Jinpan品牌PEI转染试剂
简要描述：上海金畔生物自产线性PEI转染试剂PEI转染注意要点 化学名：线性聚乙烯亚胺，线性PEI，聚乙烯亚胺，线性，MW 25000，转染级订货号＃： 9002-98-6 规格：1G 品牌：Jinpan CAS＃： 9002-98-6,26913-06-4 分子式：（CH2CH2NH）n 分子量： 25,000
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Jinpan品牌线性PEI转染试剂说明书
Jinpan品牌
PEI转染注意要点
化学名：线性聚乙烯亚胺，线性PEI，聚乙烯亚胺，线性，MW 25000，转染级
订货号＃： 9002-98-6 规格：1G 品牌：Jinpan CAS＃： 9002-98-6,26913-06-4
分子式：（CH2CH2NH）n 分子量： 25,000 熔点： 73-75º
溶于：热水，低pH冷水，甲醇和乙醇。 不溶于：苯，乙酉迷和丙酮
外观：白色至黄色固体 处理：手套和通风橱
储存：在室温下避光干燥储存
配置：1：称取100mg线性聚乙烯亚胺，加新鲜的细胞级别的水90ml，加盐酸至PH=3左右， 加热至80℃左右搅拌过夜溶解PEI，
2：用氢氧化钠溶液调整pH值至7.0 ，定容至100ml，用0.22um的滤器过滤，分装后储存于4℃，保质期可以达到12个月。
转染操作流程：
◆ 瞬时转染方法 1. 接种细胞： 转染前一天，用胶原酶（WORTHINGTONG公司LS004196)消化细胞并计数（不建议用胰酶）。调整细胞浓度，将细胞铺入细胞培养的器皿，每个孔置入的细胞量应能使转染时细胞汇合度达到 70~80%。
2. 准备 DNA-PEI 复合物： DNA、PEI 试剂和稀释剂在进行以下步骤前需先使其升至室温。，用 Opti-MEM ITM（Invitrogen）或其他适合的无蛋白培养基稀释适量 DNA。用同样的培养基稀释 PEI 试剂。每 1 μg DNA 需用 1-5 μL 线性PEI转染试剂。一边轻轻涡旋装有 DNA 溶液 的试管，一边将稀释的线性PEI转染试剂滴加至试管中（注意：请勿颠倒添加顺序）。充分混匀后，室温静置 10~25 min 以形成 DNA-PEI复合物。当溶液体积较大时，请用圆底聚丙烯管，例如 NEST 5 mL /14 mL 离心管。
3. 转染细胞： 直接向每个孔中加入 DNA-PEI复合物并轻轻涡旋培养板/培养皿。在无血清条件下转染时，去除生长培养基，替换成无血清培养基，然后滴DNA-PEI复合物。转染 3 h 后，添加½体积的包含 30%血清的生长培养基。
4. 孵育细胞和分析结果： 在 CO2培养箱中 37℃下孵育细胞至可以分析检测。转染后快 7 h 即可检测到转入基因的表达。 请自行确定适合检测时间。
◆稳定转染方法
1. 接种细胞： 转染前一天，用胶原酶（WORTHINGTONG公司LS004196)消化细胞并计数（不建议用胰酶）。调整细胞浓度，将细胞铺入细胞培养的器皿，每个孔置入的细胞量应能使转染时细胞汇合度达到 70~80%。
2. 准备 DNA-PEI 复合物： DNA、PEI 试剂和稀释剂在进行以下步骤前需先使其升至室温。依据表 1 所示，用 Opti-MEM ITM（Invitrogen）或其他适合的无蛋白培养基稀释适量 DNA。用同样的培养基稀释 PEI 试剂。每 1 μg DNA 需用 1-5 μL 线性PEI转染试剂(这个需要客户自行摸索配比，每一批转染试剂和每一批DNA比例可能会稍有不同）。一边轻轻涡旋装有 DNA 溶液的试管，一边将稀释的线性PEI转染试剂滴加至试管中（注意：请勿颠倒添加顺序）。充分混匀后，室温静置 10~25 min 以形成 DNA-PEI复合物。当溶液体积较大时，请用圆底聚丙烯管，例如 NEST 5 mL /14 mL 离心管。
3. 转染细胞： 直接向每个孔中加入 DNA-PEI复合物并轻轻涡旋培养板/培养皿。在无血清条件下转染时，去除生长培养基，替换成无血清培养基，然后滴DNA-PEI复合物。转染 3 h 后，添加½体积的包含 30%血清的生长培养基。
4. 孵育细胞和分析结果： 在 CO2培养箱中 37℃下孵育细胞至可以分析检测。转染后 7 h 即可检测到转入基因的表达。
5.转染 24 h 后，将细胞传代至新鲜的生长培养基中（将细胞稀释 10 倍 以上），在 CO2培养箱中 37℃孵育过夜。第二天加入与转染抗性基因相匹配的筛选药物。约 1~2 周可 筛选到耐药性克隆，在这期间需经常更换含筛选药物的生长培养基。 „
上海金畔生物自产线性PEI转染试剂特别提醒
1. PEI 25K含有4-11％的残留丙酰基，这可能阻碍聚合物主链与DNA的有效结合，所以批间转染效率可能会有比较大的差异，建议一个批次可以多购买，PEI 25K稳定性在室温干燥避光下可稳定保存10年以上（虽然有效期标注只有18个月左右）
2. 对于某些类型的细胞如 HEK-293、HEK293T、NIH/3T3 和 COS 细胞，在转染前两天铺板可显著 提高转入基因的表达水平。如果选择转染前两天铺板，可适当降低铺板密度，以确保转染时细胞的汇合度仍为 70~80%。
3. 对于接触抑制敏感的细胞，可适当降低铺板密度。
4. 即使在有蛋白（如 10%的血清）存在的情况下，DNA-PEI复合物仍能转染细胞，但是 DNA-PEI复合物必须在无蛋白存在的条件下形成。我们推荐使用 Opti-MEM ITM 培养基以达到宜转染效率。其他的无蛋白培养基则需测试与线性PEI转染试剂的兼容性。
5. 对大多数细胞来而言，每 1 μg DNA 使用 3.0 μL PEI转染试剂都能获得较高转染效率。使用 者也可尝试每 1 μg DNA 使用 1~4 μL 体积线性PEI转染试剂进行优化。
6.本手册只是一个基本操作手册，具体转染过程中需要根据实验进行优化，优化方向为混合时间，转染时间，DNA混合比列…….
7.Polyethylenimine, Linear (MW 25,000) 为Polysciences公司生产的化合物产品，每批产品出厂前都经过严格的检测,保证每批产品都*、稳定且高品质,但由于作为转染试剂使用过程中有很多实验室因素(配置方法，PH,水纯度,称量的准度,dna RNA纯度,细胞状态，细胞品系…)造成溶解出现问题或者转染效率出现差异,所以厂家只受理该产品纯度，分子量及重量缺失破损等相关投诉，针对极个别客户溶解问题和转染效率问题我们只能友善解决,所以不能保证您能获得满意答复，对于产品产品转染效率不高，转染批间有差异，转染不了等问题，不作为评价我们售后工作的依据。
如果我们提供的PEI手册都无法解答您的问题,建议您可以多看文献,多调整一下转染条件,找出适合自己细胞的转染方法。如果无暇摸索条件,您也可以直接购买我们配置好细胞转染液,这样免去您很多烦恼,谢谢理解
8.部分数据参考，本数据来源于网络，不作为售后投诉依据
上海金畔生物自产线性PEI转染试剂转染试剂和DNA配比数据
|
细胞型号 |
培养基 |
每孔细 胞数 |
DNA的量 |
转染试剂量 |
和培养基混合 4-6h |
|
293H |
DMEM |
3×104 |
0.2µg |
0.5µL |
DMEM+10�S |
|
293FT |
DMEM |
3×104 |
0.2µg |
0.5µL |
DMEM+10�S |
|
293E |
DMEM |
3×104 |
0.2µg |
0.5µL |
DMEM+10�S |
|
293F |
DMEM |
3×104 |
0.2µg |
0.5µL |
DMEM+10�S |
|
COS7 |
DMEM |
1.5×104 |
0.4µg |
0.5µL |
DMEM+10�S |
|
hela |
DMEM |
2×104 |
0.3µg |
0.5µL |
1640+15�S |
|
Caco2 |
MEM |
3.5×104 |
0.3µg |
0.75µL |
MEM+10�S |
|
BHK21 |
MEM |
2×104 |
0.2µg |
0.5µL |
MEM+10�S |
|
CHO-DG44 |
DMEM+HT+pro |
2×104 |
0.5µg |
0.5µL |
DMEM+HT+pro +10�S |
|
RAW264.7 |
DMEM |
3×104 |
0.2µg |
0.5µL |
DMEM +10�S |
|
MCF7 |
MEM/NEAA+0.01mg/mL insulin + sodium pyruvat |
2×104 |
0.1µg |
0.25µL |
MEM/NEAA+0.01mg/mL insulin + sodium pyruvat+10�S |
|
SW480 |
IMDM |
3×104 |
0.4µg |
0.5µL |
IMDM +10�S |
|
MDCK |
DMEM |
4×104 |
0.6µg |
1µL |
DMEM+10�S |
|
CHO-K1 |
IMDM+Pro |
3×104 |
0.2µg |
0.5µL |
IMDM+Pro +10�S |
|
HepG2 |
DMEM |
3×104 |
0.5µg |
0.75µL |
DMEM+10�S |
|
A549 |
DMEM |
2×104 |
0.3µg |
0.5µL |
DMEM+10�S |
|
NIH/3T3 |
DMEM |
1.5×104 |
0.1µg |
0.75µL |
DMEM+10�S |
|
vero |
DMEM |
3×104 |
0.3µg |
0.75µL |
DMEM+10�S |
|
sf9 |
SIM SF |
5×104 |
0.4µg |
0.75µL |
SIM SF+10�S |
转染效率
|
细胞种类 |
中文名称 |
PEI 转染效率 |
|
HEK293 |
人胚肾细胞 |
90%-95% |
|
293-T |
人胚肾细胞 |
90%-95% |
|
CHO-K1 |
仓鼠卵巢细胞 |
80%-90% |
|
U251 |
人源神经胶质瘤细胞 |
80%-90% |
|
Hela |
人源宫颈癌细胞 |
70%-80% |
|
COS7 |
猴SV40转化肾细胞 |
70%-80% |
|
HepG2 |
人源肝癌细胞 |
70%-80% |
|
NIH/3T3 |
小鼠胚胎成纤维细胞 |
60%-70% |
|
胶质瘤干细胞 |
人源胶质瘤干细胞 |
60%-70% |
|
Patu8988 |
人源胰腺癌细胞 |
60%-70% |
|
U2OS |
人源骨肉瘤细胞 |
60%-70% |
上海金畔生物自产线性PEI转染试剂价格表
|
货号 |
品名 |
规格 |
品牌. |
|---|---|---|---|
|
23966-1 |
Polyethylenimine, Linear (MW 25,000) |
1g |
polysciences |
| 78pei25000 | 线性聚乙烯亚胺 分子量25000 | 100mg | biohub |
| 78pei25000 | 线性聚乙烯亚胺 分子量25000 | 1g | biohub |
| 78pei25000 | 线性聚乙烯亚胺 分子量25000 | 5g | biohub |