慢病毒滴度快速检测卡说明书

产品详情

 

产品描述

      本产品是采用胶体金免疫层析技术快速检测分泌到慢病毒包装上清中的游离囊蛋白P24，以此作为一个灵敏的、间接的替代指标来显示病毒产量的检测卡，通过对囊蛋白 P24 的检测，能快速确定包装液中的慢病毒滴度是否已经达到收获需要。该方法仅需要 5~10min 即可得到结果，与传统转染方法需要花费2-3天相比，具有明显优势。

产品性质

关于慢病毒滴度

一个慢病毒颗粒（Lentiviral Particle, LP）中约有 2000 个 P24 蛋白分子，用以下公式可以计算慢病毒载体的颗粒数（LP）：

一个 LP 相当于：2000×24×10^3/(6×10^23)g of P24=8×10^-5 pg of P24；或者说，1ng P24=1.25×10^7 LPs（≈1.25×10^4-5 TU**）

正常情况下，每 100-1000 LPs 中会有 1 个具有感染活性的病毒载体，即 1 TU（Transducing Unit）。

注意：上述公式计算得到的 LP 值是理论值，检测样品中含有的游离的 P24 蛋白可能会使该值偏高。

提示：通常上清中病毒含量需要超过 10^6 TU/ml，才能确保浓缩纯化后得到足够浓度的慢病毒载体（一般能浓缩 150 倍左右）。

 

本法给出的是检测线（T 线）强度与功能滴度（Infectious Unit/mL, IFU/mL 或 Transduction Unit/mL, TU/mL）而非物理滴度（Viral Particle/mL, VP/mL）的相关性。这一相关性与病毒所转染的细胞有关。例如，上图中，用 3 倍连续稀释的包装上清转染 HEK293 细胞。72 小时后，在荧光显微镜下观察表达 ZsGreen1 的细胞，并用流式细胞仪测定HEK293 细胞的转染率，得到功能滴100µL 滴度为 2 10 6 IFU/ml 的包装上清加到样品孔中，10 分钟后显深红色“T 线”。

使用方法

使用方法

1. 打开包装取出检测卡，平放在实验台上；

2. 用微量移液器吸取加 80~100µL 包装上清,滴加到加样

结果判定

1. 在可视窗口中，质控线（C）和检测线（T）均显色即为阳性；

2. 质控线（C）显色，检测线（T）不显色，检测结果为阴性；

3. 根据 P24 含量的多少，（T）线颜色有所不同，含量越高，颜色越深；含量越低，颜色越浅；

4. 质控线（C）不显色，无论检测线 （T）是否显色，检测无效；

注意事项

1. 为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

2. 本产品主要用于科研领域，不宜用于临床诊断或其他用途。

运输及保存方法

常温，有效期18个月。

注意：

1. 如果组织培养基的颜色导致高背景，可追加 如果组织培养基的颜色导致高背景，可追加 40~60μ μl PBS 以清除背景；

2. 试剂卡不建议冻存；

3. 本检测卡仅限于科研使用。