植物线粒体膜蛋白提取试剂盒

上海金畔生物科技有限公司提供植物线粒体膜蛋白提取试剂盒 ,欢迎访问官网了解更多产品信息。

产品编号 C5037
英文名称 Plant Mitochondrial Membrane Protein Extraction Kit
中文名称 植物线粒体膜蛋白提取试剂盒
保存条件 :-20℃保存,有效期12个月。
产品介绍 线粒体(Mitochondria)是细胞呼吸的主要场所,细胞活动所需的能量主要由在线粒体内进行的氧化所产生的能量来供应。 本产品可从植物样本中提取线粒体膜蛋白,操作简单快捷,可在40-45min内完成操作,含有蛋白酶抑制剂,可以有效抑制蛋白的降解,并维持原有的蛋白间相互作用。该试剂盒主要用于从植物样本中提取线粒体膜蛋白,提取出来的膜蛋白具有天然活性,提取的蛋白可用于WesternBlot、免疫组化、酶活性测定等下游实验。该试剂盒仅用于科研领域,不宜用于临床诊断或其他用途。 本产品仅用于科研领域,不用于临床诊断。

总RNA提取试剂

总RNA提取试剂

¥250.00

货号:BS258A

规格:100ml

品牌:biosharp

Total RNA Isolation Reagent

 RNA 提取试剂   

产品简介:

本产品在经典配方的基础上进行升级,适用于细胞或组织总RNA抽提的试剂。TRI Reagent 能很好提取动物细胞或组织及细菌的总RNA,但对植物组织RNA的提取有选择性。模式植物(拟南芥,小麦,烟草,玉米,大豆)能提取较好的RNA。一些多糖多酚含量高的植物(西红柿,银杏,梧桐,毛白杨,棉花等)叶片使用TRI Reagent不能提取 RNA

TRI Reagent 可以抽提长达15 kbRNA,也可以抽提microRNA等小RNA,抽提小 RNA时宜-70℃沉淀过夜。

TRI Reagent抽提所得RNA DNA和蛋白污染。每一百万细胞约可得5-15µg RNA;每毫克组织约可得1-10µg RNA,产量因细胞和组织不同而异。

TRI Reagent抽提所得RNA可直接用于Northern,点杂交,纯化mRNA,体外翻译,RNase protein assaycDNA克隆以及RT-PCR,也可用于基因表达芯片分析,高通量测序等对RNA质量较高的情况。

使用方法:

1、细胞裂解或组织匀浆。

1)贴壁细胞:吸尽培养液,每 10cm2细胞加入1ml TRI Reagent。一般6孔板每孔加 1ml12孔板每孔加0.5ml,晃动 3-5 下,再用枪吹打 2-3下,确保全部裂解,然后吸至离心管中。

2)悬浮细胞:离心收集细胞,吸尽液体,每五百万至一千万动植物或酵母细胞或一千万细菌,加入1ml TRI Reagent。用枪吹打或适当涡旋,确保全部裂解。某些酵母和细菌如裂解不充分,可用匀浆器匀浆,确保全部裂解。

3)组织

1)  植物组织:植物叶片直接放入研钵中,加入少量液氮,迅速研磨成粉末,每50-100mg 植物叶片加入1ml TRI Reagent

注:经典模式植物如拟南芥、烟草、小麦、玉米等植物叶片能很好地提取 RNA;但一些多糖多酚植物,如西红柿、棉花、毛白杨等,不能使用 TRI Reagent 提取 RNA

2)  动物组织:按 10-30mg 组织加入 1ml TRI Reagent,用电动匀浆器或者一次性研磨杵充分匀浆。

2、对于某些蛋白,多糖或脂含量很高的细胞或组织,TRI Reagent裂解后可能会有不溶物或油脂状漂浮物。需12,000g4℃离心10分钟,然后吸取澄清的裂解产物至一新的离心管中。

3、室温放置5分钟,使样品充分裂解。

4、每毫升TRI Reagent0.2ml氯仿,涡旋混匀或猛烈晃动15秒,室温放置2-3分钟。

512,000g4℃离心15分钟,然后吸取含总 RNA 的上层无色水相至一新的离心管中, 每毫升TRI Reagent约可吸取0.5-0.55ml

6、加入与上清等体积的冰冷异丙醇,颠倒数次混匀,室温沉淀10分钟。如果希望提取 microRNA等小RNA,推荐-70℃沉淀过夜。

712,000g4℃离心10分钟,在管底可见RNA沉淀,弃上清。

8、每毫升最初的TRI Reagent加入1ml 75%乙醇(DEPC 水配制),涡旋或颠倒混匀,

97,500g 4℃离心5分钟,弃上清。再用离心机甩一下(>5,000rpm, 离心1秒),小心吸尽液体。

10、待 RNA 晾干后,加入20-50 μl DEPC水溶解,-70℃冻存。注意:切勿让RNA过分干燥,否则将极难溶解,且测出的A260/280值会低于1.6

注意事项:

1、需自备氯仿,异丙醇,DEPC水,75%乙醇(DEPC水配制)。

2、所有离心管,枪头及相关溶液都必须无RNA酶污染。耐高温器物可150℃烘烤4小时以去除RNA酶,其它器物去除RNA酶可考虑用0.01%DEPC水浸泡过夜,然后灭菌,烘干。溶液需用DEPC水配制。

3、使用冻存的细胞或组织抽提总RNA的效果通常比新鲜的细胞或组织差一些。因为在细胞或组织冻融过程中一些细胞或组织内的RNase会被释放出来并剪切样品。如果不能及时抽提RNA,推荐先加入适量TRI Reagent,并裂解样品后冻存。

4、必须戴一次性手套操作,且尽量不要对着RNA样品说话,以防RNA酶污染。

5TRI Reagent含有毒物质苯酚,避免接触皮肤或吸入。为防止溅入眼睛,请戴防护眼镜或使用透明保护屏。如皮肤接触TRI Reagent,请立即用大量去垢剂和水冲洗,如仍有不适,请听取医生意见。

6、为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。

保存方法:

4℃保存,一年有效。

货号 BS258A
规格 100ml
品牌 biosharp
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  • 总RNA提取试剂

RiboLace Mod. 1–核糖体提取试剂盒

核糖体是细胞内一种核糖核蛋白颗粒(ribonucleoprotein particle),主要由RNA和蛋白质构成,其唯yi功能是按照mRNA的指令将氨基酸合成蛋白质多肽链,所以核糖体是细胞内蛋白质合成的分子机器。核糖体无膜结构,主要由蛋白质(40%)和RNA(60%)构成。核糖体按沉降系数分为两类,一类(70S)存在于细菌等原核生物中,另一类(80S)存在于真核细胞的细胞质中。

RiboLace Mod. 1核糖体提取试剂盒是一款由Immaginabiotechnology公司基于嘌呤霉素(嘌呤霉素是一种蛋白质合成抑制剂,它具有与tRNA分子末端类似的结构,能够同氨基酸结合,代替氨酰化的tRNA同核糖体的A位点结合)通过无抗体、无融合标签蛋白的Pull-Down技术来分离活性核糖体的试剂盒。

 

 

操作使用

 

实验流程图

 

(1)实验前准备

另外需自备的材料

10% 脱氧胆酸钠(DNase/RNase free water)

cycloheximide

RiboLock RNase抑制剂

SUPERase•In™ RNA酶抑制剂

RNA酶和DEPC水

酸酚氯仿混合液

Nanodrop ND-1000 UV-VIS分光光度计

糖原蓝色染料

异丙醇

微型离心机和无RNA酶微量离心管(0.2 mL和1.5 mL)

旋转器

用于1.5mL试管的磁力支架

 

a. 稀释RiboLace smart probe:在RiboLace smart probe中加入316.5 μL B-Buffer,然后在冰上解冻。使用后,建议将混合物等分,并储存于-80℃,避免两次以上的反复冻融。

b. 在裂解缓冲液Lysis Buffer使用前添加以下成分:脱氧胆酸钠(1 %终浓度)、5 U/mL DNase I和200 U/mL RiboLock RNase抑制剂。

(2)裂解

贴壁细胞裂解

a.裂解前,使用10 µg/mL的环己酰亚胺(CHX)在37℃下处理细胞5 min。我们建议使用70-80 %汇合的细胞。CHX处理可提高核糖体亲和纯化的效率,可选步骤。如果您使用的是人体或小鼠组织,请注意裂解缓冲液和W-缓冲液中都含有CHX(10 ng/mL)。

b.孵育后,将细胞置于冰上,并用含有CHX(20 µg/mL)的冷PBS快速洗涤。

c.用移液枪去除PBS

d.将加入了脱氧胆酸钠(1 %终浓度)、5 U/mL DNase I和200 U/mL RiboLock RNase抑制剂的裂解液加入细胞培养皿中进行裂解,并用力刮擦(适当的机械刮擦对有效裂解很重要)。

e.1.5 mL离心管中收集细胞裂解物,并在20000 g离心5 min。

f.将上清液转移到新的试管中,冰浴20 min

g.使用Nanodrop分光光度计,取1 µL细胞裂解液,检测细胞裂解液在260 nm处的吸光度(设置Nanoddrop的“核酸”功能)

悬浮细胞裂解

a.裂解前,使用10 µg/mL的环己酰亚胺(CHX)在37℃下处理细胞5 min。我们建议使用70-80 %汇合的细胞。CHX处理可提高核糖体亲和纯化的效率,可选步骤。如果您使用的是人体或小鼠组织,请注意裂解缓冲液和W-缓冲液中都含有CHX(10 ng/mL)。

b.收集细胞,在4℃下以950 g离心5 min,弃培养基,用含有CHX的冷PBS(20 µg/mL)快速洗涤细胞。

c.收集并在4℃下以950 g离心5 min。除去上清液,并用加入了脱氧胆酸钠(1 %终浓度)、5 U/mL DNase I和200 U/mL RiboLock RNase抑制剂的裂解液将细胞重悬。

d.通过G26针(约10次)使细胞裂解而不产生气泡。

e.20000 g离心5 min。

f.将上清液转移到新的试管中,冰浴20 min

g.使用Nanodrop分光光度计,取1 µL细胞裂解液,检测细胞裂解液在260 nm处的吸光度(设置Nanoddrop的“核酸”功能)

组织裂解

a. 用研钵和研杵在液氮下将纸巾碾碎。回收粉末于1.5 mL试管中

b. 10 mg组织加入800 µL 组织裂解液 (IMMAGINA cat. nr. #RL001-2),请注意裂解缓冲液和W-缓冲液中都含有CHX10 ng/mL)。

c. 20000 g离心2 min并收集上清液。

d. 再次以20000 g离心上清液5 min,并收集上清液,冰浴20 min。

e. 使用Nanodrop分光光度计,取1 µL细胞裂解液,检测细胞裂解液在260 nm处的吸光度(设置Nanoddrop的“核酸”功能)

(3)磁珠处理

a. 从4°C下取出RiboLace磁珠,并将试管置于RT下至少30分钟。

b. 将RiboLace磁珠管涡旋30秒以上。

c. 加入90 µL RiboLace磁珠至新的1.5 mL试管中。最终体积=90 µL x N(N=样品数量),随后置于磁力架上,去除上清液。

d. 取下试管,用等体积(90 µL x N)的OH缓冲液洗涤RiboLace磁珠5分钟,然后弃掉上清液。

e. 向离心管中加入900 µL不含核酸酶的水洗涤磁珠。

f. 加入体积为(90 µL x N)的B-缓冲液洗涤珠子,3分钟,共两次。将试管放于磁力架上至少1分钟,然后弃上清液。

g. 加入(30 µL x N)体积的稀释的RiboLace smart probe,1400 RPM室温孵育1 h,注意不要让磁珠沉淀,在孵育期间,可以进行核酸酶处理的步骤。

h. 另取2 µL 已稀释的RiboLace smart probe保存于冰上,作为后续验证。

i. 孵育后,将试管放在磁力架上,留存3 µL上清液作为验证。

j. 向管中加入一定体积(3 µL x N)mPEG,在室温下在振荡器中混匀15 min。注意不要让磁珠沉淀。

k. 将试管置于磁力架上2-3 min,弃上清液,加入500 µL不含核酸酶的水洗涤。

l. 加入500 µL W缓冲液清洗磁珠,两次。

m. 加入200 µL的W缓冲液将RiboLace磁珠重新悬浮,并根据样品的(N)个数将结合的磁珠等分。注意不要让磁珠变干。

n. 结合效率的预估:将孵育后的上清液与未与磁珠孵育的RiboLace smart probe在270 nm(Nanodrop ND-1000)处的吸光度进行比较,可以估计磁珠结合效率(预计吸光度降低约10-50%)。

(4)核酸酶处理

a. 将W缓冲液加入总体积为0.1-0.3 A. U(260nm)的裂解液,至最终体积为150 µL。

b. 加入0.3 µL Stabilizing Nux Solution (SS),吸打混匀。

c. 取2 mL管,加入1.5 µL核酸酶(Nux),并加入98.5 µL W缓冲液(WB)。用移液枪吸打5次,使稀释的Nux溶液充分混匀。

d. 加入稀释的核酸酶(Nux)溶液于1.5 mL离心管中,25°C处理样品45 min,核酸酶(Nux)溶液使用体积(µL)为A.U x 5。

e. 加入0.5 µLSUPERase•In™ RNA酶抑制剂,冰浴10 min。

(5)核糖体Pull-Down

仅在添加细胞裂解液之前,去除W缓冲液(步骤3.m中)

a. 向步骤3.m中处理过的磁珠中加入处理过的细胞裂解液并充分混合。

b. 4°C,慢速(3 rpm)孵育70分钟。

c. 取出离心管,不要离心,置于冰浴的磁力架上,保持在冰上操作,分离磁珠。

注意不要将磁珠从磁力架上取下,也不要触摸磁珠。

d. 500 µL W缓冲液小心清洗磁珠两次。

e. 从磁力架上取下,并用200 µL W缓冲液将磁珠重悬。

f. 将磁珠悬浮液转移至新的不含核酸酶的1.5 mL离心管中。

(6)核糖体分离

a. 向磁珠悬浮液中加入20 µL 10%SDS和5 µL蛋白酶K,并在37°C水浴75 min。

b. 加入225 µL酸性苯酚、氯仿、异戊醇混合物。

c. 涡旋混匀,14000 g离心5 min。

d. 如果离心后没有分离,可加入20 µL 2 M NaCl(DEPC水),再次离心。

e. 保留水相并将其转移至新的瓶中。

f. 加入500 µL异丙醇和2 µL糖源蓝色染料。

g. 混合并室温孵育3 min,然后在-80°C下储存:

至少2小时或过夜。

h. 4°C下离心(20000 g)30 min。

i. 加入5 µL无核酸酶水将RNA沉淀重悬。

j. 使用PAGExt试剂盒(Cat. No ##KGE002_12)进行RPFs PAGE纯化。

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品牌

产品名称

货号

反应次数

代理商

Immaginabiotechnology

RiboLace Mod. 1

#RL001_Mod. 1_12

12

上海金畔生物科技有限公司

 

常见问题

1. 在进行RiboLace Pull-Down之前,需要用环己酰亚胺处理细胞吗?

答:CHX(环己酰胺)存在于试剂盒中包含的裂解液(LB)以及W缓冲液(WB)中。RiboLace在使用或不使用环己酰亚胺的情况下都能很好地发挥作用。也就是说,细胞是否添加CHX处理取决于实验设置。一些客户在起始密码子周围发现了由于CHX引起的P位点周期性伪影。相反,CHX可以使核糖体保护片段的长度在28个核苷酸处向更均匀的峰值移动。根据我们的经验,20 µg/mL的CHX略微改善了P位点沿编码区的分辨率周期性。例如,从没有进行CHX处理的快速冷冻脑组织中获得了良好的P位点周期性。如果您的样品易流失核糖体,我们建议增加W缓冲液中的CHX浓度(目前为20 µg/mL,至40 µg/mL),并在每个W缓冲液中加入30 mL CHX储备溶液(10 mg/mL)。

 

2. 应该如何冷冻Ribolace实验的样品?

答:对于使用CHX裂解细胞,我们建议在进行RiboLace之前进行细胞裂解,并将其保存在-80的温度下,保存时间最多1-2个月。

对于不使用CHX裂解细胞,我们建议在进行RiboLace之前,快速冷冻并储存在-80℃下,最多1-2个月。

对于组织样品,我们建议在进行RiboLace之前,快速冷冻组织并将样品储存(-80℃)最多1-2个月。

 

3. 不能在一天内完成所有的步骤。处理过的磁珠可以储存并第二天继续吗?

答:是的,可以停止。我们建议将磁珠保持在含有RiboLace smart probe的溶液中,即在磁珠分离和加入mPEG之前。在室温1400 rpm孵育1 h后,可以将磁珠在4℃下储存过夜,不要冷冻。

 

4. RiboLace Mod. 1适用于哪些物种?

答:一般来说,RiboLace在真核细胞和组织上效果良好,截至目前,已在哺乳动物细胞、小鼠和昆虫组织中得到验证。

 

5. 试剂盒到货后有效期多久?

答:12个月

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产品

货号

规格

描述

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AHARIBO Module RNA

#M-AHA003-R

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6kit

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#M-AHA003-W

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#CA001

6kit

Library prep for Oxford Nanopore Sequencing

 

Nvigen K61003-快速提取cfDNA专业技术

说起肿瘤、癌症,已经不再像多年前一样让谈癌色变,但仍旧为人们所恐惧。成功治疗肿瘤还是以早发现早治疗为主。那么尽早检测和发现肿瘤便是*的核心。液体活检(Liquid biopsy)的检测方法,可以捕获到进入血液的其它细胞或DNA,从而替代了疾病的诊断,例如肿瘤。近比较火热的液体活检有:cfDNA(Circulating cell-free DNA)、CTC和外泌体的检测。

 

 

对于CTC和外泌体的信息,我们已发表过2篇文章描述,欲知详情,请浏览:

 

 

游离循环DNA(cfDNA)存在于血液,包含双链DN**段,绝大多数是短链,而且通常浓度很低。在健康人体中,血浆cfDNA被认为来自于正常的造血细胞。cfDNA的循环半衰期很短,这提示它需要在细胞凋亡时被持续的释放。在特定的生理条件或疾病过程中,有相当一部分cfDNA会与在健康的时候不同,基于这一结果,近年来cfDNA已被用于无创性诊断。在孕妇中,约有10%-15%的cfDNA来自于胎盘滋养层,现在cfDNA多用于在高危孕妇中筛查胎儿的遗传缺陷,这就是是当前火热的无创唐氏筛查的基础!在肿瘤病人中,通过cfDNA的量化突变来检测肿瘤已被越来越多的人认可。而在移植方面,移植排斥反应也与供体移植器官中的cfDNA水平相关。

 

Figure.2 血液中的复杂组分

而循环肿瘤DNA(ctDNA)是来源于肿瘤细胞的cfDNA,属于cfDNA的一种类型。两者为包含关系,ctDNA仅为cfDNA很小的一部分。ctDNA来自肿瘤细胞的体细胞突变,不同于遗传突变的是其存在于体内每个细胞。往往在提到循环肿瘤DNA的时候,大家往往简单的将它认为是肿瘤患者外周血中游离的DNA。其实不然,虽然ctDNA所占cfDNA的比例波动范围非常大,约0.01%~90%,但实际上,大多数ctDNA在cfDNA中的占比约为0.2%。

 

如何有效分离提取cfDNA(ctDNA)用于检测,已成为科研工作者必须突破的问题!

 

 

Nvigen是一种纳米技术,支持个性化医疗创新。

Nanopsy™是由先进的分子工程纳米粒子Magvigen™和Myquvigen™实现的,能够有效地从蛋白质、细胞和核酸中捕获和识别分子信息。我们正在将nanopsy™开发成可在成百上千家医院部署的、自动化和FDA批准的临床仪器和试剂盒,将致命的癌症转变为可控制的疾病。

用链霉亲和素珠和生物素探针捕获DNA
Magvigen™、Myquvigen™和Maxvigen™纳米颗粒是多功能和可生物降解的磁性和/或荧光磁性纳米颗粒,在加利福尼亚大学、伯克利大学、斯坦福大学和NVIGEN经过18年的严格研究和开发后达到。

上海金畔生物Nvigen K61003-快速提取cfDNA专业技术

捕获血浆中cfDNA的磁珠

 

 

产品名称 应用 目录号 规格/价格(1ml, USD)
MagVigen™ – Plasma DNA Capture Kit 对血浆中的 cfDNA 的捕获 
 
K61003

Sizes (Plasma)
100 ml $499.00

1,000 ml $3,999.00

 

 

产品介绍: MagVigen™ Plasma DNA Capture 磁性纳米颗粒专为捕获血液中的cfDNA而设计,为科研, 分子检测工作者提供了一种简单、快速、的血液cfDNA提取方法。整个实验过程中无需离心或者过柱。DNA提取可以线性比例扩大,输入血浆范围为100 uL至10mL 。分离出的cfDNA 可以用Agilent Bioanalyzer 直接定量分析。

下游应用: PCR, DNA测序,二代测序技术(NGS), 以及测序文库构建。

产品特点:

  • 高产量
  • 高质量DNA提取
  • 工作流程简单
  • 血浆体积可线性扩展
  • 质量稳定,提取结果高度一致

实验例子:

Figure 1. cfDNA extraction yield and size from 1.5 ml plasma samples with (blue) and without (red) spiking in DNA. Calculated yield of spiking in DNA by subtraction of endogenous cfDNA from total DNA were 80% using picogreen assay and 91% with bioanalyzer quantification.

Figure 2. cfDNA extracted from 100 µl to 5 ml of plasma was quantified by pico-green analysis.

Figure 3. cfDNA extraction yield was quantified by pico-green analysis following DNA isolation with the MagVigen™ Plasma DNA Capture Kit and kit C.

Figure 4. Beta-globin level and GAPDH levels were estimated by PCR analysis.

 

 

 

线粒体提取试剂盒

上海金畔生物科技有限公司提供线粒体提取试剂盒 ,欢迎访问官网了解更多产品信息。

产品编号 C5032
英文名称 Mitochondrial Extraction Kit
中文名称 线粒体提取试剂盒
别    名 Mitochondria Isolation Kit;   线粒体分离试剂盒;
线粒体提取试剂盒
Specific References  (1)     |     C5032 has been referenced in 1 publications.
[IF=6.819] Chen, Xin. et al. Activation of cDCs and iNKT cells contributes to triptolide-induced hepatotoxicity via STING signaling pathway and endoplasmic reticulum stress. CELL BIOL TOXICOL. 2022 Dec;:1-20  
PubMed:36520315

保存条件 Store at 2-8℃ for one year.
注意事项 This product as supplied is intended for research use only, not for use in human, therapeutic or diagnostic applications.
产品介绍 意义 线粒体是半自主性细胞器,不仅是细胞内氧化磷酸化和合成三磷酸腺苷(ATP)的主要场所,为细胞的活动提供能量,而且在许多生命活动中具有重要调控作用。因此,准确和全面分离保持正常活性的线粒体已经成为许多研究的前提。
原理 利用专门试剂温和匀浆组织和细胞,再采用差速离心法从匀浆中分离完整线粒体;利用专门试剂,配合超声波破碎线粒体,可以得到保持活性的线粒体酶。
线粒体提取试剂盒 (Mitochondria Isolation Kit) 用于从动物细胞或组织中分离出完整而纯化的线粒体。适合于动物软组织(肝或脑组织)和硬组织(肌肉)以及培养细胞的线粒体的分离提取。其制备物产量高,可用于细胞凋亡、信号传递、代谢和蛋白组学等的研究。

本产品仅用于研究用途,不用于人类、治疗或诊断应用。