Nanolight H-腔肠素说明书

 

 

Nanolight ®科技是一家生物技术公司,开发自然,发光的海洋蛋白或海洋生物发光的广阔的应用前景。NanoLight部门致力于成为制药,农业和研究产品行业新产品开发的高价值试剂和报告系统的先进者。

Nanolight H-腔肠素说明书

Coelenterazine h

Cat#301 Coelenterazine h

 

Coelenterazine h(天然Coelenterazine的2-脱氧衍生物)

比具有Apoaequorin的天然Coelenterazine高2倍的 初始光输出。Renilla荧光素酶
降低但持续时间更长。

化合物ID: Coelenterazine h或2-Deoxycoelenterazine
CAS#: 50909-86-9
IUPAC名称:

2,8-二苄基-6-(4-羟基苯基)咪唑并[1,2-a]吡嗪-3(7H) – 酮

分子式: 26 21 2
MW: 407.5
结构体:

 

 

 

荧光素作为过滤的,冻干的,分批控制的底物
以500μg等分试样(1mg = 2×500μg)和5mg和10mg(2×5mg)等分试样运输。

冻干荧光素的优点是:

  • 为每组实验预先分装少量新鲜底物
  • 保质期长(在氩气下包装)
  • 由于其精细的晶体结构,溶解速度更快
  • 等分试样之间的质量始终如一

运输:通过FedEx或UPS在RT,隔夜或第二次发货。储存在-80 ° C。避光。

 

背景介绍

腔肠素(Coelenterazine)是自然界中资源丰富的天然荧光素,是绝大多数海洋发光生物(超过75%)的光能贮存分子。腔肠素可作为许多荧光素酶的底物,如海肾荧光素酶(Rluc),Gaussia分泌型荧光素酶(Gluc),以及包括水母发光蛋白(aequorin)和薮枝螅发光蛋白(Obelia)在内的光蛋白(Photoproteins)。与甲虫(或萤火虫)荧光素/荧光素酶系统不同,腔肠素/荧光素酶系统不需要三磷酸腺苷(ATP),更便于体内生物荧光的研究。因此,腔肠素常用作基于荧光分析的报告基因检测以及活体动物检测的发光底物。

目前商业化的腔肠素应用普遍的是天然腔肠素(Coelenterazine native),另外还有很多腔肠素衍生物如Coelenterazine h、Coelenterazine 400a、Coelenterazine cp、Coelenterazine f、Coelenterazine hcp、Coelenterazine n等被一一合成。理论上这些腔肠素可用于相同的实验,但是由于其发光波长,细胞膜渗透性,光量子效率上的差异,使得其在相同应用上表现出不同的实验效果。

腔肠素的种类

天然腔肠素(Coelenterazine Native)

也叫腔肠素游离酸,是海肾荧光素酶(Rluc)和Gaussia荧光素酶(Gluc)等多种荧光素酶的作用底物,也是水母发光蛋白的辅助因子。

产品应用检测活细胞中钙离子浓度、基因报告分析、BRET(生物发光共振能量转移)研究、ELISA、HTS以及组织或细胞中ROS水平的化学发光检测等。

腔肠素h(Coelenterazine h)

是海肾荧光素酶(Rluc)和Gaussia荧光素酶(Gluc)等多种荧光素酶的作用底物,也是水母发光蛋白的辅助因子。

产品应用:发光强度比天然腔肠素高10倍以上,适用于报告基因分析,活细胞中钙离子浓度检测。

腔肠素hcp(Coelenterazine hcp)

是天然腔肠素的衍生物之一。腔肠素hcp-水母发光蛋白复合物的荧光强度比天然腔肠素复合物高190倍,且量子产量高和Ca2+反应速度快,非常适合用于钙离子水平的检测。

产品应用:适合用于钙离子水平的检测。

腔肠素400a(Coelenterazine 400a)

天然腔肠素的衍生物之一,也称为DeepBlue CTM,是海肾荧光素酶(Rluc)的良好底物,其大发射波长在400nm左右,对GFP受体蛋白的信号干扰小,不能被Gaussia分泌型荧光素酶(Gluc)氧化。

产品应用:BRET(生物发光共振能量转移)研究的优先选择腔肠素类底物

腔肠素f(Coelenterazine f)

与天然腔肠素结构上的仅有差别在于将其R-1位酚基上的羟基替换成氟(F),是水母发光蛋白(aequorin)的优先选择底物。与天然腔肠素-水母蛋白(Apoaequorin)复合物产生的光子总数相比,此复合物仅产生80%的光子能。其优点在于:仅需非常少的时间来生成aequorin复合物。当其与Ca2+接触,即可快速且高产量的发光,产能强度是天然腔肠素的20倍。另外其具有好的细胞渗透性。

产品应用:当需要*的Ca2+检测灵敏度来研究水母蛋白再生实验,推荐使用本底物。

腔肠素cp(Coelenterazine cp)

是天然腔肠素的衍生物之一。其与水母蛋白(Apoaequorin protein)形成的光蛋白复合物的发光强度是天然腔肠素的15倍,且具有更快的Ca2+反应速率。

产品应用:可用于 G-蛋白偶联受体(GPCRs)药物的高通量筛选研究。

腔肠素n(Coelenterazine n)

所有的腔肠素衍生物中荧光强度是弱的,且对Ca2+反应速率也明显低于天然腔肠素。

腔肠素e(Coelenterazine e)

一种天然腔肠素衍生物,结构上比天然腔肠素多了一个乙基。作为海肾荧光素酶的底物,其荧光强度是天然腔肠素的137%。腔肠素e具有高的体外水母发光蛋白反应性,且具有双发射峰(405& 465),从而可在pCa 5-7范围内通过双波长的比例测定Ca2+浓度,由于该法不依赖于腔肠素浓度,因此提高了检测性。因该衍生物的细胞通透性较差,所以对于细胞内相关实验则无此优势,。

产品应用:非常有用的Ca2+低灵敏检测底物。

二甲基腔肠素(Coelenterazine 2-methyl )

是一种细胞强抗氧化剂,可作用于细胞内的活性氧,如单态氧和超氧阴离子,而氧化应激是细胞凋亡过程的中介环节,另外该化合物具有无毒、细胞膜通透性等特性,故可用于研究细胞凋亡。

产品应用:1)作为研究细胞凋亡的重要工具;2)二甲基腔肠素还可通过化学发光法来检测超氧阴离子和过氧亚硝酸阴离子水平。

 

Nanolight H-腔肠素使用方法:

Cat# 301 h-Coelenterazine Cas# 50909-86-9 MW 407.46

 

一般说明:H-腔肠素(CTZ)是天然腔肠素的脱氢氧衍生物。
H-CTZ和其他类似物的研究可追溯到1989年,当时生物化学杂志,作者:O.Shimomura博士(Biochem.J.1989年8月1日;261(3);913-920)
已发布。
Shimomura博士、Musicki博士和Kishi博士合成了几种不同的类似物coelenterazine和用这些代替了天然的柯仑他拉嗪来制造我们喜欢称之为“带电”的东西。
绿松石素,意思是当分子被加上三个钙原子在“弹出”时,基质就可以发光了。合成的“半合成绿松石”对钙有很高的敏感性,记录了其发射动力学以及总光子通量和光谱。
总结他们对h-ctz的发现;当与自然发生或自然发生的比较时
coelenterazine,h-coelenterazine产生的初始光强度是总光强度的10倍。
产生的光子总数为82%。基本上,初的光输出被压缩,10倍的闪光强度在一个适度较短的上升时间被注意到。
读者感兴趣的可能是下面提到的类似物CTZ-F,其中氟取代了R环上的对羟基。这种替代产生18倍的强度
与本地相比,上升时间非常短,与本地相比,总通量为80%。 

 

请注意:光蛋白与荧光素酶有明显不同。H-CTZ和CTZ-F可能与Renilla荧光素酶一起使用,但两者都不能与Gaussia荧光素酶一起使用。

 

作为绿松石素底物的腔四嗪类似物:

 

 

作为Renilla荧光素酶底物的coelenterazine类似物:

 

贮存和贮存寿命:*干燥的H-腔四嗪粉末在密闭管中相当稳定,在-20℃或更低温度下贮存,避光。为了达到宜效果,将任何CTZ的表面积保持在低限度,并使用氩防止自动氧化。
稀释:在用于所有光度计分析或实验之前,应立即制备新鲜的“增溶”溶液。如果您使用CTZ作为筛选工具,对于多个井或多个板阅读器,请组成一个非常集中的库存解决方案CTZ。+
酒精或丙二醇(可选择口味),然后应将溶解的CTZ添加到水缓冲液中(宜:脱气)。这个解决方案是什么应该进入你的光度计泵水库。
如果在动物研究中使用,我们建议使用我们的优化注射A-lume产品cat.301-inj。

 

 

当执行多板阅读器分析时,您想比较RLU
结果在96或更多板块的口井和后一口井之间,请注意
CTZ将在水溶液中持续氧化(见下图,使用两种广泛使用的缓冲液进行)。
用于适当的时间相关控件,以便能够比较结果。