KlenTaq-S 测序酶
简要描述：KlenTaq-S 测序酶是Taq DNA 聚合酶的改造版，为 Taq DNA 聚合酶的大片段，并做了基因突变。本酶具有 5’→3’聚合酶活性，无5’→3’外切酶活性和 3’→5’外切酶活性。
详细介绍
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本公司 KlenTaq-S 测序酶是重组表达，并经多步纯化制备的重组蛋白。
活性定义活性单位指在 72℃下， 1×AM PCR Buffer 1，30 min 内将 10 nmole dNTP 掺入酸不溶性物质所需的酶量。特点
1.尤其适合 ddNTP 等修饰核苷酸的掺入反应
2.相比全长 Taq DNA 聚合酶，本酶比活性有所降低
适用范围
ddNTP 终止法DNA 测序（一代测序）
焦磷酸解反应延伸法 SNP 分析
质量控制
经过严格的质控检测，确保该产品具有最高的活性和纯度。
酶贮存缓冲液
20 mM Tris-HCl (pH 8.0), 100 mM KCl, 1 mM DTT, 0.1 mM EDTA, 0.5% Nonidet P40, 0.5%Tween20, and 50% glycerol.
应用举例
以下反应举例为 50 μl 标准 PCR 体系，仅供参考。实际 PCR 条件应根据模板、引物、目的片段大小加以优化，确定最佳反应条件。
1） 按下表配制反应体系
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组份 |
体积/μl |
终浓度 |
|
10×AM PCR Buffer 1 |
5 |
1× |
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dNTPs（2.0 mM） |
5 |
0.2 mM |
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引物 F（10 μM） |
1.5 |
0.3 μM |
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引物R（10 μM） |
1.5 |
0.3 μM |
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Template |
Varable* |
/ |
|
KlenTaq-S测序酶（5U/μl） |
0.5 |
2.5U |
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ddH2O |
Varable |
/ |
|
总体积 |
50 |
/ |
*模板DNA用量参数(50 μl反应体系):
人基因组DNA100-1000 ng ; 微生物基因组DNA 10-100ng；PCR产物 1 ng-10 ng； Plasmid DNA 5-30 ng ; cDNA from RT reaction 1-5 μl 。
2） 按如下条件进行反应，
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95℃ |
2-5 min |
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95℃ |
15 sec |
25-35 Cycles |
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55~72℃ |
20 sec |
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72℃ |
1kb/min |
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72℃ |
5 min |
3） 琼脂糖凝胶电泳检测PCR 产物，或按实验目的进行后续操作。
注意事项1.PCR 条件和野生型 Taq DNA 聚合酶类似，对特定 DNA 的测序反应可能需要优化。2.本酶扩增能力较野生型 Taq DNA 聚合酶有所降低，PCR 产量有所降低，不建议用于常规 PCR。3.不可用于 Taqman 探针法 q-PCR。