Enzymatics L6030-HC-L 说明书

 

 

货号:L6030-HC-L

品名:T4 DNA Ligase (Rapid)  (T4 DNA连接酶(快速))

产品描述:

T4 DNA连接酶催化双链DNA或RNA的末端5'磷酸和3'羟基之间形成磷酸二酯键。该酶有效连接钝端和粘端,并修复双链DNA,RNA或DNA / RNA杂合体中的单链缺口(1)。

 

规格:

600,000 U/ml

浓度

240,000 U

保存

-25°C至-15°C

纯度(SDS-PAGE)

> 99%

活性:

300,000 U/mg

SS核酸外切酶

6,000 U< 1.0 % Released

DS核酸外切酶

6,000 U< 1.0 % Released

DS内切核酸酶

6,000 U=No Conversion

大肠杆菌 DNA污染

6,000 U <10 copies

 

蛋白质来源

携带克隆的T4 DNA连接酶基因的重组大肠杆菌菌株。

 

提供

 

10 mM Tris-HCl
50 mM KCl
1 mM DTT
0.1 mM EDTA
50% glycerol
pH 7.5 @ 25°C

 

随附:

B1010 (2X Rapid Ligation Buffer)
B6030 (10X T4 DNA Ligase Buffer)

2X Rapid Ligation Buffer (B1010):
132mM Tris-HCI
20 mM MgCl2
2 mM DTT
2 mM ATP
15% PEG 6000
pH 7.6 @ 25°C

10X T4 DNA Ligase Buffer (B6030):
500mM Tris-HCI
100 mM MgCl2
50 mM DTT
10 mM ATP
pH 7.6 @ 25°C

 

单位定义 
1单位定义为在23℃孵育30分钟后,在50μl1X DNA连接酶缓冲液中加入100ng具有粘性末端的DNA片段的50%所需的DNA连接酶的量。

 

使用说明:

1、反应设置

Amount

Description

Final Concentration

10 uL

2X Rapid Ligation Buffer

1X

X uL

Vector

1-10 ng/uL

X uL

Insert

1-10 ng/uL

1 uL

T4 DNA Ligase (600 U/ uL)

30 U/uL

X uL

Type I Water

N/A

20 uL

Total Volume

 

 

2、过程操作

1)将所有上述组分加入干净的反应容器中,通过移液充分混合。

2)25°C孵育10分钟。

3)使用PCR清洁柱立即纯化DNA并洗脱约50μL。

4)– 或 – 在TE或水中立即稀释(至少1:10,但足以使0.1-10ng连接产物转化)

5)将0.1-10ng连接产物转化为与载体相容的化学或电子感受态细胞系

 

3、其他

在1X T4 DNA连接酶反应缓冲液中用Lambda-Hind III DNA片段底物测量,一个酶酶T4 DNA连接酶粘性末端单位相当于约3个粘性末端单位。

一个Weiss单位大约相当于22个Enzymatics粘性末端单位。

T4 DNA连接酶是ATP依赖性的。建议在-20°C储存一年后丢弃反应缓冲液,并用新鲜缓冲液代替以确保*性能。当靶向插入片段:载体比率在2和6之间时,单插入连接是*的。高于6:1的比率将促进插入多个片段,而降至2:1以下将降低连接效率。

对于有问题的连接或DNA浓度未知的情况,可能需要改变比率并进行多次连接。

高浓度PEG的存在将显着降低电感受态细胞的转化效率。为了zui大限度地转化为电感受态细胞,建议采用以下方法:

*: 连接后,使用DNA纯化离心柱纯化产物并在50μLTE中洗脱。DNA现在已准备好转化。要转化的DNA的zui终数量应该在0.1-10ng范围内。

更好: 在ddH2O或TE中稀释连接产物以降低PEG浓度。要转化的DNA的zui终数量应该在0.1-10ng范围内。

Enzymatics的高浓度T4 DNA连接酶与2X快速连接缓冲液结合使用,极大地刺激了平端连接的速度和效率,因此不建议长时间孵育(> 10分钟),并可能大大降低连接产物的转化效率。为了使正确的插入/载体组合的转化效率zui大化,推荐使用以下方案。

酶学10X T4 DNA连接酶缓冲液不含PEG,并且与标准连接方案相兼容,该方案不规定使用快速/快速/快速格式缓冲液。

 

 

部分产品信息:

货号

品名

规格

浓度

品牌

N2070-10-L

 ATP Solution 

50 µmol

10 mM

Enzymatics

N2050-10-L

10 mM dNTP Solution Mix

100 µmol

10 mM

Enzymatics

N2010L

100 mM 75µmol dNTP Solution Set 

75 µmol

100 mM

Enzymatics

N2010-A-L

100 mM dATP Solution 

75 µmol

100 mM

Enzymatics

N2050L

100µmol dNTP Solution Mix 

100 µmol

25 mM

Enzymatics

Y9180L

10x Uracil Cleavage System 

750 Reactions

N/A

Enzymatics

P7670

2x HiFi PCR Master Mix 

1 rxn

2x

Enzymatics

Y9420L

5x ER/A-Tailing Enzyme Mix 

24 reactions

N/A

Enzymatics

Y9380L

E. coli Pyrophosphatase 

50 U

100 U/mL

Enzymatics

Y9030L

E. coli Single-Stranded DNA Binding Protein 

1.5 mg

2.75 mg/ml

Enzymatics

Y9140-HC-L

End-Repair Mix (High Concentration) 

75 Reactions

1 Rxn/µL

Enzymatics

Y9140-LC-L

End-Repair Mix (Low Concentration) 

200 Reactions

1 Rxn/µL

Enzymatics

Y9080L

Endonuclease VIII 

10,000 U

10,000 U/ml

Enzymatics

P7600L

EnzScript™ (MMLV Reverse Transcriptase RNase H-) 

10,000 U

200,000 U/mL

Enzymatics

X8010L

Exonuclease I 

30,000 U

20,000 U/ml

Enzymatics

X8020L

Exonuclease III 

50,000 U

100,000 U/ml

Enzymatics

P7010-HC-L

Klenow (3′→ 5′ exo-) (High Concentration) 

10,000 U

50,000 U/ml

Enzymatics

P7010-LC-L

Klenow (3′→ 5′ exo-) (Low Concentration) 

10,000 U

5,000 U/ml

Enzymatics

P7060L

Klenow Fragment 

2,500 U

5,000 U/ml

Enzymatics

X8030L

Lambda Exonuclease 

10,000 U

5,000 U/ml

Enzymatics

P7040L

M-MuLV Reverse Transcriptase 

100,000 U

200,000 U/ml

Enzymatics

P7090L

Mako DNA Polymerase (3′→ 5′ exo-) 

3,000 U

30,000 U/ml

Enzymatics

P7140-HC-L

Manta 1.0 DNA Polymerase (High Concentration) 

100,000 U

400,000 U/ml

Enzymatics

P7140-LC-L

Manta 1.0 DNA Polymerase (Low Concentration) 

100,000 U

40,000 U/ml

Enzymatics

P7610L

NGS Library Prep: 2X VeraSeq™ PCR Mix – 250 Reactions 

250 Reactions

2X

Enzymatics

P7590L

Phoenix™ Hot Start Taq DNA Polymerase 

500 U

5,000 U/ml

Enzymatics

P7460L

Poly(A) Polymerase 

1,000 U

5,000 U/mL

Enzymatics

Y9260L

RecA 

1.5 mg

2.0 mg/mL

Enzymatics

Y9220L

RNAse H 

5,000 U

5,000 U/ml

Enzymatics

Y9240L

RNAse Inhibitor 

20,000 U

40,000 U/ml

Enzymatics

L6010L

T3 DNA Ligase 

900,000 U

3,000,000 U/ml

Enzymatics

L6030-LC-L

T4 DNA Ligase 

150,000 U

120,000 U/ml

Enzymatics

L6030-HC-L

T4 DNA Ligase (Rapid) 

240,000 U

600,000 U/ml

Enzymatics

P7080L

T4 DNA Polymerase 

2,000 U

3,000 U/ml

Enzymatics

Y9130L

T4 Gene 32 Protein 

1.0 mg

10 mg/mL

Enzymatics

Y9040L

T4 Polynucleotide Kinase 

10,000 U

10,000 U/ml

Enzymatics

L6050L

T4 RNA Ligase 1 

10,000 U

20,000 U/ml

Enzymatics

L6080L

T4 RNA Ligase 2 

4,500 U

30,000 U/ml

Enzymatics

L6070L

T4 RNA Ligase 2 Truncated 

500 U

5,000 U/ml

Enzymatics

L6020L

T7 DNA Ligase 

900,000 U

3,000,000 U/ml

Enzymatics

P7260L

T7 DNA Polymerase 

3,500 U

10,000 U/ml

Enzymatics

P7180L

T7 RNA Polymerase 

50,000 U

50,000 U/ml

Enzymatics

L6060L

Taq DNA Ligase 

20,000 U

40,000 U/ml

Enzymatics

P7110L

Taq DSC 2.0 DNA Polymerase 

1,250 U

5,000 U/ml

Enzymatics

P7250L

Taq-B DNA Polymerase 

10,000 U

5,000 U/ml

Enzymatics

P7620L

TaqIT 

5,000 U

50,000 U/mL

Enzymatics

P7070L

Terminal deoxynucleotidyl Transferase (TdT) 

6,000 U

20,000 U/ml

Enzymatics

G5020L

Thermolabile UDG 

500 U

1,000 U/ml

Enzymatics

Y9370L

Thermostable Pyrophosphatase 

1,250 U

2,000 U/ml

Enzymatics

G5010L

Uracil DNA Glycosylase 

10,000 U

2,000 U/ml

Enzymatics

P7511L

VeraSeq™ 2.0 High-Fidelity DNA Polymerase 

500 U

2,000 U/ml

Enzymatics

P7520L

VeraSeq™ ULtra DNA Polymerase 

500 U

2,000 U/ml

Enzymatics

L6030-W-L

WGS Ligase 

24 Reactions

N/A

Enzymatics

P7640L

ZipScript™ One-Step RT-qPCR Kit 

1000 Reactions

N/A

Enzymatics

P7020-HC-L

φ29 DNA Polymerase (High Concentration) 

2,000 U

100,000 U/ml

Enzymatics

P7020-LC-L

φ29 DNA Polymerase (Low Concentration) 

2,000 U

10,000 U/ml

Enzymatics

 

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