甲基绿-派洛宁染色液(C0119)

甲基绿-派洛宁染色液(C0119)
甲基绿-派洛宁染色液
产品编号: C0119
产品包装: 100ml
产品价格: 223.00元
产品简介
产品编号 产品名称 产品包装 产品价格
C0119 甲基绿-派洛宁染色液 100ml 223.00元

上海金畔生物科技有限公司生产的甲基绿-派洛宁染色液(Methyl Green-Pyronin Staining Solution,也称MGP染色液)是一种组织或细胞染色时常用的可以把细胞核染成绿色或蓝绿色,把细胞浆和细胞核中的核仁染成红色的染色液。
甲基绿可以和细胞核中的DNA结合,从而产生细胞核染色;而派洛宁可以和细胞浆或核仁中的RNA结合,从而可以使细胞浆和核仁被染色。
改进了染色液配制方法,不含很多甲基绿-派洛宁染色液中使用的剧毒甲醇。
本染色液可以和免疫荧光染色或免疫组化染色配合使用。一方面可以在本甲基绿-派洛宁染色液染色后进行免疫荧光染色或其它染料的染色,另一方面也可以在免疫组化染色后再进行甲基绿-派洛宁复染。
一个包装的本染色液至少可以染色200个样品。
包装清单:

产品编号 产品名称 包装
C0119 甲基绿-派洛宁染色液 100ml
说明书 1份

保存条件:
室温避光保存,一年有效。
注意事项:
需自备4%多聚甲醛、70%乙醇和95%乙醇。如果需要脱水、透明和封片处理,还需自备二甲苯,中性树胶或其它封片剂。如果样品是石蜡切片,需自备90%乙醇,无水乙醇以及二甲苯。
样品数量较多时,可以使用上海金畔生物科技有限公司生产的染色架和染色缸,便于操作。
第一次使用本试剂盒时建议先取1-2个样品做预实验。
      本产品仅限于专业人员的科学研究用,不得用于临床诊断或治疗,不得用于食品或药品,不得存放于普通住宅内。
为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。

使用说明

使用说明:
1. 样品处理
a) 对于石蜡切片:
二甲苯中脱蜡5-10分钟。
换用新鲜的二甲苯,再脱蜡5-10分钟。
无水乙醇5分钟。
90%乙醇2分钟。
70%乙醇2分钟。
蒸馏水2分钟。
b) 对于冰冻切片:
蒸馏水2分钟。
c) 对于培养细胞:
用4%多聚甲醛固定10分钟以上。
蒸馏水洗涤2分钟。
换用新鲜的蒸馏水,再洗涤2分钟。
2. 甲基绿-派洛宁染色
对于上述处理好的样品:
甲基绿-派洛宁染色液染色5分钟左右(可以根据染色结果和要求调整时间)。
蒸馏水洗涤2-3次(每次数秒钟)。
3. 脱水、透明、封片或进行其它染色
丙酮脱水3次,每次1-2秒(3 dips)。
换用丙酮/二甲苯(1:1)洗涤2次,每次1-2分钟。
二甲苯透明1-2分钟。
换用新鲜的二甲苯,再透明1-2分钟。
用中性树胶或其它封片剂封片。
显微镜下观察,细胞核呈绿色或蓝绿色,而细胞浆和核仁呈红色。

产品图片

甲基绿-派洛宁染色液(C0119)

BeyoClick™ EdU-594细胞增殖检测试剂盒(C0078S)

BeyoClick™ EdU-594细胞增殖检测试剂盒(C0078S)
BeyoClick™ EdU-594细胞增殖检测试剂盒
产品编号: C0078S
产品包装: 50-500次
产品价格: 618.00元
产品简介
产品编号 产品名称 产品包装 产品价格
C0078S BeyoClick™ EdU-594细胞增殖检测试剂盒 50-500次 618.00元

BeyoClick™ EdU-594细胞增殖检测试剂盒(BeyoClick™ EdU Cell Proliferation Kit with Alexa Fluor 594),是一种基于DNA合成过程中胸腺嘧啶脱氧核苷(thymidine)类似物EdU(5-ethynyl-2′ -deoxyuridine)的掺入,并通过随后的点击反应(Click reaction)使EdU被Alexa Fluor 594所标记,从而实现简单、快速、高灵敏地检测细胞增殖的试剂盒。
本试剂盒可以检测到细胞或组织样品中单个的增殖细胞,同时也可以对细胞或组织样品总体的细胞增殖情况进行定量检测。本试剂盒可以检测培养的细胞或组织样品,也可以检测组织切片。
经本试剂盒处理后,增殖的细胞在荧光显微镜下呈现非常明亮的红色荧光,可以用于荧光显微镜、激光共聚焦显微镜、流式细胞仪或荧光酶标仪检测,也可以用于高内涵筛选(High-Content Screening, HCS)。流式细胞仪或荧光酶标仪检测仅适用于细胞样品,不适用于组织切片。
细胞增殖能力的检测是评估细胞活性、基因毒性和抗肿瘤药物效果等的基本方法。公认的最精确的检测细胞增殖的方法是直接检测细胞中DNA的合成。最初广泛使用的通过检测DNA合成来检测细胞增殖的方法是放射性标记核苷掺入法,如氚标记胸腺嘧啶脱氧核苷([3H]thymidine)掺入法。但该方法由于有放射性污染并且很难实现单细胞检测而受到很大的限制,随后逐渐被基于抗体检测的BrdU(bromo-deoxyuridine)法所替代。BrdU法步骤繁多,且需要使用BrdU抗体,影响因素较多,稳定性比较差。并且由于BrdU法需要使用抗体,有时会和其它目的蛋白基于抗体的检测相互产生干扰。EdU法基于EdU掺入和后续的点击反应,无需使用抗体、操作便捷、检测灵敏度高,是一种在BrdU法基础上升级换代的新方法,将会逐步取代BrdU法。
MTT法(C0009)、WST-1法(C0035、C0036)、CCK-8法(C0037、C0038、C0039、C0040、C0041、C0042、C0043、C0046)和CellTiter-Lumi™化学发光法(C0065、C0068)都是基于细胞活性的细胞增殖检测方法,能检测到细胞的总体增殖效果,但无法检测到单个的增殖细胞。这几种方法尽管都不是检测DNA合成的,但被广泛用于替代[3H]thymidine掺入法。CFDA SE法(C0051、C1031)基于细胞荧光示踪的原理能检测到单个的增殖细胞,但由于每增殖一次荧光减弱一半,在荧光显微镜下较难区分荧光减弱一半的细胞,检测灵敏度不是很高,通常仅适用于流式细胞仪检测。在进行科学研究时,上述这些基于细胞活性或CFDA SE的方法可以作为EdU法的补充性检测方法。
EdU(5-ethynyl-2′ -deoxyuridine),中文名为5-乙炔基-2′ -脱氧尿苷,是一种新型胸苷(胸腺嘧啶脱氧核苷,thymidine)类似物,EdU可以在DNA合成过程中替代胸苷掺入到新合成的DNA中。另一方面,EdU上的乙炔基能与荧光标记的小分子叠氮化物探针(如Azide Alexa Fluor 488、Azide Alexa Fluor 555、Azide Alexa Fluor 594、Azide Alexa Fluor 647等)通过一价铜离子的催化发生共价反应,形成稳定的三唑环,该反应非常迅速,被称作点击反应(Click reaction),其反应原理参见图1。通过点击反应,新合成的DNA会被相应的荧光探针所标记,从而可以使用适当的荧光检测设备检测到增殖的细胞。

BeyoClick™ EdU-594细胞增殖检测试剂盒(C0078S)

图1. BeyoClick™ EdU检测法中的点击反应(Click reaction)原理图。荧光探针等标记的叠氮化物(Labeled Azide)与掺入到细胞DNA中的EdU,在铜离子的催化发生共价反应,形成稳定的三唑环,最终使细胞DNA标记上荧光探针或其它探针。

本试剂盒反应简单、检测灵敏度高。本试剂盒基于简单高效的点击反应,无需DNA变性,只需少量的小分子叠氮化物探针即可非常有效地标记出掺入的EdU,并且可以检测到单个细胞的增殖情况。
本试剂盒使用便捷、兼容性好。本试剂盒只需常用的多聚甲醛固定和Triton X-100穿透,就可以使叠氮化物探针有效进入细胞并发生点击反应,不会影响细胞形态,不会影响基于抗体的免疫荧光和免疫组化检测,也不会影响DNA的荧光染色(如PI染色检测细胞周期、DAPI或Hoechst染料检测细胞核)。而BrdU法为了使大分子的BrdU抗体进入细胞并与DNA上的BrdU结合,需要对双链DNA进行变性处理(如酸变性、热变性或者DNase消化等),这种变性可能会影响细胞形态,影响后续的免疫荧光和免疫组化检测、DNA的荧光染色等。BrdU法和BeyoClick™ EdU法检测原理的比较参见图2。

BeyoClick™ EdU-594细胞增殖检测试剂盒(C0078S)

图2. BrdU法和BeyoClick™ EdU法检测原理的比较。A. BrdU法需使用大分子的BrdU抗体,由于空间位阻,双链DNA须变性后才能使BrdU抗体与BrdU结合。B. EdU法使用小分子标记的叠氮化物(Azide),无需DNA变性,操作更便捷,兼容性好,检测结果更加稳定可靠。

本试剂盒检测快速,定性定量检测都非常便捷。相对于至少需要4小时的BrdU法,本试剂盒采用的BeyoClick™ EdU法检测新合成的DNA只需1.5-2小时,时间上大大缩短。本试剂盒同时提供了染色细胞核的Hoechst 33342,以方便染色观察所有的细胞核。可以使用荧光显微镜或流细胞仪等进行定性和定量检测。HeLa细胞用本试剂盒和荧光显微镜检测细胞增殖的效果参见图3;Jurkat细胞用本试剂盒和流式细胞仪检测细胞增殖的效果参见图4。

BeyoClick™ EdU-594细胞增殖检测试剂盒(C0078S)

图3. HeLa细胞用本试剂盒检测细胞增殖的效果图。无EdU组观察不到红色荧光(最左侧一列);EdU (10μM)孵育2小时组有明亮的红色荧光(中间一列);而用10mM的DNA合成抑制剂羟基脲(Hydroxyurea)提前预处理0.5小时后,红色荧光显著减弱,说明DNA合成抑制后,EdU的掺入被显著抑制(最右侧一列)。

BeyoClick™ EdU-594细胞增殖检测试剂盒(C0078S)

图4. Jurkat细胞用本试剂盒标记后用流式细胞仪检测细胞增殖的效果图。Jurkat细胞只用EdU标记(左图),或在标记的同时用10mM的DNA合成抑制剂羟基脲(Hydroxyurea)处理(右图),2小时后用本试剂盒进行点击反应,然后用流式细胞仪进行检测。从图中可以看出,仅EdU标记的细胞有较高比例的红色荧光(594 fluorescence)阳性细胞,呈现红色荧光阴性(弱染色)和阳性(强染色)的两个峰(左图),分别对应于未增殖细胞和增殖细胞。经过羟基脲处理的细胞,红色荧光阳性的细胞几乎完全消失(右图),仅剩下一个红色荧光阴性的峰(右图)。该检测结果说明DNA合成被抑制后,EdU的掺入也被抑制。实测数据可能会因细胞类型、细胞增殖情况、检测仪器等的不同而存在差异,图中数据仅供参考。

上海金畔生物科技有限公司各种细胞增殖和细胞毒性检测试剂盒的比较和选择,请参考 http://www.beyotime.com/cell-proliferation.htm。
本试剂盒小包装C0078S如果用于培养的细胞(6孔板)的检测,可以检测50个样品,每个样品的反应体系为500μl的Click反应液;如果用于96孔板检测,可以检测500个样品,每个样品的检测体系为50μl的Click反应液;如果用于12孔、24孔、48孔或384孔板样品的检测,分别可以检测125、250、350和1250个样品,每个样品推荐的Click反应液用量为200μl、100μl、70μl和20μl。小包装如果用于流式细胞仪检测,可以检测50个样品,每个细胞样品的细胞数量宜为10-100万,每个样品的反应体系为500μl的Click反应液。小包装如果用于冰冻或石蜡切片的检测,可以检测125-250个样品, 每个样品的反应体系为100-200μl的Click反应液。大包装C0078L可检测样品的数量为小包装C0078S的4倍。
包装清单:

产品编号 产品名称 包装
C0078S-1 EdU (10mM) 200μl
C0078S-2 Azide 594 55μl
C0078S-3 Click Reaction Buffer 30ml
C0078S-4 CuSO4 1.1ml
C0078S-5 Click Additive 2管
C0078S-6 Hoechst 33342 (1000X) 50μl
说明书 1份

保存条件:
-20℃保存,一年有效。Azide 594和Hoechst 33342须避光保存。
注意事项:
Click Additive配制成溶液后请注意适当分装。如果溶解后有白色物质析出,请上下颠倒多次,待全部溶解后使用。如果该溶液颜色变成棕色,说明该组分的有效成分已失效,请弃用。
如果需要使用羟基脲(Hydroxyurea)作为对照,可以从上海金畔生物科技有限公司订购(S1961 Hydroxyurea)。
如果用于动物实验需要更多EdU,也可以从上海金畔生物科技有限公司订购(ST067 EdU)。
由于本产品需要铜离子催化进行点击反应,请注意如下的兼容性问题及解决方案。本产品完全兼容有机类染料如Alexa Fluor®系列普通染料及fluorescein (FITC)、Allophycocyanin (APC)及APCE-tandems染料;对于Qdot®纳米晶体探针、Horseradish peroxidase (HRP)、R-phycoerythrin (R-PE)和R-PE-tandems染料如Alexa Fluor® 680-R-PE等,需要在点击反应完成后进行反应和检测;本产品会影响GFP、RFP、mCherry等荧光蛋白的荧光,对于荧光类蛋白如Green Fluorescent Protein (GFP)、
TC-FlAsH™和TC-ReAsH™类试剂,需要在点击反应前进行反应和检测。由于Phalloidin (鬼笔环肽)不兼容点击反应,推荐使用
Tubulin-Tracker Red (C1050)进行细胞微管的检测。
本产品仅限于专业人员的科学研究用,不得用于临床诊断或治疗,不得用于食品或药品,不得存放于普通住宅内。
为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。

使用说明

使用说明:
1. 需要用户自己准备的耗材和试剂
a. 上海金畔生物科技有限公司的PBS C0221A,或PBS (pH7.2-7.6)。
b. 固定液(上海金畔生物科技有限公司的免疫染色固定液P0098,或4%的多聚甲醛P0099)。
c. 洗涤液(免疫染色封闭液P0102,QuickBlock™免疫染色封闭液P0260,或含3% BSA的PBS)。
d. 通透液(上海金畔生物科技有限公司的免疫染色强力通透液P0097,免疫染色洗涤液P0106,或含0.3% Triton X-100的PBS)。
e. 去离子水或超纯水。
f. 根据实验要求:18×18mm盖玻片,6孔板或其它多孔板,或流式细胞分析仪用管子(如12×75mm)。
2. 检测体系的准备
a. 如下以6孔板或常规切片检测体系为例,如果使用12孔板、96孔板或384孔板等孔板,检测体系可以相应按比例缩小。
b. 如果检测的是悬浮细胞,请按常规的悬浮细胞的操作方式进行。例如和贴壁细胞相比,相关步骤需要增加离心步骤等。
3. 培养细胞的EdU标记及固定、洗涤和通透
a. 在6孔板中(如有必要可以加入盖玻片)培养适当数量的细胞。细胞培养过夜并且恢复到正常状态后,进行所需的药物处理或者其它刺激处理等。
b. 配制2X的EdU工作液:由于EdU工作液是与培养液等体积加入到孔板中,所以需要配制成2X的工作液。推荐的EdU终浓度为10μM (1X),用细胞培养液1:500稀释EdU (10mM)即可得到2X的EdU工作液(20μM)。
注意:对于A549、HeLa和NIH/3T3等贴壁细胞,推荐EdU的使用终浓度为10μM。但细胞类型、培养液种类、细胞密度、细胞增殖速度等多方面的因素会影响EdU掺入到细胞中的量,因此初次使用时建议对EdU的使用浓度进行一定的摸索。如果之前使用过BrdU进行实验,则可以参考BrdU的终浓度作为EdU的终浓度。
c. 将37℃预热的2X的EdU工作液(20μM),等体积加入6孔板中,使6孔板中的EdU终浓度变为1X。例如设计终浓度为10μM,原先6孔板中的培养基为1ml,则将1ml 2X的EdU工作液(20μM)加入到孔板中。如果培养基体积过大,可以先吸除适量的培养液,再加入等体积的2X的EdU工作液;或者可以减少工作液的体积并增加EdU的浓度,使最终培养液中的EdU浓度为10μM,例如2ml培养液中加入220微升0.1mM EdU。更换所有的培养液可能会对细胞的增殖有影响,因此不建议替换所有的培养液。
d. 继续孵育细胞2小时。该孵育时间的长短取决于细胞生长速率,通常宜继续孵育细胞周期10%左右的时间。对于常见的哺乳动物细胞如HeLa、3T3、HEK293等,细胞周期大约在18-25小时,孵育时间宜在2小时左右。人胚胎细胞的细胞周期约30分钟,推荐的孵育时间为5分钟;酵母细胞的细胞周期约3小时,推荐的孵育时间为20分钟,增殖的神经细胞其细胞周期约5天,推荐的孵育时间为1天。孵育时间小于45分钟时,建议提高EdU的浓度;孵育时间大于20小时时,建议适当降低EdU的浓度。
e. EdU标记细胞完成后,去除培养液,并加入1ml固定液(可以使用上海金畔生物科技有限公司的免疫染色固定液P0098,或4%的多聚甲醛P0099),室温固定15分钟。
f. 去除固定液,每孔用1ml洗涤液洗涤细胞3次,每次3-5分钟。
g. 去除洗涤液,每孔用1ml通透液(可以使用上海金畔生物科技有限公司的免疫染色强力通透液P0097,免疫染色洗涤液P0106,或含0.3% Triton X-100的PBS),室温孵育10-15分钟。
h. 去除通透液,每孔用1ml洗涤液洗涤细胞1-2次,每次3-5分钟。
i. 转步骤5。
4. 动物体内EdU的标记及切片样品的处理
EdU可以通过注射或进食等适当方式进行动物的体内标记。如下以小鼠为例,其它动物体内EdU的标记请参考相关文献。
a. 对于小鼠,可以按照10-200mg/kg的用量,把EdU用PBS配制成一定浓度,腹腔注射、特定组织或器官局部注射或者加入饮用水中。具体用量跟所用动物的种类、体重和使用方式有关,可以参考相关文献,因此初次使用时建议对EdU的使用浓度进行一定的摸索,或者直接使用50mg/kg的浓度进行测试。如果之前使用过BrdU进行实验,则可以参考BrdU的终浓度作为EdU的终浓度。EdU可以单独购买上海金畔生物科技有限公司的ST067。
b. 4小时后或根据特定实验确定的适当时间后,快速处死小鼠,取出所需的组织,按照常规步骤制作冰冻切片或石蜡切片。EdU标记的时间也可以参考相关文献自行调整。
c. 对于冰冻切片:
(a) 加入适量固定液(可以使用上海金畔生物科技有限公司的免疫染色固定液P0098,或4%的多聚甲醛P0099),室温固定15分钟。
(b) 去除固定液,用适量洗涤液洗涤3次,每次3-5分钟。
(c) 去除洗涤液,用适量通透液(可以使用上海金畔生物科技有限公司的免疫染色强力通透液P0097,免疫染色洗涤液P0106,或含0.3% Triton X-100的PBS),室温孵育10-15分钟。
(d) 去除通透液,用适量洗涤液洗涤1-2次,每次3-5分钟。
(e) 抗原修复(选做):如果同时需要进行目的蛋白的免疫荧光染色,并有必要进行抗原修复,可以使用适当的抗原修复液,例如P0090冰冻切片快速抗原修复液(5X),或者自行配制的适当的抗原修复液进行抗原修复处理。
(f) 转步骤5。
d. 对于石蜡切片:
(a) 脱蜡:二甲苯中脱蜡5-10分钟。换用新鲜的二甲苯,再脱蜡5-10分钟。无水乙醇5分钟,换新的无水乙醇3分钟。95%乙醇3分钟。85%乙醇3分钟。75%乙醇3分钟。50%乙醇3分钟。PBS 5分钟。
(b) 抗原修复(选做):如果同时需要进行目的蛋白的免疫组化染色,可以使用适当的抗原修复液,例如P0081柠檬酸钠抗原修复液(50X)、P0083改进型柠檬酸钠抗原修复液(50X)、P0085 EDTA抗原修复液(50X)、P0086柠檬酸钠-EDTA抗原修复液(40X)、P0088通用型强力抗原修复液(10X)、P0092漂片抗原修复液(10X),或者自行配制适当的抗原修复液进行抗原修复处理。
特别注意:如果使用蛋白酶K或胰酶进行抗原修复,必须反复洗涤干净,否则残留的酶会严重干扰后续标记反应。
(c) 转步骤5。
5. EdU检测
注意:本步骤六孔板中每孔的反应体系为500μl的反应混合物。对于12、24、48、96和384孔板,每孔的反应的体系分别为200μl、100μl、70μl、50μl和20μl的反应混合物。对于较小的孔,单位培养面积的液体用量已经适当增加,以有效避免液体蒸发可能带来的负面影响。对于切片,可以根据切片大小,每个切片使用100-200μl的反应混合物。如下以六孔板中的细胞样品为例说明具体的操作方法,对于其它孔板或切片,仅每步溶液的用量按比例调整即可,其余方法相同。
a. 配制Click Additive Solution:对于C0078S,用1.3ml去离子水溶解一管Click Additive,混匀至全部溶解,即为Click Additive Solution;对于C0078L,加入10.4ml去离子水溶解试剂盒中提供的一瓶Click Additive,混匀至全部溶解,即为Click Additive Solution。配制后可以适当分装,并-20℃保存。
b. 参考下表配制Click反应液。注意:请严格按照下表中组分顺序和体积配制Click反应液,否则点击反应可能无法有效进行;同时,Click反应液须在配制后15分钟内使用。

组分 6孔板样品数
1 2 4 5 10 25 50
Click Reaction Buffer 430μl 860μl 1.72ml 2.15ml 4.3ml 10.75ml 21.5ml
CuSO4 20μl 40μl 80μl 100μl 200μl 500μl 1ml
Azide 594 1μl 2μl 4μl 5μl 10μl 25μl 50μl
Click Additive Solution 50μl 100μl 200μl 250μl 500μl 1.25ml 2.5ml
总体积 500μl 1ml 2ml 2.5ml 5ml 12.5ml 25ml

c. 去除上一步骤中的洗涤液。
d. 每孔加入0.5ml Click反应液,轻轻摇晃培养板以确保反应混合物可以均匀覆盖样品。
e. 室温避光孵育30分钟。
f. 吸除Click反应液,用洗涤液洗涤3次,每次3-5分钟。
g. 如果需要对细胞核进行染色,可以参照步骤6进行。如无其它的特殊需要,即可在荧光显微镜下观察,或者使用流式细胞仪、多功能酶标仪进行荧光检测,或者用高内涵筛选仪器(一般高内涵筛选需要使用染料对细胞核进行染色)进行检测。Azide 594的最大激发波长是590nm,最大发射波长是615nm。
6. 细胞核染色
为了检测细胞增殖的比例,可以考虑使用Hoechst 33342进行细胞核染色。一般高内涵筛选仪器也需要对细胞核进行染色。
a. 1X Hoechst 33342溶液的配制:按1:1000比例用PBS稀释Hoechst 33342 (1000X)。
b. 接上述步骤5g.,吸除洗涤液后,每孔加1X Hoechst 33342溶液1ml,室温避光孵育10分钟。
c. 吸除1X Hoechst 33342溶液。
d. 用洗涤液洗涤3次,每次3-5分钟。
e. 随后即可进行荧光检测。Hoechst 33342为蓝色荧光,最大激发波长为346nm,最大发射波长为460nm。

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产品编号 产品名称 包装
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C0081L BeyoClick™ EdU-647细胞增殖检测试剂盒 200-2000次
C0085S BeyoClick™ EdU细胞增殖检测试剂盒(DAB法) 50-500次
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C0088L BeyoClick™ EdU细胞增殖检测试剂盒(TMB法) 2000次
S1961-10mM Hydroxyurea (DNA Synthesis抑制剂) 10mM×1ml
S1961-200mg Hydroxyurea (DNA Synthesis抑制剂) 200mg
S1961-1g Hydroxyurea (DNA Synthesis抑制剂) 1g
S1961-5g Hydroxyurea (DNA Synthesis抑制剂) 5g
ST067-50mg EdU 50mg
ST067-250mg EdU 250mg
ST067-1g EdU 1g

产品图片

BeyoClick™ EdU-594细胞增殖检测试剂盒(C0078S)

Poly-L-lysine/多聚赖氨酸(ST509)

Poly-L-lysine/多聚赖氨酸(ST509)
Poly-L-lysine/多聚赖氨酸
产品编号: ST509
产品包装: 50mg
产品价格: 427.00元
产品简介
产品编号 产品名称 产品包装 产品价格
ST509 Poly-L-lysine/多聚赖氨酸 50mg 427.00元

      Poly-L-lysine的中文名为多聚赖氨酸,简称PLL。本Poly-L-lysine为Poly-L-lysine hydrobromide,分子式为L-Lys-(L-Lys)n-L-Lys·xHBr,分子量为150,000-300,000,CAS Number 25988-63-0。
      本产品为进口分装。分子量大于70,000的多聚赖氨酸可以用于促进细胞贴壁生长,本产品可以用于促进细胞的贴壁生长。
      本产品也可以用于组织学(Histology)分析时的粘片剂。
包装清单:

产品编号 产品名称 包装
ST509 Poly-L-lysine/多聚赖氨酸 50mg
说明书 1份

保存条件:
      -20℃保存。
注意事项:
      Poly-L-lysine和Poly-D-lysine都可以用于促进细胞的贴壁生长。Poly-L-lysine可以被某些细胞所消化并吸收,摄入过多的Poly-L-lysine会产生一定的细胞毒性。如果遇到Poly-L-lysine有细胞毒性的情况,可以考虑选购Poly-D-lysine。
      本产品仅限于专业人员的科学研究用,不得用于临床诊断或治疗,不得用于食品或药品,不得存放于普通住宅内。
      为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。

使用说明

使用说明:
1. 用于促进细胞的贴壁生长时:根据实验需要把多聚赖氨酸配制成适当浓度溶液后即可使用。不同的细胞,多聚赖氨酸铺被(Coating)的时间和浓度有所不同,请自行参考相关文献进行适当的铺被。配制成溶液后可-20℃保存。多聚赖氨酸用于细胞培养时,较为常用的铺被(Coating)浓度为0.1mg/ml,铺被至少5分钟,有些实验需要铺被1-2小时,有些情况则需要铺被过夜。随后吸除多聚赖氨酸溶液,干燥培养器皿,至肉眼观察完全干燥。通风橱内吹风数分钟即可完成干燥,对于有些实验则需要干燥2小时或更长时间。干燥时间较长通常会更加有利于后续的细胞粘附。随后即可直接进行细胞培养,也可以用水、PBS或培养液等适当溶液润洗后再进行细胞培养。
2. 用作粘片剂时:通常宜把Poly-L-lysine配置成0.1-1mg/ml溶液,随后根据需要把载玻片或盖玻片在多聚赖氨酸溶液中处理1-10分钟。随后室温晾干即可使用。

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Poly-L-lysine/多聚赖氨酸(ST509)

Mineral oil (矿物油)(ST275)

Mineral oil (矿物油)(ST275)
Mineral oil (矿物油)
产品编号: ST275
产品包装: 20ml
产品价格: 36.00元
产品简介
产品编号 产品名称 产品包装 产品价格
ST275 Mineral oil (矿物油) 20ml 36.00元

      Mineral oil也称Paraffin oil,中文名为矿物油或石蜡油。密度为0.838-0.854g/ml。进口分装。 
      可用于PCR或其它酶反应等液面的封闭。
包装清单:

产品编号 产品名称 包装
ST275 Mineral oil (矿物油) 10ml×2瓶
说明书  1份

保存条件:
      室温保存。
注意事项:
      本产品仅限于专业人员的科学研究用,不得用于临床诊断或治疗,不得用于食品或药品,不得存放于普通住宅内。
      为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。 

使用说明

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Mineral oil (矿物油)(ST275)

BeyoTaq DNA Polymerase(D7218)

BeyoTaq DNA Polymerase(D7218)
BeyoTaq DNA Polymerase
产品编号: D7218
产品包装: 200U
产品价格: 37.00元
产品简介
产品编号 产品名称 产品包装 产品价格
D7218 BeyoTaq DNA Polymerase 200U 37.00元

      BeyoTaq DNA Polymerase简称BeyoTaq酶,是一种兼顾了高保真性和高扩增效率的DNA聚合酶,是上海金畔生物科技有限公司优先推荐的基因PCR克隆用酶。
      BeyoTaq酶可以催化5’至3’方向的依赖于DNA模板的脱氧核苷酸的聚合。同时BeyoTaq酶有3’至5’的外切酶活性(proofreading activity)。另外,BeyoTaq酶有5’至3’外切酶活性,但BeyoTaq酶没有反转录酶活性。
      由于BeyoTaq酶有3’至5’的外切酶活性,因此在PCR扩增过程中出错的几率大大降低,出错率为1.6×10-6 per nt per cycle,略低于Pfu酶的2.6×10-6 per nt per cycle。
      BeyoTaq酶的DNA扩增效率大大高于Pfu酶,和Taq酶的扩增效率比较接近。因此BeyoTaq酶很好地兼顾了扩增效率和扩增的准确性。
      用途:高保真PCR (high fidelity PCR)、点突变、T载体克隆等各种常规PCR反应。
      用BeyoTaq酶扩增产生的PCR产物带有3’-dA overhangs,可以用于基于T载体的PCR片段克隆。
      BeyoTaq酶可以扩增长度达5kb的DNA片,最长可以扩增长达10kb的DNA片。通常适合扩增3kb以下的DNA片
      活性定义:One unit of the enzyme catalyzes the incorporation of 10 nmol of deoxyribonucleotides into a
polynucleotide fraction (adsorbed on DE-81) in 30 min at 72℃. Enzyme activity is assayed in the following mixture: 20 mM Tris-HCl (pH 8.8 at 25℃), 2 mM MgSO4, 10 mM (NH4)2SO4, 10 mM KCl, 0.1% (v/v) Triton X-100, 0.1 mg/ml BSA, 0.75 mM activated calf thymus DNA, 0.2 mM of each dNTP, 0.4 MBq/ml [3H]-dTTP.
      纯度:不含DNA内切酶、外切酶和磷酸酯酶,不含RNA酶,满足常规PCR反应要求。
      酶储存溶液:20 mM Tris-HCl (pH 8.0), 1 mM DTT, 0.1 mM EDTA, 100 mM KCl, 0.1% (v/v) Nonidet P40, 0.1% (v/v)
Tween 20 and 50% (v/v) glycerol。
      10X BeyoTaq Buffer (with Mg2+):200 mM Tris-HCl (pH 8.8 at 25℃), 100 mM (NH4)2SO4, 100 mM KCl, 20mM
MgSO4, 1% (v/v) Triton X-100, 1 mg/ml BSA。
      失活或抑制:酚氯仿抽提可以使BeyoTaq酶失活。
包装清单:

产品编号 产品名称 包装
D7218-1 BeyoTaq DNA Polymerase (5U/μl) 200U
D7218-2 10X BeyoTaq Buffer (with Mg2+) 1ml
说明书 1份

保存条件:
      -20℃保存。
注意事项:
      由于PCR反应非常灵敏可以扩增目的基因序列超过1000万倍,在使用BeyoTaq酶时请注意避免微量待扩增DNA的污染,并尽量考虑设置不加模板的空白对照以确认是否有待扩增DNA的污染。
      BeyoTaq酶有3’至5’的外切酶活性,在没有dNTP的情况下可以降解引物。因此BeyoTaq酶一定要最后加入,并且要在冰浴上操作。
      不能使用Taq酶的PCR Buffer来替代BeyoTaq酶的PCR Buffer。
      本产品仅限于专业人员的科学研究用,不得用于临床诊断或治疗,不得用于食品或药品,不得存放于普通住宅内。
      为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。

使用说明

使用说明:

  1. PCR反应体系的设置:
    1. a.溶解并混匀PCR反应所需的各种溶液。将BeyoTaq DNA Polymerase置于冰浴上或冰盒内。
    2. b.参考下表在冰浴上设置PCR反应(如果有多个类似的PCR反应,可以先配制大体积的包含水、buffer、dNTP和BeyoTaq酶的混合物,然后分装到各PCR反应管内。根据情况,有时混合物中可以包括引物):
      试剂 最终浓度 体积
      双蒸水或Milli-Q水 (36.75-x)μl
      10X BeyoTaq Buffer (with Mg2+) 1X 5μl
      dNTP (2.5mM each) 0.2mM each 4μl
      模板DNA 10pg-1μg* xμl
      引物混合物(10μM each) 0.8μM 4μl
      BeyoTaq DNA Polymerase (5U/μl) 1.25U/50μl 0.25μl
      总体积 50μl
      • *对于不同类型的模板在50μl反应体积中推荐用量如下:哺乳动物基因组DNA:0.1-1μg;大肠杆菌基因组DNA:10-100ng;质粒DNA:0.1-10ng。过多的模板DNA容易导致非特异性的PCR产物。
    3. c.用移液器轻轻吹打混匀或轻微Vortex混匀,室温离心数秒,使液体积聚于管底。
    4. d.如果所使用的PCR仪有热盖则省略本步骤。如果PCR仪没有热盖,则在管内滴入一滴矿物油(mineral oil,ST275)。
    5. e.各设置好的PCR反应管置于PCR仪上,开始PCR反应。
  2. 2.PCR反应参数的设置可以参考如下示例:
    • STEP1(起始变性): 94℃ 3min
    • STEP2(变性): 94℃ 30sec
    • STEP3(退火): 55℃ 30sec
    • STEP4(延伸): 72℃ 2min
    • STEP5(循环): Go To STEP2 for 30 cycles
    • STEP6(最终延伸): 72℃ 10min
    • STEP7(临时保存): 4℃ forever
    1. a.PCR反应的设置需根据模板、引物、PCR产物的长度和GC含量等条件的不同设定不同的PCR反应条件包括温度、时间和循环数等。
    2. b.STEP4(延伸)的时间设置需根据PCR产物的长度进行设置,通常每kb产物的延伸时间为1.5分钟。例如PCR产物的长度为1kb,则延伸时间可以设置为1.5分钟,PCR产物的长度为2kb,则延伸时间可以设置为3分钟,以此类推。
    3. c.对于初次进行的PCR,为尽量确保可以扩增出预期的PCR产物,可以把循环数设置为35。对于需进行半定量或定量的PCR反应循环数一定要进行适当优化,使PCR反应没有达到平台期。

常见问题:

  1. 1.PCR产物非常少或没有特异性条带。
    1. a.引物设计不佳是PCR过程中最常见的问题。请选择适当的引物设计软件进行引物设计,注意引物的GC含量、二级结构、二聚体、退火温度、长度、特异性等方面的问题。在加入酶切位点等的引物中,一定要注意加入酶切位点等后整条引物的GC含量、二级结构、二聚体、退火温度、长度、特异性等方面的问题。在原有引物效果不佳的情况并且阳性对照引物可以正常工作的情况下,可以考虑更换引物。
    2. b.待扩增片段GC含量偏高。GC含量较高的情况下PCR会变得相对比较困难,此时可以使用适合扩增高GC含量DNA片的GC-rich buffer,并相应地根据GC-rich buffer的要求或说明调整PCR反应参数的设置。
    3. c.超长片扩增。尽管BeyoTaq DNA polymerase可以扩增较长的DNA片,但大多数时候比较适合扩增10kb以下的片,更长片的扩增推荐使用其它更适合长片扩增的DNA聚合酶。
    4. d.PCR反应设置时在室温进行容易导致非特异性条件。推荐在冰浴上设置PCR反应。
    5. e.由于引物存在一定的二级结构或存在一定的引物二聚体,或引物偏短,导致退火效果不佳。此时可以采用Touch down等方法进行退火,通常采用从65℃逐步缓慢降温到55℃或50℃的方法,使退火更加充分。
    6. f.退火温度不佳,需要优化。如果有温度梯度PCR仪,则可以设置退火的温度梯度,摸索退火的最佳温度。如果没有温度梯度PCR仪,则可以通过多次PCR反应摸索最佳的退火温度。
    7. g.延伸时间不足。可按照每1kb片延伸2分钟进行设置,对于较难扩增的片可以设置为每1kb片延伸3分钟。
    8. h.待扩增片段GC含量较高或长度较长,变性不够充分。可以调节起始变性条件至95℃ 1min甚至95℃ 2-4min。
    9. i.在不同PCR仪上进行PCR反应,避免有时PCR仪出现问题。
    10. j.循环数不足,适当延长PCR的循环数。通常循环数最高不必超过40,常用的循环数范围为25-35。
    11. k.模板含量太低,适当加大模板量,或采用巢式PCR(nested PCR)或二次PCR。巢式PCR即为在原先设计的PCR引物内侧再设计一对PCR引物,然后对第一次PCR产物进行稀释后再进行一次PCR扩增,这样一方面可以起到扩增作用,同时也可以从第一次PCR产物中扩增出特异性条带。二次PCR则为比较简单地用原有引物对第一次PCR产物进行稀释后再进行一次PCR扩增,可以起到扩增作用,但不能去除非特异性条带。
    12. l.模板中含有抑制PCR反应的物质,可以用适当的DNA纯化方法例如柱纯化等纯化模板DNA。
    13. m.当产生较多非特异性条带时,可以适当提高退火温度。
    14. n.注意设置适当的阳性对照和阴性对照通常会有很大帮助。

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D7251 Easy-Load™ PCR Master Mix (Blue, 2X) 400次
D7255 Easy-Load™ PCR Master Mix (Green, 2X) 400次
D7259 Easy-Load™ PCR Master Mix (Orange, 2X) 400次

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BeyoTaq DNA Polymerase(D7218)

Ac-IETD-pNA (Caspase 8显色底物)(P9723-25mg)

Ac-IETD-pNA (Caspase 8显色底物)(P9723-25mg)
Ac-IETD-pNA (Caspase 8显色底物)
产品编号: P9723-25mg
产品包装: 25mg
产品价格: 1396.00元
产品简介
产品编号 产品名称 产品包装 产品价格
P9723-25mg Ac-IETD-pNA (Caspase 8显色底物) 25mg 1396.00元
About this peptide
Product name Ac-IETD-pNA (Caspase 8显色底物)
Alternative names Caspase-8 substrate (chromogenic)
Description Ac-IETD-pNA是Caspase 8的底物,被剪切后可产生黄色的pNA (p-nitroaniline),pNA在405nm附近有强吸收,可以通过测定吸光度来检测Caspase 8的活性。如需要检测Caspase 8 活性也可直接购买上海金畔生物科技有限公司C1151/C1152 Caspase 8 活性检测试剂盒。
Purity >95%(HPLC)
CAS Number 219138-21-3
Molecular Formula C27H38N6O12
Molecular Weight 638.62
Sequence N-Acetyl-Ile-Glu-Thr-Asp-p-Nitroanilide
Source Synthetic
Formulation 5mg加入0.39ml DMSO,或每12.77mg加入1ml DMSO,配制成20mM溶液。20mM包装用DMSO配制。

包装清单:

产品编号 产品名称 包装
P9723-0.1ml Ac-IETD-pNA (Caspase 8显色底物) 20mM×0.1ml
P9723-5mg Ac-IETD-pNA (Caspase 8显色底物) 5mg
P9723-25mg Ac-IETD-pNA (Caspase 8显色底物) 25mg
说明书 1份

保存条件:
       -20℃避光保存,一年有效。
注意事项:
      如果每次使用量少或使用次数较多,请适当分装。反复冻融会影响本产品的使用效果。
      本产品仅限于专业人员的科学研究用,不得用于临床诊断或治疗,不得用于食品或药品,不得存放于普通住宅内。
      为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。

使用说明

使用说明:
1. 收到产品后请立即按照说明书推荐的条件保存。对于粉末装,使用前可以在2,000-10,000g离心数秒,以使粉末充分沉降至管底后再开盖使用。对于溶液装,其在4℃、冰浴等较低温度情况下会凝固而粘在离心管管底、管壁或管盖内,可以20-25℃水浴温育片刻至全部融解后,在离心机中约8,000-12,000g离心10-30秒,使附着在管盖或管壁上的多肽溶液聚集于管底,然后再使用。
2. 对于粉末装,请根据本产品的溶解性及实验目的用适当溶液配制成适当浓度的储备液(母液)后使用。对于20mM溶液装,为了避免最终反应体系中DMSO浓度过高,稀释时请注意使用适当的缓冲液稀释。一般建议Caspase底物在反应液中的最终浓度为0.2mM。
3. 本产品的具体使用方法请自行参考文献资料。

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P9710-0.1ml Ac-DEVD-pNA (Caspase 3显色底物) 20mM×0.1ml
P9710-5mg Ac-DEVD-pNA (Caspase 3显色底物) 5mg
P9710-25mg Ac-DEVD-pNA (Caspase 3显色底物) 25mg
P9714-0.1ml Ac-LEVD-pNA (Caspase 4显色底物) 20mM×0.1ml
P9714-5mg Ac-LEVD-pNA (Caspase 4显色底物) 5mg
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P9719-0.1ml Ac-VEID-pNA (Caspase 6显色底物) 20mM×0.1ml
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P9723-0.1ml Ac-IETD-pNA (Caspase 8显色底物) 20mM×0.1ml
P9723-5mg Ac-IETD-pNA (Caspase 8显色底物) 5mg
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P9728-0.1ml Ac-LEHD-pNA (Caspase 9显色底物) 20mM×0.1ml
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Ac-IETD-pNA (Caspase 8显色底物)(P9723-25mg)

DTT (DNase, RNase & Protease free)(ST040-1g)

DTT (DNase, RNase & Protease free)(ST040-1g)
DTT (DNase, RNase & Protease free)
产品编号: ST040-1g
产品包装: 1g
产品价格: 67.00元
产品简介
产品编号 产品名称 产品包装 产品价格
ST040-1g DTT (DNase, RNase & Protease free) 1g 67.00元

      DTT即DL-Dithiothreitol,中文名为二硫苏糖醇。分子式为C4H10O2S2,分子量为154.25,CAS号3483-12-3。
      本产品为进口分装,不含DNA酶、RNA酶和蛋白酶(DNase, RNase & Protease free),纯度>99%。 干燥失重低于0.5%,氧化DTT含量低于0.5%。
      DTT是常用还原剂,有抗氧化作用。DTT和巯基乙醇相比,作用相似,但DTT的刺激性气味要小很多,毒性也比巯基乙醇低很多。而且DTT比巯基乙醇的浓度低7倍时,两者效果相近。但DTT价格略高一些。
      本产品常用于各种常见分子生物学、生物化学等溶液的配制。
包装清单:

产品编号 产品名称 包装
ST040-1g DTT (DNase, RNase & Protease free) 1g
ST040-5g DTT (DNase, RNase & Protease free) 5g
ST040-25g DTT (DNase, RNase & Protease free) 25g
ST040-100g DTT (DNase, RNase & Protease free) 100g
说明书 1份

保存条件:
      -20℃保存。
注意事项:
      DTT对人体有害,操作时请小心,并注意有效防护以避免直接接触人体或吸入体内。
      本产品仅限于专业人员的科学研究用,不得用于临床诊断或治疗,不得用于食品或药品,不得存放于普通住宅内。
      为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。

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ST040-25g DTT (DNase, RNase & Protease free) 25g
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ST041-10ml 0.5M DTT (DNase, RNase & Protease free) 10ml
ST043-1g DTT 1g
ST043-5g DTT 5g
ST043-25g DTT 25g
ST043-100g DTT 100g

使用说明

产品图片

DTT (DNase, RNase & Protease free)(ST040-1g)

EcoRI(D6329)

EcoRI(D6329)
EcoRI
产品编号: D6329
产品包装: 2000U
产品价格: 76.00元
产品简介
产品编号 产品名称 产品包装 产品价格
D6329 EcoRI 2000U 76.00元

      EcoRI内切酶为进口分装,基本信息如下:

识别序列 缓冲液兼容性(%) 酶切温度 失活条件 甲基化干扰?
G^AATTC
CTTAA^G
1X EcoRI 1X B 1X G 1X O 1X R 1X Y 2X Y 37℃ 65℃ 
20min
有时有干扰
100 0-20 NR 100 100* NR 100

      *,Star activity,当酶量5倍或以上过量时会产生星号活性,即产生非特异性酶活性。
      NR,不推荐使用这种缓冲液,因为会产生很高的星号活性。
      根据识别序列邻近序列的不同,酶切效果受CG methylase导致的DNA甲基化的影响。
      酶储存液组成为:10mM potassium phosphate(pH7.4 at 25℃),300mM NaCl,1mM EDTA,1mM DTT,0.2mg/ml BSA,0.15% Triton X-100 and 50% glycerol。
      1X Buffer EcoRI组成为:50mM Tris-HCl(pH7.5 at 37℃),10mM MgCl2,100mM NaCl,0.02% Triton X-100,0.1mg/ml BSA。
      1X Buffer Y组成为:33mM Tris-acetate(pH7.9 at 37℃),10mM magnesium acetate,66mM potassium acetate,0.1mg/ml BSA。
      酶切和连接效率:50倍过量的本内切酶消化1小时,>95%被酶切的片段可以被连接并被重新酶切(recut)。
      活性单位定义:在37℃,50微升反应体系中反应1小时,将1微克的λDNA完全分解的酶量定义为1个活性单位,即1U。
包装清单:

产品编号 产品名称 包装
D6329-1 EcoRI(10U/μl) 2000U
D6329-2 10X Buffer EcoRI 0.3ml
D6010Y  10X Buffer Y 1ml
说明书 1份

保存条件:
      -20℃保存。
注意事项: 
      内切酶使用时宜存放在冰盒内或冰浴上,使用完毕后宜立即放置于-20℃保存。
      如果发现预期的酶切位点不能切开,请确认是否存在甲基化干扰问题。
      本产品仅限于专业人员的科学研究用,不得用于临床诊断或治疗,不得用于食品或药品,不得存放于普通住宅内。
      为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。

使用说明

使用说明:
1. 单酶切时可以参考如下反应体系进行:

待酶切DNA 不超过1μg
双蒸水或Milli-Q水 适量
10X Buffer EcoRI 2μl
EcoRI 0.5-1μl
总体积 20μl
37℃孵育1小时或更长时间

说明:请注意把Buffer和水等充分混匀后再加入内切酶,加入内切酶后可以用枪吹打或轻轻Vortex混匀。通常参考上述条件孵育1小时已经足够,但多孵育数小时甚至孵育过夜也不会产生负面影响。如果酶切较长时间甚至酶切过夜,可以使用更少量的酶。待酶切DNA量较大时,可以适当延长酶切时间或按比例放大酶切体系。
2. 双酶切或多酶切时,需选择适当的可以兼容两个或多个内切酶的缓冲液,然后参考上表设置反应体系。如果没有合适的缓冲液可以选择,可以在一种酶消化完毕后进行纯化,纯化完毕后再进行另外一种酶切反应。

产品图片

EcoRI(D6329)

Caspase 3抑制剂Ac-DEVD-CHO(C1206-5mg)

Caspase 3抑制剂Ac-DEVD-CHO(C1206-5mg)
Caspase 3抑制剂Ac-DEVD-CHO
产品编号: C1206-5mg
产品包装: 5mg
产品价格: 2586.00元
产品简介
产品编号 产品名称 产品包装 产品价格
C1206-5mg Caspase 3抑制剂Ac-DEVD-CHO 5mg 2586.00元

Caspase 3抑制剂Ac-DEVD-CHO (Caspase 3 Inhibitor Ac-DEVD-CHO)是一种非常强的Caspase 3抑制剂,可以抑制由
Caspase3激活导致的细胞凋亡。也可以抑制Caspase 7。
本Caspase 3抑制剂Ac-DEVD-CHO是一种可逆的Caspase 3抑制剂,分子式为N-Acetyl-Asp-Glu-Val-Asp-CHO,即
C20H30N4O11,分子量为502.5,纯度>95%。
Caspase 3抑制剂Ac-DEVD-CHO是最常用的细胞凋亡抑制剂之一,常用于观察特定的细胞凋亡是否通过Caspase 3激活来介导。
Caspase 3抑制剂Ac-DEVD-CHO可以用于抑制培养细胞内的Caspase 3,也可用于抑制体外纯化或粗抽提的Caspase 3。在体外对Casapse 3的IC50=200pM。
本Caspase 3抑制剂Ac-DEVD-CHO10mM包装产品配制在DMSO中,可以直接使用。5mg包装为粉末装。
包装清单:

产品编号 产品名称 包装
C1206-10mM Caspase 3抑制剂Ac-DEVD-CHO 10mM×0.1ml
C1206-5mg Caspase 3抑制剂Ac-DEVD-CHO 5mg
说明书 1份

保存条件:
-20℃保存,一年有效。
注意事项:
如果每次使用量少,使用次数较多,请适当分装。反复冻融会影响本抑制剂的使用效果。
如果希望适当稀释后再分装保存,请使用DMSO进行稀释。
本Caspase 3抑制剂Ac-DEVD-CHO在4℃、冰浴等较低温度情况下会凝固而粘在离心管管底、管壁或管盖内,可以20-25℃水浴温育片刻至全部融解后使用。
本产品仅限于专业人员的科学研究用,不得用于临床诊断或治疗,不得用于食品或药品,不得存放于普通住宅内。
为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。 

使用说明

使用说明:

1.Caspase 3抑制剂Ac-DEVD-CHO在终浓度为20-100μM时可以非常显著地抑制大多数细胞凋亡诱导剂诱导的细胞凋亡。Caspase 3抑制剂Ac-DEVD-CHO抑制细胞凋亡的最佳浓度需针对特定的细胞凋亡自行摸索。

2.Caspase 3抑制剂Ac-DEVD-CHOZ-VAD-FMK用于抑制细胞凋亡时至少需要和细胞凋亡诱导剂同时加入,或者需在细胞凋亡诱导剂加入前10-30分钟加入到细胞培养液中,或参考相关文献进行。

3.如果用于抑制纯化或粗抽提的Caspase,推荐Caspase 3抑制剂Ac-DEVD-CHO的使用浓度为100nM抑制剂Z-VAD-FMK与待测样品预孵育10-20分钟,再进行后续测定。

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Caspase 3抑制剂Ac-DEVD-CHO(C1206-5mg)

双萤光素酶报告基因检测试剂盒(RG028)

双萤光素酶报告基因检测试剂盒(RG028)
双萤光素酶报告基因检测试剂盒
产品编号: RG028
产品包装: 1000次
产品价格: 4856.00元
产品简介
产品编号 产品名称 产品包装 产品价格
RG028 双萤光素酶报告基因检测试剂盒 1000次 4856.00元

      上海金畔生物科技有限公司生产的双萤光素酶报告基因检测试剂盒(Dual Luciferase Reporter Gene Assay Kit),是先以萤光素(luciferin)为底物来检测萤火虫萤光素酶(Firefly luciferase),后以肠腔素(coelenterazine)为底物来检测海肾萤光素酶(Renilla luciferase),并且在后续加入海肾萤光素酶底物时,同时加入抑制萤火虫荧光素酶催化luciferin发光的物质,使后续检测仅仅检测到海肾萤光素酶的活性,实现双萤光素酶报告基因检测。
      萤火虫萤光素酶是一种分子量约为61kD的蛋白,在ATP、镁离子和氧气存在的条件下,可以催化luciferin氧化成oxyluciferin,在luciferin氧化的过程中,会发出生物萤光(bioluminescence)。海肾萤光素酶是一种分子量约为36kD的蛋白,在氧气存在的条件下,可以催化coelenterazine氧化成coelenteramide,在coelenterazine氧化的过程中也会发出生物萤光。生物萤光可以通过化学发光仪(luminometer)或液闪测定仪进行测定。本试剂盒的检测原理参考图1。

双萤光素酶报告基因检测试剂盒(RG028)
双萤光素酶报告基因检测试剂盒(RG028)
图1. 双萤光素酶的检测原理图。

      通过萤光素酶和其底物这一生物发光体系,可以非常灵敏、高效地检测基因的表达。通常把感兴趣基因的转录调控元件或5’启动子区克隆在luciferase的上游,或把3’-UTR区克隆在luciferase的下游等,构建成报告基因(reporter gene)质粒。然后转染细胞,用适当药物等处理细胞后裂解细胞,测定萤光素酶活性。通过萤光素酶活性的高低来判断药物处理等对目的基因的转录调控作用。Renilla luciferase相对更多地被用作转染效率的内参,以消除细胞数量和转染效率的差异。
      萤火虫萤光素酶催化luciferin发光的最强发光波长为560nm。海肾萤光素酶催化coelenterazine发光的最强发光波长为465nm。
      本试剂盒可以测定1000个样品。
包装清单:

产品编号 产品名称 包装
RG028-1 报告基因细胞裂解液 RG027-1×10
RG028-2 萤火虫萤光素酶检测试剂 RG027-2×10
RG028-3 海肾萤光素酶检测缓冲液 RG027-3×10
RG028-4 海肾萤光素酶检测底物(100X) RG027-4×10
说明书 1份

保存条件:
      报告基因细胞裂解液和海肾萤光素酶检测缓冲液在4℃保存1个月有效,-20℃保存一年有效,-80℃可以长期保存;萤光素酶检测试剂和 海肾萤光素酶检测底物(100×)在-20℃避光保存6个月有效,-80℃避光保存一年有效。
注意事项:
      加入海肾萤光素酶检测工作液后对于上一步骤中的萤火虫萤光素酶的抑制可以达到99%以上。但总会残留微量活性,因此,宜在转染时把海肾萤光素酶的表达量控制在其RLU读数高于萤火虫萤光素酶RLU读数的10%。海肾萤光素酶的读数高于萤火虫萤光素酶的读数是完全可以的,通常不会有明显的负面影响。
      为取得最佳测定效果,在用单管的化学发光仪测定时,样品和测定试剂混合后到测定前的时间应尽量控制在相同的时间内,例如30秒内;使用具有化学发光测定功能的多功能荧光酶标仪时,宜先把样品全部加好,然后统一加入萤火虫萤光素酶检测试剂。
      由于温度对酶反应有影响,所以测定时样品和试剂均需达到室温后再进行测定。
      为保证萤光素酶检测试剂的稳定性,可以采取适当分装后避光保存的方法,以避免反复冻融和长时
间暴露于室温。经测试,反复冻融三次,对测定结果无明显影响。
      样品和测定试剂混合后,必须等待1-2秒,再进行测定。测定时间通常为10秒,根据情况也可以测定更长或更短时间,但是同一批样品宜使用相同的测定时间。
      RG027-4 海肾萤光素酶检测底物(100×)配制在无水乙醇中。由于无水乙醇容易挥发,有时会在初次使用时发现体积明显小于100μl的情况,此时用无水乙醇把体积补足至100μl,并混匀后即可使用。
      海肾萤光素酶检测工作液宜配制后立即使用。如不能立即使用,-20℃可以保存一周。随着保存时间的延长检测效果会不断下降,因此不可配制成工作液后长期保存。
      本产品仅限于专业人员的科学研究用,不得用于临床诊断或治疗,不得用于食品或药品,不得存放于普通住宅内。
      为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。

使用说明

使用说明:
1. 裂解细胞:将报告基因细胞裂解液充分混匀后,按如下方式加入报告基因细胞裂解液,充分裂解细胞。
a. 对于贴壁细胞:吸尽细胞培养液后,参考下表加入适量的报告基因细胞裂解液;对于悬浮细胞:离心去上清后,参考下表加入适量报告基因细胞裂解液。

器皿类型 96孔板 48孔板 24孔板 12孔板 6孔板
报告基因细胞裂解液(微升/孔) 100 150 200 300 500

注:如果萤光素酶的表达水平比较低,可以尝试使用更少的裂解液,例如6孔板的每孔用量可以最小为100微升。
b. 充分裂解后,10,000-15,000g离心3-5分钟,取上清用于测定。
注:细胞裂解后可以立即测定萤光素酶,也可以先冻存,待以后再测定。冻存样品需融解,并达到室温后再进行测定。
2. 融解萤火虫萤光素酶检测试剂和海肾萤光素酶检测缓冲液,并达到室温。海肾萤光素酶检测底物(100×)置于冰浴或冰盒上备用。
3. 按照每个样品需100微升的量,取适量海肾萤光素酶检测缓冲液,按照1:100加入海肾萤光素酶检测底物(100×) 配制成海肾萤光素酶检测工作液。例如,1毫升海肾萤光素酶检测缓冲液中加入10微升海肾萤光素酶检测底物(100×)充分混匀后即可配制成约1毫升海肾萤光素酶检测工作液。
4. 按仪器操作说明书开启化学发光仪或具有检测化学发光功能的多功能酶标仪,将测定间隔设为2秒,测定时间设为10秒。
5. 每个样品测定时,取样品20-100微升(如果样品量足够,请加入100微升;如果样品量不足可以适当减少用量,但同批样品的使用量宜保持一致)。
6. 加入100微升萤火虫萤光素酶检测试剂,用枪打匀或用其它适当方式混匀后测定RLU(relative light unit)。以报告基因细胞裂解液为空白对照。
7. 在完成上述测定萤火虫萤光素酶步骤后,加入100微升海肾萤光素酶检测工作液,用枪打匀或用其它适当方式混匀后测定RLU(relative light unit)。本试剂盒的检测效果可以参考图2。

双萤光素酶报告基因检测试剂盒(RG028)

           图2. 本试剂盒的检测效果。实际读数会因细胞数量、转染效果、检测仪器等的不同而存在差异,图中数据仅供参考。
8. 在以海肾萤光素酶为内参的情况下,用萤火虫萤光素酶测定得到的RLU值除以海肾萤光素酶测定得到的RLU值。根据得到的比值来比较不同样品间目的报告基因的激活程度。如果以萤火虫萤光素酶为内参,也可以进行类似计算。

常见问题:
1. Luminometer和荧光分光光度计有何不同?
荧光分光光度计检测的样品本身不能发光,样品需要由特定波长的激发光激发,然后才能产生荧光并被荧光分光光度计检测。Luminometer检测的样品本身可以发光,不需要激发光进行激发。也就是说luminometer是检测化学发光(萤光)的仪器。有些型号的荧光分光光度计也具有luminometer的功能,即也可以检测化学发光。您所使用的荧光分光光度计能否用于化学发光的测定请仔细阅读该仪器的说明书。
2. 可以进行ATP化学发光检测的仪器是否就可以用于本试剂盒的检测?
是。ATP化学发光的检测原理和本试剂盒的原理相同,可以用相同的仪器测定。

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双萤光素酶报告基因检测试剂盒(RG028)