支原体是小的原核生物，它们太小而无法在显微镜下看到，并且不能被普通抗生素试剂消除。支原体可能会影响细胞系的细胞生长、增殖和形态，从而可能导致不可靠的实验结果。大约 15% 到 35% 的实验室细胞培养物被支原体污染。因此，建议经常控制以保证无支原体的环境。 

分析方法

CLS 提供支原体检测的短期和长期测试。在前者中，样品在到达后立即进行测试，而在后者中，开始细胞培养并在无抗生素培养 14 天后对细胞进行测试。支原体检测是使用两点检测系统进行的，该系统包括 PlasmoTest™ – 支原体检测试剂盒 (Invivogen) 和 Certus QC – mycoADVANCED 检测试剂盒 (Certus)。

比色报告基因测定

该测试是基于细胞的比色测定。在支原体存在的情况下，报告细胞系会诱导信号级联反应，从而触发培养基中的颜色从红色变为蓝色。该测定在 96 孔多孔板中进行。在微孔板分光光度计中检测 620-655 nm 的信号。检测到所有支原体和胆原体物种，以及细胞培养物中的其他污染物，例如细菌。结果显示在下面的条形图中：

等温扩增

等温扩增是一种基于支原体特异性 DNA 的等温扩增与使用 DNA 嵌入染料的实时检测相结合的快速且可靠的测试。该测定法可以检测出占污染 >95% 的六种常见的物种：口腔分枝杆菌、猪鼻分枝杆菌、精氨酸分枝杆菌、发酵分枝杆菌、人型分枝杆菌和莱氏分枝杆菌。由于序列同源性，还将检测到其他支原体物种（肺炎支原体、鸡毒支原体和滑膜支原体）。为了确定样品是支原体阳性还是阴性，需要研究解链温度 (Tm)。不同熔化温度的结果如下所示： 

等温扩增结果的评估

所有熔化温度及其各自的测试结果解释如下：

比色报告分析结果的评估

如果测试呈阳性，则存在 5*10 2 – 5*10 5范围内的菌落形成单位 (CFU) 。不同支原体种类的 CFU/ml 详细列表如下所示：