自噬荧光标记探针 Mitophagy Detection Kit


产品编号 产品名称 产品规格 产品等级 产品价格
344-91901 Mitophagy Detection Kit 1set
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自噬荧光标记探针自噬荧光标记探针                  Mitophagy Detection Kit

Mitophagy Detection Kit


◆概要


自噬荧光标记探针                  Mitophagy Detection Kit

  Mitophagy Detection Kit是低分子荧光试剂的自噬检出试剂盒。通常情况下,观察自噬是需要pH传感器荧光蛋白在细胞中表达出来。但是,本试剂盒不需要荧光蛋白表达,通过简单操作便可观察自噬。


◆特点

  ● 使用低分子荧光试剂便可简便检出自噬

  ● 适用于荧光显微镜活细胞成像

  ● 通过和附带的溶酶染色试剂的联合染色,可以观察自噬


◆自噬(Mitophagy)是什么?

  线粒体作为能量产生的场所,是在细胞中担当重要机能的细胞器。另一方面,积蓄的因氧化应激和DNA损伤等不良线粒体,是引发阿尔茨海默氏症和帕金森氏病的原因。

  自噬是能选择性去除不良线粒体的系统。首先,通过自噬体将不良线粒体隔离,然后自噬体与溶酶体融合,线粒体被消化。


◆Mitophagy Detection Kit使用实例

  通过使用Parkin表达HeLa细胞的carbonyl cyanide m-chlorophenylhydrazone (CCCP)的自噬诱导

自噬荧光标记探针                  Mitophagy Detection Kit

图一使用了Parkin表达HeLa细胞(上部分图片)和未表达HeLa细胞(下部分图片)的自噬观察

                A,D):Mtphagy Dye的荧光图像

                B,E):Lyso Dye的荧光图像

                C,F):Mtphagy Dye和Lyso Dye的联合染色荧光图像


条件:

  Mtphagy Dye:激发550 ± 25 nm、荧光发光605 ± 35 nm

  Lyso Dye:激发470 ± 20 nm、荧光发光525 ± 25 nm

操作方法:

  ● 播种细胞,培养过夜

  ● 在细胞中导入使用了HilyMax [Code:H357]的Parkin质粒,培养过夜

  ● 使用Hanks’ HEPES缓冲液洗涤两次

  ● 添加100 nmol/l Mtphagy Dye working solution孵化30分钟

  ● 使用Hanks’ HEPES 缓冲液洗涤两次

  ● 在含有10 μmol/l CCCP的培养基培养24小时

  ● 通过荧光显微镜观察到发生自噬后,去除含有CCCP培养基,添加1 umol/l Lyso Dye working solution孵化30分钟

  ● 使用Hanks’ HEPES 缓冲液洗涤一次后,通过荧光显微镜观察被Mtphagy Dye和Lyso Dye联合染色。


◆Mtphagy Dye・Lyso Dye的激发光谱和荧光光谱

自噬荧光标记探针                  Mitophagy Detection Kit

图2:Mtphagy Dye, Lyso Dye 的激发光谱和荧光光谱

  Mtphagy Dye:激发550 ± 25 nm、荧光发光605 ± 35 nm

Lyso Dye:激发470 ± 20 nm、荧光发光525 ± 25 nm