E.coli DH5α Electro-Cells酶试剂盒Takara


E.coli DH5α Electro-Cells
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Takara 9027 E.coli DH5α Electro-Cells 50 μl × 10 ¥433 E.coli DH5α Electro-Cells E.coli DH5α Electro-Cells E.coli DH5α Electro-Cells
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E.coli DH5α Electro-Cells
E.coli DH5α Electro-Cells  
E.coli DH5α Electro-Cells
 
 
■ 制品内容
E.coli DH5α Electro-Cells 50 μl × 10
pUC19 plasmid ( 10 pg/μl) 10 μl
SOC Medium* 1 ml × 10
*SOC Medium:      2%   Tryptone
 0.5%   Yeast extract
 10 mM   NaCl
 2.5 mM   KCl
  10 mM   MgSO4
10 mM   MgCl2
 20 mM   Glucose
 
■ 制品说明
E. coli DH5α Electro-Cells是Takara Bio特别制备的适用于电穿孔法的制品。用高电压脉冲电流瞬间击穿细胞的细胞质膜,从而使外源DNA转入宿主细胞的转化方法称为电穿孔法。通过此种方法制备的感受态细胞转化效率高、产量大,尤其适合在短时间内将少量样品转入大肠杆菌内。
E.coli DH5α在使用pUC系列质粒载体进行DNA转化时,利用β-半乳糖苷酶活性 (α-互补性) ,应用蓝白斑方法可以很容易鉴别重组体菌株。由于菌株无lacl q,故不需要IPTG。因此,当制作基因文库或进行亚克隆时,可以使用X-Gal筛选重组DNA或重组质粒。
X-Gal : 5-Bromo-4-Chloro-3-Indolyl-β-D-Galactoside
 
■ 细胞浓度
>1×1010 bacteria/ml
 
■ Genotype
E. coli DH5α:F-, φ80dlacZ Δ M15, Δ ( lacZYA -argF )U169, deoR , recA1 , endA1 , hsdR17 (rK-, mK+), phoA , supE44 , λ-, thi -1 , gyrA96 , relA1
 
■ 保存
-80℃。
注意: -80℃或更低温度下保存。如果保存温度不能恒定,转化降低将会降低。请使用附带的pUC19 对照质粒来确认保存细胞的转化效率。不能液氮保存。
 
■ 质量标准
1. 转化效率
转入10 pg 的pUC19,涂于含有A+ 的选择培养基进行筛选。
转化效率 : >1 x 109 transformants /μg pUC19
2. β-半乳糖苷酶的α-互补性
转化pUC19 DNA时,含有100 μg/ml ampicilin 和 60 μg/ml X-Gal的L-琼脂平板上出现蓝色菌落。
 
■ 注意事项
1. 将Electro-Cells从-80℃取出后请立即置于干冰/乙醇中。使用前保存于干冰/乙醇中。
2. 当使用50 μl Electro-Cells时,添加不多于10 ng的高纯度样品DNA。否则会降低转化效率。
3. 导入分子量较大的DNA (>7 kb) 时,转化效率降低。
4. 当改变实验规模时,适当改变反应条件。
5. L-broth 或φb-broth可替代SOC培养基。此时,转化效率可能会降低。
·L-broth:      Ingredient   per liter water
 Tryptone   10 g
 Yeast extract   5 g
 NaCl   5 g
用1 N NaOH调整pH到7.5并高压灭菌。
·φb-broth:      Ingredient   per liter water
 Tryptone   20 g
 Yeast extract   5 g
 MgSO4·7H2O   5 g
用1 N KOH调整pH7.5左右并高压灭菌。
6. 稀释时,使用“使用方法4”中加入的SOC培养基。
7. 当使用X-Gal时:
   ·将20 mg/ml X-Gal (溶解于二甲基甲酰胺) 按200~300 μl/100 ml的比例加入到agar medium中。
8. DH5α可作为M13mp载体的复制。但由于不携带F因子,因而不能形成菌斑。
9. 不建议将解冻的感受态细胞再次冷冻保存。但是,如果再次冻结不可避免,将细胞置于干冰/乙醇中迅速冷冻,置于-80℃保存。但是,转化效率可能会降低至少一个数量级。
 

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