无DMSO干细胞冻存液 StemCell Keep


产品编号 产品名称 产品规格 产品等级 产品价格
VPL-A1 StemCell Keep
 无DMSO 干细胞冻存液
20 ml
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无DMSO干细胞冻存液无DMSO干细胞冻存液                  StemCell Keep

StemCell Keep


StemCell Keep 是一种高效的玻璃化细胞冻存液,用于灵长类胚胎干细胞(ES)和诱导型多能干细胞(iPS)的保存。



◆特点•优势

    ●    无动物源蛋白、无DMSO;

无DMSO干细胞冻存液                  StemCell Keep

    ●    通过玻璃化保护ES和iPS细胞;

    ●    可维持干细胞分化能力;

    ●    采用新型冷冻保护剂,可利用玻璃化冷冻技术进行ES和iPS细胞克隆的高效保

           存;

    ●    足够分装100管;

    ●    无细菌、真菌和支原体污染;

    ●    保质期长,4℃下可保存2年

     * 仅用于科学研究,不能用于临床诊断。




◆案例•应用


冷冻玻璃化


灵长类ES和iPS细胞对冷冻损害非常敏感

●   灵长类ES和iPS细胞用含10% DMSO的冻存液-80℃保存后活性很低

  灵长类ES和iPS细胞克隆在上述条件下活力很低

                      ↓

通过玻璃化低温保存ES和iPS细胞

   玻璃化是使液体形成玻璃状物质

   使用玻璃化溶液悬浮细胞,然后转移到液氮罐防止水分缺失

   细胞在冷冻过程中被保护

                      ↓

玻璃化技术保存ES和iPS细胞存在的问题

 由于玻璃化的形成需要高浓度的溶液,高渗透压对细胞有毒性

 操作时需要快速溶解细胞,以防重结晶

 操作需要经验丰富的操作人员

                      ↓

常规玻璃化溶液存在的问题

 大体积(200 μL) 的玻璃化溶液可造成玻璃化条件的不稳定性

 传统的玻璃化溶液含有DMSO和乙酰胺,DMSO对OCT-4的表达有影响,而乙酰胺被认为是一种致癌物

                      ↓

StemCell Keep是一种新颖的玻璃化溶液,

可改善传统玻璃化溶液存在的问题。



 对比数据

无DMSO干细胞冻存液                  StemCell Keep

上述实验数据反映了人iPS细胞冻存之后的克隆形成率和复苏率。接种后第一天,以未冷冻保存细胞100%的克隆形成率为对照,DAP213(常用作玻璃化试剂)冻存细胞只有15%的克隆形成率,而StemCell冻存细胞的克隆形成率为80%。接种后第四天,细胞生长为大克隆之后统计细胞的复苏率,StemCell冻存iPS 细胞的复苏率达到62%,明显优于DAP213冻存细胞28%的复苏率。



实验操作步骤 


※ 在具体实验展开之前请先进行预实验。


冻存步骤

1. 在超净台上放置一个装满液氮的保温瓶;

2. 用含0.25%的胰蛋白酶和1mg/mL IV型胶原酶的PBS溶液解离ES/iPS细胞;

* 一个60mm培养皿,细胞达到汇合状态时,约可分装1-5管;

3. 离心,去上清( 需在冰上操作);

4. 用200μL的StemCell悬浮细胞。将冻存管转移到液氮中放置1分钟;

* 如果玻璃化成功,溶液应呈透明状。

5. 将冻存管转移至液氮罐保存。

 

复苏步骤

1. 准备含有9mL细胞培养液的离心管,37℃水浴;

   * 一次复苏一管。

2. 将冻存管从液氮罐转移至含有液氮的保温瓶中,在超净台上操作;

3. 迅速添加1mL预热的细胞培养基,用枪头轻轻混匀 ;

4. 将所有的稀释后细胞转移至离心管,离心洗脱细胞;

5. 将细胞转移至培养皿,根据实验操作步骤进行细胞培养。

 


实验结果


无DMSO干细胞冻存液                  StemCell Keep

人iPS细胞StemCell冻存复苏之后的分化能力

  细胞的未分化标记物ALP(A)、OCT-4 (B)、SSEA-4 (C) 和TRA-1-60(D) 染色都为阳性,保持着未分化状态。








人iPS细胞StemCell冻存复苏之后的分化能力

 人iPS细胞形成拟胚体之后,在普通培养基上培养1周,依然可以检测到未分化标记。


无DMSO干细胞冻存液                  StemCell Keep