CUGA® 7 gRNA Synthesis Kit 使用CRISPR/Cas9进行基因组编辑的gRNA合成试剂盒


产品编号 产品名称 产品规格 产品等级 产品价格
  • 产品特性
  • 相关资料
  • Q&A
  • 参考文献

使用CRISPR/Cas9进行基因组编辑的gRNA合成试剂盒CUGA® 7 gRNA Synthesis Kit                   使用CRISPR/Cas9进行基因组编辑的gRNA合成试剂盒

CUGA® 7 gRNA Synthesis Kit

 


  CUGA® 7 gRNA Synthesis Kit是对CRISPR/Cas9基因组编辑系统所需的向导RNA进行合成和纯化的试剂盒。

  通过使用CUGA® 7聚合酶(独立开发的T7 RNA Polymerase的突变体)进行体外转录,可以精确并且大量制备目的向导RNA。本试剂盒中包含用于体外转录反应的试剂,以及使用核酸纯化柱进行向导RNA纯化用的整套试剂。

 


◆特点


● 体外转录反应中可大量地合成gRNA。

● 使用专有酶进行精确转录。

● 具有与化学合成的gRNA相同的功能。

 


◆试剂盒组成


<向导RNA合成用试剂>

CUGA® 7 Enzyme Solution …….. 50 µL×1支

・5×Transcription Buffer…………….. 200 µL×1支

・0.1 M DTT………………………………. 100µL×1支

・NTP Mix …………………………………. 300 µL×1支

・DNase I (RNase free)……………… 100 µL×1支

 


<向导RNA纯化试剂和核酸纯化柱>

・gRNA Binding Buffer………….. 30 mL×1支

・gRNA wash Buffer……………… 40 mL×1支

・Spin Column……………………… 50支×1袋

・ddWater(RNase free)………… 1 mL×5支

 

※注意
本产品中不包含体外转录反应所需的模板DNA以及模板DNA制备试剂,需另外准备。

 


◆实验步骤


CUGA® 7 gRNA Synthesis Kit                   使用CRISPR/Cas9进行基因组编辑的gRNA合成试剂盒



◆实验案例


①  RNA合成量的比较

CUGA® 7 gRNA Synthesis Kit(本产品)以及A公司的gRNA合成试剂盒(体外转录法)在37°C,1~4小时的条件下合成single guideRNA(sgRNA)。反应后,根据各个制造商的使用手册纯化sgRNA,比较合成量。


【结果】

本产品的sgRNA合成量为A公司产品合成量的3倍。


CUGA® 7 gRNA Synthesis Kit                   使用CRISPR/Cas9进行基因组编辑的gRNA合成试剂盒



②  电泳比较

使用本产品和A公司的gRNA合成试剂盒合成sgRNA,并通过琼脂糖凝胶电泳比较纯化后的sgRNA。

 

【实验条件】

・电泳样本:37℃反应2小时合成的sgRNA 250ng

・电泳凝胶:3% Agarose 21

・2×Loading Buffer组成:95%甲酰胺

             0.5mM EDTA

             0.005% BPB

             0.005% XC


【结果】

本产品合成的sgRNA在电泳中为单一条带,可确认其为精准转录。

 

CUGA® 7 gRNA Synthesis Kit                   使用CRISPR/Cas9进行基因组编辑的gRNA合成试剂盒



③  体外切割检验(与化学合成产品比较)

用本产品合成的sgRNA和化学合成的gRNA(tracrRNA,crRNA)在体外进行切割检验

 

【实验条件】

・M:GeneLadder Fast2 5 µL
・C:Control

・1:Cas9 Nuclease protein NLS 2 pmol+化学合成的gRNA 2 pmol
・2:Cas9 Nuclease protein NLS 2 pmol+本产品合成的sgRNA 50 ng

・电泳凝胶:0.8% Agarose S

【结果】

可确认本产品合成的sgRNA与化学合成的gRNA有相同的功能。


CUGA® 7 gRNA Synthesis Kit                   使用CRISPR/Cas9进行基因组编辑的gRNA合成试剂盒



◆产品列表


产品编号

产品名称

包装

314-08691

CUGA® 7 gRNA Synthesis Kit

 CUGA® 7 gRNA合成试剂盒

50次用