StemSure® 细胞冻存液 人iPS细胞·小鼠ES细胞冻存用


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人iPS细胞·小鼠ES细胞冻存用StemSure® 细胞冻存液                  人iPS细胞·小鼠ES细胞冻存用

StemSure® 细胞冻存液 Update!!

  


  本产品是可用于冻存以小鼠ES细胞为代表的各种通用细胞株的无血清型细胞冻存液。含BSA和10%DMSO 。标准测试中用小鼠ES细胞D3株冻存、复苏,确认其细胞存活率。本产品采用缓慢冻存法冻存细胞,无需使用程序降温盒。

  使用本产品对小鼠ES细胞D3株在-80℃进行保存,可冻存2年;普通细胞在-150℃下可冻存30个月,并且可维持很高的存活率。

  另外,本产品已确认可用于冻存人iPS细胞

 


◆特点


●  可在维持人iPS细胞、小鼠ES细胞未分化能力的状态下,直接进行冻存。

●  可在-80℃下进行长时间冻存。

●  冻存的通用动物细胞株的细胞存活率好。

●  无血清型

●  无需自行配制试剂

●  无需使用程序降温盒

 


◆测试项目


●  细胞存活率时间(使用小鼠ES细胞D3株进行实验)

●  无菌实验

●  内毒素实验

●  支原体实验


 

◆使用方法


人iPS细胞的冻存


1.    冻存

①    去除人iPS细胞培养皿中的营养液,用PBS清洗后,用Accutase等剥离细胞。

②    添加含有10μmol/L Y-27632的人iPS培养基(hPSC培养基(+ROCKi)),用移液器吹打成单细胞。

③    将吹打分散的细胞悬浮液移至样本管,离心(1,000rpm,3min,室温)后去除上清液。

④    添加含hPSC培养基(+ROCKi)的培养基,用移液器悬浮。

⑤    计算细胞数量。

⑥    以1×106clls/管分注在细胞悬浮液保存管中。

⑦    离心(1,000rpm,3min,室温)后去除上清液。

⑧    使用50μL/管本产品进行悬浮,在-80℃下进行冻存。


2.    复苏

①    在冻存管中添加hPSC培养基(+ROCKi),复苏冻结细胞(不使用温水浴法)。

②    离心(1,000rpm,3min,室温)后去除上清,再次添加hPSC培养基(+ROCKi),悬浮。

③    计算细胞数量。

④    在培养皿中按照2×105cells/6cm进行细胞培养。



小鼠ES细胞、通用动物细胞株的冻存


1.    冻存

①    收集细胞至样本管中。

②    离心,去除上清。

③    在样本管中加入本产品,悬浮。

④    分注至悬浮液保存管中。

⑤    将保存管在-80℃冻洁一晚。

⑥    保存于-150℃或-80℃


2.    复苏

①    将冻存管置于37℃的水浴槽中解冻。

②    在培养用的培养基中进行悬浮。

③    离心去除上清后用培养基进行重悬。

④    在培养容器内培养细胞。

 


◆人iPS细胞201B7细胞系的冻存 Update!!

  

  将人iPS细胞201B7株分散为单细胞后,在StemSure® 冻存液中悬浮,并在-80℃下冻存4天。反复冻结、复苏3次之后,确认细胞存活率和各种未分化标记(Oct3/4、Sox2、SSEA-4、Tra-1-81)的表达。


细胞生存率

StemSure® 细胞冻存液                  人iPS细胞·小鼠ES细胞冻存用


未分化标记表达的确认

StemSure® 细胞冻存液                  人iPS细胞·小鼠ES细胞冻存用

◆小鼠ES细胞D3细胞系的冻存


-150℃保存(30个月)

StemSure® 细胞冻存液                  人iPS细胞·小鼠ES细胞冻存用


-80℃保存(24个月)

StemSure® 细胞冻存液                  人iPS细胞·小鼠ES细胞冻存用

<冻存>

①    在1mL本产品中悬浮1~2×106cells,分注至冻存管中。

②    在-80℃冻存1天后转移至-150℃冻存。或者在-80℃冻存。


<复苏>

③    在37℃的温浴槽中复苏。

④    在细胞培养基中悬浮、离心。

⑤    弃上清,用细胞培养基重悬细胞并进行培养。

 

○确认细胞集落形成

培养细胞数:500个细胞/孔(含胶原蛋白涂层的6孔板)

培养时间:10天

 

 

◆冻存通用动物细胞系后的细胞存活率

  

  用StemSure® 细胞冻存液冻存各种动物细胞株。可确认到冻存30个月后仍维持高存活率,且复苏后细胞可移植。

细胞种类

存活率(%)

细胞移植

2个月

4个月

30个月

HeLa

97

93

97

293T

96

95

95

K562

91

84

84

灵长类

COS-7

97

93

92

Vero

95

94

91

MDCK

98

99

100

小鼠

NIH/3T3

93

93

89

P19

93

76

77

STO

90

91

91

L929

94

90

91

仓鼠

CHO

97

96

98


<冻存>

①    在1mL本品中悬浮1~2×106cells,分注至冻存管中。

②    在-80℃冻存1天后转移至-150℃分别冻存2个月、4个月、30个月。


<复苏>

③    在37℃的水浴槽中复苏。

④    细胞培养用培养基中悬浮、离心。



★其他冻存液★

产品编号

产品名称

规格

容量

031-24051

CultureSure® DMSO
CultureSure® 二甲基亚砜

细胞培养用

10mL×10

039-23511

CultureSure® Freezing Medium
通用动物细胞用冻存液

细胞培养用

10mL



◆相关产品


★StemSure® 系列★


  本系列产品适用于培养ES细胞和iPS细胞。每个批次产品都适用小鼠ES细胞D3细胞系进行品质实验检测。


产品编号

产品名称

规格

容量

197-16275

StemSure® D-MEM (High Glucose) with Phenol Red and Sodium Pyruvate
StemSure® D-MEM(高糖)含酚红和丙酮酸钠

细胞培养用

500mL

191-18375

Stemsure® Serum Replacement  
Stemsure® 血清替代品

细胞培养用

500mL

198-15781

StemSure® 10 mmol/L 2-Mercaptoethanol Solution ( x 100)
StemSure® 10 mmol/L 2-巯基乙醇 

细胞培养用

100mL

195-15791

StemSure® 50 mmol/L   Monothioglycerol Solution ( x 100)
StemSure® 50 mmol/L 硫代甘油

细胞培养用

100mL

190-15805

StemSure® 0.1w/v% Gelatin   Solution
StemSure® 0.1w/v%明胶溶液

细胞培养用

500mL

199-16051

StemSure® LIF, Mouse, recombinant, Solution
StemSure® 白细胞抑制因子溶液,小鼠,重组

细胞培养用

106 units

195-16053

StemSure® LIF,Mouse,recombinant,Solution
StemSure®   白细胞抑制因子溶液,小鼠,重组 

细胞培养用

106 units×10



★rBC2LCN-FITC★


  rBC2LCN可特异性识别未分化的人ES/iPS细胞。将本产品添加至含有人ES/iPS细胞的培养液中,可对活性状态下的未分化细胞进行染色。<详情>



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