小鼠骨髓中性粒细胞分离液试剂盒

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上海金畔生物科技有限公司提供小鼠骨髓中性粒细胞分离液试剂盒 ，欢迎访问官网了解更多产品信息。

产品编号 CS125
英文名称 Neutrophils Separation Medium Kit (Mouse bone marrow)
中文名称 小鼠骨髓中性粒细胞分离液试剂盒
保存条件 室温避光保存，2年有效
注意事项 This product as supplied is intended for research use only, not for use in human, therapeutic or diagnostic applications.
产品介绍 试剂盒组成：
骨髓中性粒细胞分离液：    200mL
红细胞裂解液：    100mL
全血及组织稀释液：    200mL
细胞洗涤液：    200mL
产品简介：
本产品是一种用于分离各种动物骨髓中性粒细胞的无菌、低内毒素水平的密度梯度分离液。无菌条件下所分离的细胞可用于免疫学检测。其分离原理是根据细胞的密度差异将葡聚糖（右旋糖酐）和泛影酸钠按一定比例混合，调整比重、pH 值和渗透压，经过澄清及过滤除菌后制成一种密度梯度分离液，经过密度梯度离心使一定密度的细胞按相应密度梯度分布，从而将各种细胞加以分离。通过离心使一定密度的细胞按相应密度梯度分布，从而将中性粒细胞从骨髓中分离出来。
产品参数：
密度：1.113±0.001g/mL
渗透压：290~350 mOsm/kg H2O
无菌：0.1μm 滤膜过滤
骨髓单细胞悬液制备方法（仅供参考）：
小动物骨髓的采集：
1. 处死动物，无菌提取股骨和胫骨，剪去两端软骨，露出红色的骨髓腔（注意尽可能少的剪走骨髓腔）。
2. 取1ml的无菌注射器，吸取少量的含有10%标准胎牛血清的稀释液或者是含有血清的培养基，冲洗骨髓腔以获得骨髓。
3. 最终制备成2×108–1×109/ml 的单细胞悬液备用。
大动物骨髓的采集：
大动物骨髓的采集可采取活体穿刺方法：先将动物麻醉、固定、局部除毛、消毒皮肤，然后估计好皮肤到骨髓的距离，把骨髓穿刺针的长度固定好。操作人员用左手把穿刺点周围的皮肤绷紧，右手将穿刺针在穿刺点垂直刺入，轻轻左右旋转将穿刺针钻入，当穿刺针进入骨髓腔时常有落空感。连接注射器缓慢抽吸骨髓组织，当注射器内抽到少许骨髓时即停止抽吸。用含10%标准胎牛血清的稀释液调整细胞浓度为2×108–1×109/ml 的单细胞悬液备用。
常用的骨髓穿刺点：
股骨：穿刺部位在股骨内侧面,靠下端的凹面处；
胸骨：穿刺部位是胸骨体与胸骨柄连接处；
肋骨：穿刺部位是第5～7肋骨各点的中点；
胫骨：穿刺部位是股骨内侧、靠下端的凹面处。如果穿刺采用的是肋骨，穿刺结束后要用胶布封贴穿刺孔，防止发生气胸。
中性粒细胞分离方法：
1. 制备骨髓单细胞悬液。
2. 取一支适当的离心管，加入与组织单细胞悬液等量的分离液（分离液最少不得少于3 mL，总体积不能超过离心管的三分之二，否则会影响分离效果）。
3. 小心吸取单细胞悬液加于分离液液面上，注意保持两液面界面清晰。（可以使用巴氏德吸管吸取单细胞悬液，然后小心的平铺于分离液上，因为两者的密度差异，将形成明显的分层界面。如果样品较多，加样的时间较长，在离心之前出现红细胞成团下沉属正常 现象。）
4. 室温，水平转子500~900 g，离心20~30 min。（根据脏器组织单细胞悬液的量确定离心条件，单细胞悬液量越大，离心力越大，离心时间越长，具体离心条件可以自行摸索，以达到最佳分离效果，离心转速最大不超 过1200g）。
5. 离心后将出现明显的分层：最上层是稀释液；稀释液与分离液之间是淋巴细胞层；分离液中为粒细胞层（个体差异或者是分离条件不同，粒细胞层可能分离不明显）；最下层为红细胞层。
6. 小心的吸取分离液层到15mL洁净的离心管中，10mL PBS或细胞洗涤液洗涤白膜层细胞。250g，离心10min（如有红细胞混杂则加入适量红细胞裂解液）
7. 弃上清，5 mL的PBS或细胞清洗液重悬细胞，250 g，离心10 min。
8. 重复步骤7
9. 弃上清，细胞重悬备用。
注意事项：
1. 开封前颠倒混匀，本分离液为无菌产品，为延长分离液保存时间，请在无菌条件下启封，避免污染。
2. 待分离的组织样本要求新鲜，避免冷冻和冷藏。
3. 本实验要求，在正常大气压下，分离液、分离样本以及分离环境温度为（18℃~25℃）。分离液在低温时呈较高密度，在高温时呈较低密度。细胞分离液从冰箱取出后，不可立即使用，操作前可将样本和分离液置于20℃水浴中复温20分钟以保证分离温度。4℃或者是温度较低的条件下离心，可能会导致白膜层中红细胞污染加重。
4. 稀释血液或洗涤细胞，不可使用含Ca、Mg离子的缓冲液及培养液，其成分会导致血细胞凝集，大大降低细胞得率及纯度。
5. 由于各品牌离心机的性能不同，实验室环境温度差异，可能影响分离效果，用户可以调节离心转数和离心时间，摸索最佳的分离条件（具体分离条件各实验室自定）。
6. 部分塑料制品（如聚苯乙烯）因其带有的静电作用，可能会导致细胞挂壁，影响分离效果。最好使用无静电反应的离心管，推荐使用未经过碱处理的玻璃离心管。
7. 细胞重悬样本的粘稠度或者是温度差异，可能会影响分离效果，可以调节离心转数和离心时间，请摸索最佳的分离条件。
8. 如果要进一步对分离的细胞进行培养，在收集血液和分离过程中，注意无菌操作，避免污染。
9. 不同动物的组织细胞重悬在不同比重分离液中的细胞离散系数及细胞带电不同，用户在制定分离液时应提供所需分离液的比重、动物种属及被分离细胞的名称。