使用说明：
1. DNA转染：
a. 细胞培养(以六孔板为例，其它培养板或培养皿可参考六孔板)：在转染前一天(18-24小时)按照每孔约20-70万细胞(具体的细胞数量据细胞类型、大小和细胞生长速度等而定)接种到六孔板内进行培养，使第二天细胞密度能达到约70-90%。
b. 在进行下述转染步骤前，把培养有细胞的六孔板每孔换成2ml新鲜培养液(含有血清，不含抗生素)。可以使用含有血清并含有抗生素的新鲜培养液，但抗生素的存在对于有些细胞容易导致转染后出现一定的细胞毒性。
c. 参考下表，对于待转染的六孔板中每一个孔的细胞，取两个洁净无菌离心管，分别加入125μl不含抗生素和血清的DMEM培养液(高糖DMEM或低糖DMEM均可)或Opti-MEM^® Medium，然后于其中一管加入2.5μg质粒DNA，并用枪轻轻吹打混匀；另一管加入5μl Lipo6000™转染试剂，用枪轻轻吹打混匀，请特别注意不可Vortex或离心。室温静置5分钟后(通常最长不宜超过25分钟)，将含有DNA的培养液用枪轻轻加入含Lipo6000™转染试剂的培养液中，轻轻颠倒离心管或者用枪轻轻吹打混匀，室温静置5分钟(室温存放6小时内稳定)。

注1：对于六孔板中一个孔的细胞，Lipo6000™转染试剂的用量可以在3-12.5μl范围内进行适当调节，DNA用量建议固定在2.5μg，但也可以在1-4μg的范围内进行适当调节。通常质粒用量(μg)和Lipo6000™(μl)的用量比例为1:2或1:3比较常用，如有必要可以在1:0.5-1:5的范围内优化转染效果，上表推荐的比例为1:2，此时Lipo6000™的用量相对较少，既经济又高效。最佳的转染条件，因不同的细胞类型和培养条件而有所不同，可以在上述推荐范围内自行优化转染条件。
注2：质粒的浓度宜控制在0.5-5μg/μl范围内。
注3：对于多个孔转染相同数量相同质粒的情况可以把每个孔所需的Lipo6000™转染试剂和DNA混合物分别配制，然后一起混合在同一个离心管内，后续混匀并孵育5分钟后，可以按照推荐用量滴加到细胞培养器皿内。
注4：对于其它培养板或培养器皿，各种试剂的用量可以按照细胞培养器皿的培养面积按比例进行换算。如果转染寡核苷酸或RNA等可以参考转染DNA的条件进行。
d. 无论是贴壁细胞还是悬浮细胞，按照六孔板每孔250μl Lipo6000™转染试剂-DNA混合物的用量，均匀滴加到整个孔内，随后轻轻混匀。
e. 为达到最高的转染效率，细胞在转染后培养4-6小时后宜更换为新鲜的完全培养液(对于Hela细胞，推荐在转染4小时后更换培养液，对于NIH3T3、CHO、HEK293T和HEK293FT细胞，推荐在转染6小时后更换培养液)。
f. 继续培养约24-48小时后，即可用适当方式检测转染效果，例如荧光检测、Western、ELISA、报告基因等，或加入适当的筛选药物如G418等进行稳定细胞株的筛选。
2. siRNA转染：
a. 细胞培养(以六孔板为例，其它培养板或培养皿可参考六孔板)：在转染前一天(18-24小时)按照每孔约20-70万细胞(具体的细胞数量据细胞类型、大小和细胞生长速度等而定)接种到六孔板内进行培养，使第二天细胞密度能达到约30-50%。
b. 在进行下述转染步骤前，把培养有细胞的六孔板每孔换成2ml新鲜培养液(含有血清，不含抗生素)。可以使用含有血清并含有抗生素的新鲜培养液，但抗生素的存在对于有些细胞容易导致转染后出现一定的细胞毒性。
c. 参考下表，对于待转染的六孔板中每一个孔的细胞，取两个洁净无菌离心管，分别加入125μl不含抗生素和血清的DMEM培养液(高糖DMEM或低糖DMEM均可)或Opti-MEM^® Medium，然后于其中一管加入100pmol siRNA，并用枪轻轻吹打混匀；而另一管加入5μl Lipo6000™转染试剂，用枪轻轻吹打混匀，请特别注意不可Vortex或离心。室温静置5分钟后(通常最长不宜超过25分钟)，将含有siRNA的培养液用枪轻轻加入含Lipo6000™转染试剂的培养液中，轻轻颠倒离心管或者用枪轻轻吹打混匀，室温静置5分钟(室温存放6小时内稳定)。

注1：对于六孔板中一个孔的细胞，Lipo6000™转染试剂的用量可以在2.5-7.5μl范围内进行适当调节，siRNA用量可以在50-250pmol的范围内进行适当调节。通常siRNA用量(pmol)和Lipo6000™(μl)的用量比例为20:1，如有必要可以在10:1-40:1的范围内优化转染效果，上表推荐的比例为20:1，此时Lipo6000™的用量相对较少，既经济又高效。最佳的转染条件，因不同的细胞类型和培养条件而有所不同，可以在上述推荐范围内自行优化转染条件。
注2：siRNA的推荐浓度为20μM，常用的浓度范围为10-50μM。
注3：对于多个孔转染相同数量相同质粒的情况可以把每个孔所需的Lipo6000™转染试剂和siRNA混合物分别配制，然后一起混合在同一个离心管内，后续混匀并孵育5分钟后，可以按照推荐用量滴加到细胞培养器皿内。
注4：对于其它培养板或培养器皿，各种试剂的用量可以按照细胞培养器皿的培养面积按比例进行换算。如果转染寡核苷酸或RNA等可以参考转染DNA的条件进行。
d. 无论是贴壁细胞还是悬浮细胞，按照六孔板每孔250μl Lipo6000™转染试剂-siRNA混合物的用量，均匀滴加到整个孔内，随后轻轻混匀。
e. 为达到最高的转染效率，细胞在转染后培养4-6小时后宜更换为新鲜的完全培养液(对于Hela细胞，推荐在转染4小时后更换培养液，对于NIH3T3、CHO、HEK293T和HEK293FT细胞，推荐在转染6小时后更换培养液)。
f. 继续培养3-5天后，即可用适当方式检测siRNA对于靶基因的下调效果，例如qPCR、Western、ELISA、报告基因等。

常见问题：
1. 转染效率低：
a. 优化质粒与Lipo6000™转染试剂比例，对于难转染的细胞，可适当加大质粒用量。
b. 应用高纯度、无菌、无污染物的质粒进行转染，DNA纯度方面A₂₆₀/A₂₈₀比值要接近1.8，通常宜控制在1.8-1.9范围内，偏低则有可能有蛋白污染，偏高则有可能有RNA污染。可以使用上海金畔生物科技有限公司生产的质粒大量抽提试剂盒(D0026) 进行抽提，以保证可以获得较高的转染效率。
c. 贴壁细胞转染时状态良好，细胞密度达70-90%时才可进行转染，过稀或过密都可能影响转染效率，不同细胞的最佳转染密度需要自行摸索。悬浮细胞 宜在对数生长期进行转染。
d. 需使用无抗生素和无血清培养液配制Lipo6000™转染试剂和质粒或siRNA等的混合物。
e. 转染后培养时间不足，而被误以为转染效率偏低。不同细胞转染后至显著表达所需要培养的时间通常为24-48小时。
f. 检查细胞是否有支原体感染，支原体感染会影响细胞增殖，并很可能影响转染效率。
g. 如果没有检测到目的蛋白表达，应该仔细核对转染质粒的测序结果，确保测序结果和读码框完全正确。
h. 如果靶基因的敲减(knockdown)效果欠佳，应该考虑尝试设计不同的siRNA。
2. 细胞毒性较大：
a. 缩短转染时间，在转染后较短时间内更换新鲜的细胞培养液。
b. 减少质粒用量，按照比例减少Lipo6000™转染试剂。
c. 检查是否转染时细胞密度太低。
附录：
常用多孔板和培养皿的尺寸、培养面积、细胞培养量和推荐的培养体积等相关数据表：

  *Diameter and growth area may vary depending on the manufacturer, and the listed sizes are from Corning.
  **These wells or dishes are square.

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