BCA蛋白浓度测定试剂盒

BCA蛋白浓度测定试剂盒

¥1650.00

货号:BL521C

规格:5000T

品牌:Jinpan

商品详情:

产品简介

BCA蛋白浓度测定试剂盒的原理是蛋白质分子中肽键结构在碱性环境下能与Cu2+生产络合物,并将Cu2+还原成Cu+,而BCA试剂可以特异性地与Cu+结合,形成稳定的有颜色的复合物,并在562nm处有最大的光吸收值,该复合物颜色的深浅与蛋白质浓度成正比,可以根据吸收值的大小来测定蛋白的含量BCA 蛋⽩浓度测定法实现了蛋⽩质浓度测定的简便、灵敏、快速和稳定性。试剂盒中提供的蛋⽩标准品为⽤户制作标准曲线提供了便利。该 BCA 蛋⽩浓度测定试剂盒可用于比色皿法检测,也可⽤于微孔板法检测。

 

产品特点

1、灵敏度高,检测浓度下限达到25µg/ml(在50-1000μg/ml浓度范围内有较好的线性关系),最小检测蛋白量达到0.5μg,待测样品体积为1-20μl

2、速度快,显色所用时间短传统的Lowry法检测速度约快4倍。

3、BCA法测定蛋白浓度的最大优点是蛋白浓度的测定可以耐受高浓度的去垢剂,可以兼容样品中高达5%SDS5%Triton X-1005%Tween 20, 60, 80。但受螯合剂和略高浓度的还原剂的影响,需确保EDTA低于10mM,无EGTA,二硫苏糖醇低于1mMβ-巯基乙醇低于0.01%

 

产品组份:

产品编号

产品名称

BL521S

BL521A

BL521B

BL521C

1

BCA试剂A

40 ml

100 ml

500 ml

2×500 ml

2

BCA试剂B

1.2 ml

3 ml

15 ml

2×15 ml

3

牛血清白蛋白(BSA)标准液(5 mg/ml)

1 ml

2x1 ml

10x1 ml

20x1 ml

4

PBS溶液

4 ml

10 ml

50 ml

100 ml

 

使用说明

一、BCA工作液配制:

将试剂A和试剂B按照体积比50:1比例混合,配成BCA工作液。如50ml 试剂A1ml试剂B混合,配成51 ml BCA工作液。两者混合时会有沉淀形成,彻底混匀后沉淀消失。

微孔板测定程序:(工作范围50-2000 μg/ml

1、蛋白标准品配制:室温完全溶解BSA蛋白标准,取20µl 5mg/ml BSA蛋白标准液用PBS溶液稀释至100µl,使其终浓度为1 mg/ml

2、按照下表配制BSA标准测定溶液:

编号

0

1

2

3

4

5

6

7

8

1 mg/ml BSA 标准溶液 μl

5 mg/ml BSA 标准溶液 μl

BSA标准溶液 µl

0

0.5

2.5

5.0

10

15

20

6

8

PBS 溶液 μl

20

19.5

17.5

15

10

5

0

14

12

BSA终浓度 μg/ml

0

25

125

250

500

750

1000

1500

2000

总体积 µl

20 µl

3、将适当体积的待测样品加入到微孔板中,并用PBS补足到20 µl

4、向微孔板中加入200 μl BCA工作液,混匀,37℃放置30分钟;

注:也可以室温放置2小时,或60℃放置30分钟。BCA法测定蛋白浓度时,颜色会随着时间的延长不断加深,并且显色反应会因温度升高而加快。如果浓度较低,适合在较高温度孵育,或适当延长孵育时间。

5、测定562 nm 处的吸光值,并记录读数;以不含BSA 的样品的光吸收值作为空白对照。

6、以A562为纵坐标,BSA含量为横坐标,绘制标准曲线,计算样品中的蛋白浓度。如果所得到的蛋白浓度不在标准曲线范围内,请稀释样品后重新测定。

试管测定程序:(工作范围50-1000 μg/ml

1、蛋白标准品配制:室温完全溶解蛋白标准品,取150µl 5mg/ml BSA蛋白标准溶液,加入600μl PBS溶液稀释至750µl,使其终浓度为1.0 mg/ml

2、按照下表配制BSA标准测定溶液:

编号

0

1

2

3

4

5

6

7

8

1 mg/ml BSA 标准溶液 μl

5 mg/ml BSA 标准溶液 μl

BSA标准溶液 µl

0

2.5

12.5

25

50

75

100

30

40

PBS 溶液 μl

100

97.5

87.5

75

50

25

0

70

60

BSA终浓度 μg/ml

0

25

125

250

500

750

1000

1500

2000

总体积 µl

100 µl

3、将适当体积的待测样品加入到试管中,并用PBS补足到100 µl

4、向试管中加入2ml BCA工作液,混匀,37℃放置30分钟;

56步骤同上。

 

注意事项:

1、BCA 蛋⽩测定法测定时颜色会随着时间的延⻓不断加深,显色反应的速度和温度有关,需注意保持定时和定温,以确保精确定量。

2、⻓期保存,若发现 BCA 试剂 或者试剂 有沉淀 37ºC 温育并伴随搅拌促使其充分溶解。如发现细菌污染,则应丢弃。

3、每次测定都需做相应的标准曲线,因为显⾊反应与温度和时间的变化有关,精准蛋⽩定量宜每次都做标准曲线。

4、为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。

 

保存条件

试剂A和试剂B室温贮存;牛血清白蛋白标准溶液-20℃贮存;PBS溶液4℃贮存。

本试剂盒有效期1年。

 

货号 BL521C
规格 5000T
品牌 Jinpan
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