTase
  DNA Polymerase (TaKaRa Ex Taq HS)
  RNase Inhibitor
  2 × 1 Step Buffer (Dye Plus)
  含有反应Buffer
  dNTP Mixture (终浓度400 μM)
  One Step Enhancer Solution
  色素、比重剂
  1st strand cDNA合成用引物   特异性下游PCR Primer (Oligo-dT Primer和 Random引物不能使用)
       操 作   在同一反应管中连续进行RT-PCR反应
 
■ 使用注意
1. 当同时需要进行数次RT-PCR反应时,应先配制各种试剂的混合液,然后再分装到每个反应管中。这样,可使所取的试剂体积更准确,减少试剂损失,避免重复分取同一试剂。同时也可以减少实验操作或实验之间产生的误差。
2. 使用PrimeScript 1 Step Enzyme Mix时,应轻轻混匀,避免起泡;分取之前要小心地离心收集到反应管底部;由于酶保存液中含有50%的甘油,粘度高,分取时应慢慢吸取。
3. 2 X 1 Step Buffer (Dye Plus) 使用前用Vortex充分混匀,离心后使用。
4. 酶制品应在实验前才从-20℃中取出,使用后也应立即放回-20℃中保存。
5. 为了防止Positive Control RNA分解,应尽量避免反复冻融。有条件的实验室最好保存于-70℃~-80℃。
6. 分装试剂时务必使用新的枪头,以防止样品间污染。
7. 使用本试剂盒进行反转录反应时必须使用特异性的反转录引物,Random Primer、Oligo dT Primer不能使用。
 
 

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