重组猪源RNase抑制剂说明书

重组猪源RNase抑制剂说明书

产品详情

货号

规格

价格

78BAB10003-100uL

100uL(4KU)

200.00

78BAB10003-1ml

1ml (40KU)

1600.00

78BAB10003-50ml

50ml (2MU)

50000.00

产品描述

本产品是以大肠杆菌中进行表达,并通过亲和层析纯化的重组猪源RNase抑制剂,该蛋白特征与猪肝和人胎盘来源此类酶相似,可替代天然提取 RNase Inhibitor的应用。本产品与RNase A形成1: 1复合体,抑制RNase活性。该反应是可逆的,通过尿素及巯基类试剂能够解离复合体,使RNase复性而抑制剂不可逆失活。本产品与其它竞争性抑制剂(核酸类,无机磷酸类)不同,可以很容易地通过苯酚处理将其从反应体系中除去,但不能抑制逆转录酶的RNase H的活性。使用时可直接加入含有RNA的反应液中用于cDNA第一链合成、体外转录和体外翻译等实验。

产品特点

·     cDNA合成

·      体外转录

·      体外翻译

·      1-Step RT-qPCR

产品组分

缓冲液成分:20 mM HEPES-KOH(pH 7.6),50mM KCl,8mM DTT,50% (v/v) glycerol。

使用方法

使用方法

温馨提示:需要用无RNA酶的PCR管中配制RNA/引物预混液

1 cDNA合成

(1)在无RNA酶的PCR管中配制RNA/引物预混液

组分

反应体积(10ul)

Oligo(dT)20

(或Random primer)

(或基因特异引物)

25pmoles

(25pmoles)

(5pmoles)

10mM dNTPs

2µL

模板RNA

2pg-5µg

DNase/Rnase Free Water

10ul

2)65℃加热5min,立即置于冰上

组分

反应体积(10ul)

RNA引物预混液

10ul

5x RT Buffer

4µL

Jinpan Reverse Transcritase

1ul

RNase inhibitor(40U/µL)

1ul

100mM DTT

2ul

DNase/Rnase Free Water

补足20ul

3)轻轻混匀,按如下反应条件设置

逆转录反应条件

1

42℃

20-60min

2

99℃

5min

备注:逆转录温度可在42-60之间调整,反应时间建议在20-60min内调整

 

4)得到的cDNA溶液可以直接用于第二链cDNA合成及后续PCR反应。

优化参考方法

优化参数

参考范围

逆转录

50-60℃ 5-15min

预变性温度时间

95-98℃ 10sec-5min

变性温度

95-98℃ 3sec-10sec

延伸/退火温度

60-65℃ 5sec-30sec

注意事项

1. 本产品在PH7〜8时表现最佳抑制RNase活性。

2. 本产品发挥活性作用至少添加1 mM的DTT。

3. 本产品不抑制RNase H活性及逆转录酶活性。

运输及保存方法

-20℃可保存12个月。