neb P0704L说明书

PNGase F.

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 P0704S

• 浓度

   500,000单位/毫升

  尺寸

•   P0704L  75,000个单位

  价格表

  $ 718.00

PNGase F是从糖蛋白中去除几乎所有N-连接的寡糖的有效的酶促方法。PNGase F是酰胺酶，其在高甘露糖，杂合和复合寡糖的内部GlcNAc和天冬酰胺残基之间切割。

• 通过SDS-PAGE和完整的ESI-MS测定，纯度≥95％
• 非重组，没有可检测的内切糖苷酶F1，F2或F3污染
• 储存在50％甘油中; 宜活动和稳定性长达24个月
• 可在天然或变性条件下使用
• 优化糖蛋白的去糖基化; 使N-聚糖核心寡糖保持完整，适合进一步分析

 

 

 

 

 
 

肽 – N-糖苷酶F，也称为PNGase F，是一种酰胺酶，可裂解来自N-连接糖蛋白的高甘露糖，杂合寡糖和复合寡糖的内层GlcNAc和天冬酰胺残基（1）

详细的特异性： 

当内部的GlcNAc残基与α1-3岩藻糖残基连接时，PNGase F不能从糖蛋白切割N-连接的聚糖。这种修饰常见于植物和一些昆虫糖蛋白中。

产品来源

PNGase F从脑膜炎黄杆菌（Flavobacterium meningosepticum）（3）中纯化，不含蛋白酶和Endo F活性。

提供的试剂

本产品随附以下试剂：

	存储在（°C）	浓度
糖蛋白变性缓冲液	-20	10 X.
NP-40	-20	10％
GlycoBuffer 2	-20	10 X.

 

应用功能

• 糖蛋白分析
• 从糖蛋白中去除高甘露糖，杂合和复杂的  N-聚糖
• 无污染物（Endo F，蛋白酶等）

 

单位定义

一个单位定义为在37℃下在10μl的总反应体积中在1小时内从10μg变性的RNase B中除去> 95％的碳水化合物所需的酶量。

单位定义测定：
将10μgRNaseB用1X糖蛋白变性缓冲液（0.5％SDS，40mM DTT）在100℃变性10分钟。加入NP-40和GlycoBuffer 2后，加入两倍稀释的PNGase F，将反应混合物在37℃下温育1小时。通过SDS-PAGE显现反应产物的分离。

1X糖蛋白变性缓冲液
0.5％SDS 
40 mM DTT 

1X NP-40
1％NP-40，MilliQ-H ₂ O

反应条件

1X GlycoBuffer 2 
在37°C孵育

1X GlycoBuffer 2 
50 mM磷酸钠
（pH值@ 25°C）

 

贮存温度

-20℃下

储藏条件

在 25℃下，20mM Tris-HCl 
50mM NaCl 
5mM EDTA 
50％甘油
pH 7.5

热灭活

75°C，10分钟

分子量

表观：36000道尔顿

1. 由于SDS抑制PNGase F活性，因此必须使NP-40存在于反应混合物中。为什么这种非离子型去污剂抵消SDS抑制作用目前尚不清楚。
2. 为了使天然糖蛋白去糖基化，可能需要更长的孵育时间以及更多的酶。
3. PNGase F不会切割  含有核心α1-3岩藻糖的N-连接聚糖。
4. 典型反应条件：请参阅协议