worthington肝细胞分离系统产品信息简介


worthington肝细胞分离系统产品信息简介

Hepatocyte Isolation System Product Information

 

大多数用于分离肝细胞的传统方法使用粗制和部分纯化的酶制剂,包括各种类型的胶原酶和其他蛋白酶。最近,使用更好表征的胶原酶制剂,例如 Worthington Types 1 和 4 (CLS-1, 4),已经提供了更好的结果。所有粗胶原酶制剂都可能包含批次不同的污染蛋白酶、酯酶和其他酶,需要研究人员预先筛选几批酶和/或不断修改分离参数和协议。

Worthington 肝细胞分离系统的开发旨在为研究人员提供可靠、方便且一致的肝细胞分离系统。通过使用该试剂盒中包含的预先优化的酶组合,可以最大限度地减少批次间的差异并提高分离肝细胞的质量。此外,Worthington 通过从成年大鼠中分离肝细胞来对每一批次进行使用测试,以确保活细胞的性能、可靠性和一致的产量。

该方法基于 Berry, MN 描述的方法,由 Seglen, PO 修改(细胞生物学方法,第 XIII 卷,David M. Prescott 编辑,学术出版社,1976 年;第 4 章,“分离大鼠肝细胞的制备”, pp 29-83),并与几位研究人员一起进一步优化。

稳定性/储存:试剂在环境温度下可在正常运输程序中预期的时间内保持稳定,但包装应在抵达时冷藏。内容物在使用前可在 2-8°C 下储存 4-6 个月。储存在 2-8°C。

包装内容 包装中包含足够的材料,可用于五个单独的成年大鼠肝脏灌注。对于较大或较小的组织应用,请在每个步骤中制备成比例的试剂,并按照协议中所述的相同比例将它们组合起来。

小瓶 #1:10X CMF-HBSS 浓缩液,1 瓶,500 毫升无菌不含钙和镁的汉克平衡盐溶液 (CMF-HBSS)。在加入解离酶溶液之前,该溶液用于洗涤和灌注肝脏。

小瓶 #2:22,500 单位胶原酶和 30 单位弹性蛋白酶,5 小瓶 Worthington 胶原酶(代码:CLS-1)和弹性蛋白酶(代码:ESL),通过 0.22µm 孔径膜过滤并冻干。使用前,用 L-15/MOPS 溶液重新配制,并按照以下程序的指示轻轻旋转以溶解内容物。将未复溶的小瓶储存在 2–8°C。

小瓶 #3:每瓶 1,000 单位 DNase I,5 小瓶 Worthington DNase I(代码:D),通过 0.22µm 孔径膜过滤并冻干。使用前,用 L-15/MOPS 溶液重新配制,并按照以下程序的指示轻轻旋转以溶解内容物。将未复溶的小瓶储存在 2–8°C。

小瓶 #4:0.15M MOPS,pH 7.5,1 瓶,75ml 0.15M MOPS,pH 7.5 缓冲液浓缩物,用于缓冲重组的 Leibovitz L-15 培养基。小瓶 #5:7.5% 碳酸氢钠 (NaHCO3),1 瓶,100ml 7.5% 碳酸氢钠浓缩液,用于缓冲稀释的 CMF-HBSS。

小袋,装有 Leibovitz L-15 培养基粉末,1 x 1 升 通过切开信封顶部并将内容物倒入装有大约 800 毫升细胞培养级水的烧杯中,重构小袋中的全部内容物。再用 100 毫升水冲洗小袋 2 – 3 次。使总体积达到 1000 毫升并通过 0.22 微米孔径的膜过滤。

参考

Alpini 等,“肝细胞分离的最新进展”,Hepatology (1994) 20:494-514。

贝里,明尼苏达州,爱德华兹,上午和巴里特,GJ;分离的肝细胞:制备、特性和应用,RH Burdon 和 PH Van Knippenberg,编辑,爱思唯尔,阿姆斯特丹,纽约,牛津,第 1 章。2, 1991.

Chen HL、Wu Hl、Fon CC、Chen PJ、Lai、MY、Chen DS (1998) 成人肝细胞的长期培养。生物医学科学 5:435-440

DeRobertis, EDP, Saez, FA 和 DeRobertis, EMF: Cell Biology, 6th ed., WB Saunders Co., Philadelphia, PA, 1975。

Freshney, R. Ian:动物细胞培养,Alan R. Liss, Inc.,纽约,2000 年。

汉克斯、JH 和*,RE:Proc。社会。经验。生物。医学,71, 196 1949。

Jakoby, WB 和 Pastan, IH:酶学方法卷。第 18 页 121,学术出版社,1979 年。

Le Cluyse EL (2001) 用于体外评估细胞色素 P450 酶表达和调节的人类肝细胞系统。欧元。J Pharm Sci 13:343-368。

Le Cluyse EL, PL Bullock, A Parkinson (1996) 在大鼠肝细胞长期培养中恢复和维持正常肝脏结构和功能的策略。高级 Drug Del Rev 22:133-186。

Leibovitz, A.:与大气自由气体交换的组织/细胞培养物的生长和维持,Am。J. Hyg., 78, 173, 1963。

Seglen,PO,细胞生物学方法,卷。XIII,David M. Prescott 编辑,Ch。4,第 29-83 页,学术出版社,1976 年。

沃辛顿酶手册,沃辛顿生化公司,新泽西州弗里霍尔德,1993 年。

沃辛顿组织解离指南,沃辛顿生化公司,新泽西州莱克伍德,2003 年。 

相关产品:

胶原酶 (CLS1-4/CLSPA)
脱氧核糖核酸酶I (DP/D/DCLS/D2/DPFF/DPRF)
弹性蛋白酶 (ES/ESL)
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描述 活动 代码 货号 价钱
肝细胞分离: N/A
用于执行五次单独成年大鼠肝脏灌注的试剂盒。包含五个一次性 CLSH 酶小瓶、五个一次性 DNase 小瓶、10X CMF-Hank's 平衡盐溶液、L-15 培养基粉末、0.15M MOPS 缓冲液、7.5% 碳酸氢钠溶液和优化方案。该套件由 Worthington 进行了使用测试,以确保性能。 
储存在 2-8°C。
his LK002060 460.00 美元
胶原酶/弹性蛋白酶小瓶 (CLSH)
来源: HIS 试剂盒中的Clostridium histolyticum
酶小瓶,其中包含 20,000 单位的胶原酶(代码:CLS-1)和 30 单位的弹性蛋白酶(代码:ESL),通过 0.22 微米膜过滤并冻干。 
储存在 2-8°C。
每瓶≥20,000 单位胶原酶/30 单位弹性蛋白酶 CLSH LK002066 54.00 美元
LK002067 237.00 美元
DNase Vial (D2)
来源:牛胰腺
木瓜蛋白酶解离系统的一个组成部分。这种材料是 0.22 微米膜过滤并在高压灭菌的小瓶中冻干的。用 0.5 ml EBSS 或等价物重构的小瓶产生 2000 单位/ml 脱氧核糖核酸酶 (1 mg/ml) 的溶液。 
储存在 2-8°C。
每瓶≥1,000 Kunitz单位 D2 LK003170 25.00 美元
LK003172 84.00 美元
Hank's 平衡盐溶液 10X (HBSS10)
来源: N/A
无菌无钙和镁 Hank's 平衡盐溶液,10X CMF-HBSS 浓缩物,在 HIS 试剂盒中提供;1 x 500 ml 
储存于 2-8°C。
HBSS10 LK002064 85.00 美元
L-15 培养基粉末 (L15NK)
来源: N/A 
Leibovitz L-15 培养基粉末,NCIS 套件的一个组件。用细胞培养级水和 0.22 微米过滤器将小袋、QS 的全部内容物重新溶解至 1 升。适用于细胞分离和培养应用。 
储存在 2-8°C。
L15NK LK003250 30.00 美元
0.15米,MOPS缓冲液,(MOPS)
来源: N / A 
0.15M MOPS,pH为7.5,0.22u过滤。用于在肝细胞分离系统中缓冲构成的 Leibovitz L-15 培养基的缓冲液浓缩物。 
储存在 2-8°C。
拖把 LK002070 36.00 美元
碳酸氢钠,7.5%,(NAH)
来源: N / A 
7.5%碳酸氢钠浓缩物(的NaHCO 3),用于缓冲稀释CMF-HBSS; 1 x 100 ml 
储存于 2-8°C。
不适用 NAH LK002069 33.00 美元