E.coli HST16CR Competent Cells酶试剂盒Takara


E.coli HST16CR Competent Cells
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Takara 9131 E.coli HST16CR Competent Cells 100 μl×10 ¥601 E.coli HST16CR Competent Cells E.coli HST16CR Competent Cells E.coli HST16CR Competent Cells
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■ 制品内容E.coli HST16CR Competent Cells
E.coli HST16CR Competent Cells 100 μl × 10
pUC19 plasmid (0.1 ng/μl) 10 μl
SOC media* 1 ml × 10
*SOC Media:     2%   Tryptone
 0.5%   Yeast extract
 10 mM   NaCl
 2.5 mM   KCl
  10 mM   MgSO4
10 mM   MgCl2
 20 mM   Glucose
 
■ 制品说明
感受态细胞是具有摄取外源DNA能力的受体菌,可摄取基因重组质粒等,是转化时的重要工具。Takara在Hanahan’s method基础上进行了改良,制备出的E. coli HST16CR Competent Cells。
E. coli HST16CR Competent Cells是以E. coli HST08 Premium Competent Cells(Code No. 9128)为基础,获得的ColE1 ori的复制相关基因 pcnB缺失的具有高转化效率的菌株。由于pcnB基因的缺失,能够降低pUC系列载体的拷贝数,可有效用于难以克隆的含跨膜结构域蛋白质等、克隆基因对大肠杆菌生长有抑制作用的高拷贝载体克隆。
因为是以E. coli HST08 Premium Competent Cells为基础,缺失外源甲基化DNA的基因群(mrrmcrBChsdRMS )和mcrA,因此可用于甲基化DNA的克隆、基因组文库构建和常规亚克隆。另外,使用pUC系列载体转化时,可通过β-半乳糖苷酶的α-互补性,在培养基中添加X-gal进行蓝白筛选,以筛选重组体。
X-Gal:5-Bromo-4-Chloro-3-Indolyl-β-D-Galactoside
 
■ 细胞浓度
1-2×109 bacteria/ml
 
■ Genotype
E. coli HST16 CR: : F-, endA1 , supE44 , thi –1, recA 1, relA 1, gyrA 96, phoA ,Φ80d lacZ ΔM15,Δ( lacZYA – argFU169 , Δ ( mrr – hsdRMS – mcrBC ), ΔmcrA pcnB, λ
 
■ 保存
-80℃。
注意: 如果不在-80℃下保存,转化效率将会降低。此时,在使用前,请使用附带的pUC19 对照质粒来确认细胞的转化效率。不能液氮保存。
 
■ 质量标准
[1] 转化效率
转化质粒载体时,转入1 ng 的pUC19 plasmid,涂于Amp+ 的L-plate进行筛选。
转化效率 : >1 x 108 colonies/μg pUC19 plasmid
[2] β-半乳糖苷酶的α-互补性
转化pUC19 plasmid时,确认含100 μg/ml ampicilin 和 60 μg/ml X-Gal的L-agar plate上出现蓝色菌落。
 
■ 注意事项
1. 取出所需管数的感受态细胞后,搬运时请置于干冰/乙醇中。
2. 可使用1.5 ml microcentrifuge tubes代替14 ml 圆底 tubes (BD Code: 352059 或 352057,等),但效率可能会降低。
3. 当使用100 μl感受态细胞时,加入不超过10 ng的高纯度质粒DNA。增加DNA量转化效率会降低。
4. 当改变感受态细胞使用体积或tube类型时,需要研讨适当的反应条件。例如,当使用1.5 ml microcentrifuge tubes时,请42℃加热60秒。
5. 可以使用L-broth 或φb-broth替代SOC培养基。此时,转化效率可能会降低。
  ·L-broth:10 g Tryptone, 5 g Yeast extract, 5 g NaCl,用1 M NaOH调整pH到7.5,加水使终体积为1 L,高压灭菌。
  ·φ b-broth:5 g Yeast extract, 20 g Tryptone, 5 g MgSO4·7H2O,用1 M KOH调整pH到7.5,加水使终体积为1 L,高压灭菌。
  ·L-plate: 10 g Tryptone, 5 g Yeast extract, 5 g NaCl,用1 M NaOH调整pH到7.5,添加agar到1.5%,加水使终体积为1 L,高压灭菌。
6. 当加入X-Gal时,按照以下操作进行:
将 20 mg/ml X-Gal (溶解于二甲基甲酰胺) 按200-300 μl/100 ml 的比例加入到agar media中。
7. 不建议将解冻的感受态细胞再次冷冻保存。但是,如果再次冻结不可避免,将细胞置于干冰/乙醇中迅速冷冻,置于-80℃保存。但是,转化效率可能会降低至少一个数量级。