pFastBac1-EGFP (杆状病毒包装阳性对照质粒) |
产品编号: D2802 |
产品包装: 1μg |
产品价格: 888.00元 |
产品简介
产品编号 |
产品名称 |
产品包装 |
产品价格 |
D2802 |
pFastBac1-EGFP (杆状病毒包装阳性对照质粒) |
1μg |
888.00元 |
pFastBac1-EGFP是以pFastBac1为基础构建的用于在昆虫细胞表达EGFP的质粒。在polyhedrin (PH)启动子的作用下,可以高效启动EGFP在昆虫细胞(如Sf9和Sf21等)中的表达。
在采用Bac-to-Bac杆状病毒表达系统表达目的蛋白时,pFastBac1-EGFP可以用作监测转染、病毒包装和目的蛋白表达效果的对照质粒。表达的EGFP有很强的绿色荧光,在荧光显微镜下可以非常方便地观察转染、病毒包装和表达的效果。
pFastBac1是基于Bac-to-Bac杆状病毒表达系统(Bac-to-Bac Baculovirus Expression System)而设计的表达载体。Bac-to-Bac杆状病毒表达系统是由Luckow等人于1993年发展的一种快速而有效产生重组杆状病毒的方法。该系统主要包括以下两个组分:(1)用于插入目的基因的pFastBac载体,目的基因如EGFP等插入后受杆状病毒特异性启动子(baculovirus-specific promoter) polyhedrin启动子调控表达;(2)含杆状病毒穿梭载体bacmid (bMON14272, 136kb)和辅助质粒(helper plasmid,用于表达转座必须的转座蛋白)的大肠杆菌DH10Bac宿主菌株(D0346)。将pfastBac重组质粒转化该菌株可发生pfastBac重组质粒中mini-Tn7元件和bacmid上的mini-attTN7发生转座,从而形成重组的bacmid。位点特异的转座会破坏宿主的lacZα基因,从而可通过蓝白斑筛选重组克隆。PCR等方法鉴定重组克隆后,提取重组的bacmid转染昆虫细胞,可以产生重组杆状病毒,并表达目的蛋白如EGFP等。扩增重组的杆状病毒并感染昆虫细胞,就可以大量表达纯化目的蛋白了。
pFastBac1-EGFP质粒的主要信息如下:
Feature Nucleotide |
Position |
f1 origin |
2-457 |
Ampicillin resistance gene |
589-1449 |
pUC origin |
1594-2267 |
Tn 7R |
2511-2735 |
Gentamicin resistance gene |
2802-3335 |
Polyhedrin promoter (PPH) |
3904-4032 |
EGFP |
4038-4757 |
SV40 polyadenylation signal |
4794-5021 |
Tn 7L |
5050-5215 |
pFastBac1-EGFP质粒(5397bp)的图谱如下:
pFastBac1-EGFP的详细图谱如下:
|
BamHI EGFP |
4031 |
|
GTGAGCAAGG |
GCGAGGAGCT |
GTTCACCGGG |
|
|
|
CACTCGTTCC |
CGCTCCTCGA |
CAAGTGGCCC |
|
|
4081 |
TCCTGGTCGA |
GCTGGACGGC |
GACGTAAACG |
GCCACAAGTT |
|
|
AGGACCAGCT |
CGACCTGCCG |
CTGCATTTGC |
CGGTGTTCAA |
|
|
4131 |
GGCGAGGGCG |
AGGGCGATGC |
CACCTACGGC |
AAGCTGACCC |
|
|
CCGCTCCCGC |
TCCCGCTACG |
GTGGATGCCG |
TTCGACTGGG |
|
|
4181 |
CTGCACCACC |
GGCAAGCTGC |
CCGTGCCCTG |
GCCCACCCTC |
|
|
GACGTGGTGG |
CCGTTCGACG |
GGCACGGGAC |
CGGGTGGGAG |
|
|
4231 |
TGACCTACGG |
CGTGCAGTGC |
TTCAGCCGCT |
ACCCCGACCA |
|
|
ACTGGATGCC |
GCACGTCACG |
AAGTCGGCGA |
TGGGGCTGGT |
|
|
4281 |
CACGACTTCT |
TCAAGTCCGC |
CATGCCCGAA |
GGCTACGTCC |
|
|
GTGCTGAAGA |
AGTTCAGGCG |
GTACGGGCTT |
CCGATGCAGG |
|
|
4331 |
CATCTTCTTC |
AAGGACGACG |
GCAACTACAA |
GACCCGCGCC |
|
|
GTAGAAGAAG |
TTCCTGCTGC |
CGTTGATGTT |
CTGGGCGCGG |
|
|
4381 |
TCGAGGGCGA |
CACCCTGGTG |
AACCGCATCG |
AGCTGAAGGG |
|
|
AGCTCCCGCT |
GTGGGACCAC |
TTGGCGTAGC |
TCGACTTCCC |
|
|
4431 |
AAGGAGGACG |
GCAACATCCT |
GGGGCACAAG |
CTGGAGTACA |
|
|
TTCCTCCTGC |
CGTTGTAGGA |
CCCCGTGTTC |
GACCTCATGT |
|
|
4481 |
CCACAACGTC |
TATATCATGG |
CCGACAAGCA |
GAAGAACGGC |
|
|
GGTGTTGCAG |
ATATAGTACC |
GGCTGTTCGT |
CTTCTTGCCG |
|
|
4531 |
ACTTCAAGAT |
CCGCCACAAC |
ATCGAGGACG |
GCAGCGTGCA |
|
|
TGAAGTTCTA |
GGCGGTGTTG |
TAGCTCCTGC |
CGTCGCACGT |
|
|
4581 |
CACTACCAGC |
AGAACACCCC |
CATCGGCGAC |
GGCCCCGTGC |
|
|
GTGATGGTCG |
TCTTGTGGGG |
GTAGCCGCTG |
CCGGGGCACG |
|
|
4631 |
CAACCACTAC |
CTGAGCACCC |
AGTCCGCCCT |
GAGCAAAGAC |
|
|
GTTGGTGATG |
GACTCGTGGG |
TCAGGCGGGA |
CTCGTTTCTG |
|
|
4681 |
AGCGCGATCA |
CATGGTCCTG |
CTGGAGTTCG |
TGACCGCCGC |
|
|
TCGCGCTAGT |
GTACCAGGAC |
GACCTCAAGC |
ACTGGCGGCG |
|
|
HindIII |
4731 |
CTCGGCATGG |
ACGAGCTGTA |
|
CTTGTCGAGA |
AGTACTAGAG |
|
GAGCCGTACC |
TGCTCGACAT |
|
GAACAGCTCT |
TCATGATCTC |
pFastBac1-EGFP中没有的酶切位点(Restriction enzymes that do not cut pFastBac1-EGFP)包括:
AatII |
Acc65I |
AfeI |
AflII |
AgeI |
ApaI |
AscI |
AsiSI |
BbvCI |
BfuAI |
BlpI |
BmgBI |
BmtI |
BsiWI |
BspDI |
BspMI |
BssHII |
BstAPI |
BstBI |
BstEII |
Bsu36I |
ClaI |
CspCI |
Eco53kI |
EcoNI |
EcoO109I |
EcoRI |
FseI |
KasI |
KpnI |
MluI |
NarI |
NdeI |
NheI |
NotI |
NruI |
NsiI |
PacI |
PaeR7I |
PflMI |
PluTI |
PmeI |
PmlI |
PpuMI |
PshAI |
PspOMI |
PspXI |
PstI |
PvuII |
RsrII |
SacI |
SalI |
SbfI |
SexAI |
SfiI |
SfoI |
SgrAI |
SmaI |
SpeI |
SphI |
SrfI |
StuI |
SwaI |
TspMI |
XbaI |
XcmI |
XhoI |
XmaI |
ZraI |
pFastBac1-EGFP中的单酶切位点(Restriction enzymes that cut pFastBac1-EGFP once)包括:
NgoMIV |
G`CCGG,C |
127 |
|
BsmBI |
CGTCTCN`NNNN, |
3182 |
NaeI |
GCC|GGC |
129 |
|
PflFI |
GACN`N,NGTC |
3228 |
BanII |
G,RGCY`C |
157 |
|
Tth111I |
GACN`N,NGTC |
3228 |
BsaHI |
GR`CG,YC |
836 |
|
BbsI |
GAAGACNN`NNNN, |
3757 |
PvuI |
CG,AT`CG |
1005 |
|
SnaBI |
TAC|GTA |
3881 |
FspI |
TGC|GCA |
1153 |
|
AccI |
GT`MK,AC |
3883 |
AlwNI |
CAG,NNN`CTG |
1852 |
|
BstZ17I |
GTA|TAC |
3884 |
BseYI |
C`CCAG,C |
1960 |
|
BsmFI |
GGGAC(N)10`NNNN, |
4000 |
TfiI |
G`AWT,C |
2290 |
|
BamHI |
G`GATC,C |
4032 |
SapI |
GCTCTTCN`NNN, |
2381 |
|
NcoI |
C`CATG,G |
4036 |
BspQI |
GCTCTTCN`NNN, |
2381 |
|
HindIII |
A`AGCT,T |
4758 |
MscI |
TGG|CCA |
2709 |
|
MfeI |
C`AATT,G |
4873 |
BstXI |
CCAN,NNNN`NTGG |
2713 |
|
HpaI |
GTT|AAC |
4886 |
SacII |
CC,GC`GG |
2766 |
|
BclI |
T`GATC, |
5022 |
BaeI |
,(N)5`(N)10ACNNNNGTAYC(N)7,(N)5` |
2798 |
|
AvrII |
C`CTAG,G |
5037 |
EcoRV |
GAT,ATC |
2825 |
|
|
|
pFastBac1-EGFP的全序列信息请参考上海金畔生物科技有限公司的网站上该质粒的信息。
pFastBac1-EGFP质粒使用上海金畔生物科技有限公司研发的LipoInsect™转染试剂(C0551)转染SF9细胞的效果参考图1。
图1. pFastBac1-EGFP质粒转化DH10Bac,获得的重组bacmid用上海金畔生物科技有限公司生产的LipoInsect™转染试剂(C0551)转染SF9细胞4天后的效果图。左侧为明场照片,右侧为荧光照片。
关于昆虫细胞系统的蛋白表达与纯化的详细介绍,请见如下网页: http://www.beyotime.com/support/insect cell.htm。
包装清单:
产品编号 |
产品名称 |
包装 |
D2802 |
pFastBac1-EGFP (杆状病毒包装阳性对照质粒) |
1μg |
— |
说明书 |
1份 |
保存条件:
-20℃保存。
注意事项:
本质粒未经上海金畔生物科技有限公司书面许可不得用于任何商业用途,也不得移交给订货人所在实验室外的任何个人或单位。
本产品仅限于专业人员的科学研究用,不得用于临床诊断或治疗,不得用于食品或药品,不得存放于普通住宅内。
为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。
使用说明
使用说明:
1. 首次使用时请先取少量本质粒转化大肠杆菌,进行质粒小量、中量或大量抽提后再用于后续用途。抽提获得的质粒可以通过酶切电泳进行鉴定,或通过测序进行鉴定。
2. 本质粒通常用于转化大肠杆菌DH10Bac用于制备重组bacmid。
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产品名称 |
包装 |
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杆状病毒穿梭载体bacmid小量抽提试剂盒 |
50次 |
D0346 |
DH10Bac甘油菌(重组Bacmid制备用菌株) |
200μl |
D2802 |
pFastBac1-EGFP (杆状病毒包装阳性对照质粒) |
1μg |
C0551-0.5ml |
LipoInsect™转染试剂 |
0.5ml |
C0551-1.5ml |
LipoInsect™转染试剂 |
1.5ml |
C0551-7.5ml |
LipoInsect™转染试剂 |
5×1.5ml |
产品图片