FIREFLYGLO萤火虫萤光素酶报告基因检测试剂盒说明书

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产品描述

FIREFLYGLO   萤光素酶报告基因检测系统是一种辉光型定量检测试剂盒，具有高灵敏度和发光信号稳定的特点，可以满足高通量检测萤光素酶在哺乳动物细胞中的表达。相对于云贺闪光型Firefly Luciferase Reporter Assay Kit ， 本品FIREFLYGLO Luciferase Reporter Assay Kit （YH0046）具有以下优点：采用了一种全新的萤光素酶检测底物，提高了发光信号的稳定性，近乎2 小时的信号半衰期为实验设计提供了更大的灵活性；采用加样–混匀–检测的操作方法，无需依赖自动进样器，并且无需弃培养液、离心等步骤，简化了实验流程；本试剂盒组分做了大量优化，与传统闪光型产品相比，无明显刺激性气味。FIREFLYGLO 萤光素酶报告基因检测试剂盒可用于多种常用细胞培养液：RPMI1640 、DMEM 、MEM– α、 F12 、DMEM/F12 等，其半衰期均为2 小时左右（22℃），满足绝大多数高通量实验需求。

 

注意事项

1 、检测仪器选择：能够检测化学发光的仪器都适用本试剂盒的检测，但是针对相同的样品，不同检测器本底信号值和测量值均可能不同； 且对于同一样本检测，不同仪器的数值不可横向比较。为防止孔间干扰， 推荐使用不透明白色细胞培养板。

2 、由于发光信号会受到检测环境如培养基组分、温度等影响，所以应确保同组内不同样本检测条件一致。

3 、酶促反应对温度较为敏感，加样检测前务必将检测试剂以及细胞培养板平衡至室温。

4 、为保证萤光素酶检测试剂稳定性， 适量分装后建议-70℃长期避光保存或者短期存放于-20℃不超过一个月，并尽快使用，尽量避免多次反复冻融。

5、如需同时检测多个细胞培养板，请尽量确保每个细胞板加入检测溶液后孵育时间一致，再进行数据读取，以此获得最佳的检测结果。

使用方法

使用方法

自备材料：

PBS；多道排枪；白色不透光细胞培养板；化学发光仪或酶标仪。

检测前准备

1） 开始使用时将 FIREFLYGLO Luciferase Reaction Buffer 一次性全部倒入 FIREFLYGLO Luciferase Substrate 瓶中，充分混匀后，按使用需求进行分装，建议-70℃长期保存或者短期存放于-20℃不超过一个月，并尽快使用。

2） 每次实验前将分装后冻存的检测试剂平衡至室温。

 

 

操作方法

1） 从细胞培养箱中取出细胞培养板，放置 5-15min，恢复至室温。注：使用白色不透光的细胞培养板，减少孔间的信号干扰。

2） 加入检测溶液

使用多道排枪向每个细胞孔中加入平衡至室温的含有底物的FIREFLYGLO Luciferase Reaction Buffer ， 加样体积与细胞培养液体积相同。例如， 96 孔板通常加入 80-100ul 培养液，相应加入 80ul-100ul 检测溶液； 384 孔板通常加入 20-30ul 培养液，相应加入 20-30ul 检测溶液。

3） 振荡混匀

为了使得细胞裂解充分，建议将细胞培养板放在振荡混匀仪或附带振板功能的仪器上，室温条件下， 采用 中高速振板 5-10min。

注：建议振板混匀时间为 5-10min，可根据细胞量进行适当调整，确保细胞充分裂解，得到稳定的发光检测结果。

4） 检测

振板混匀后于化学发光仪或酶标仪中检测Firefly Luciferase 报告基因活性。注：为得到最佳检测结果，请在加入检测试剂后 2 小时内完成检测。