Enhanced Cell Counting Kit-8 (增强型CCK-8试剂盒)

Enhanced Cell Counting Kit-8 (增强型CCK-8试剂盒)

¥150.00

货号:BL1055A

规格:100T

品牌:Jinpan

商品详情:

产品简介:

CCK-8细胞增殖毒性检测试剂盒(增强型),是一种基于WST-8的广泛应用于细胞增殖和细胞毒性的快速高灵敏度检测试剂盒比普通的CCK-8试剂盒具有更好的检测灵敏度和更宽的线性范围。WST-8是一种类似于MTT的化合物,在电子耦合试剂1-Methoxy PMS存在的情况下,可以被还原生成橙黄色水溶性的甲臜(Formazan)。细胞增殖越多越快,则颜色越深;细胞毒性越大,则颜色越浅。对于同样的细胞,颜色的深浅和细胞数目呈线性关系。

 

使用方法:

1、96孔板中接种细胞悬液(100 ul /),通常细胞增殖实验每孔约2000个细胞,细胞毒性实验每孔约5000个细胞,具体每孔所用的细胞的数目,需根据细胞的大小,细胞增殖速度的快慢等因素决定。

2、按照实验需要,进行培养并给予0-10ul特定的药物刺激,处理一段适当的时间(例如: 6122448小时)

3、每孔加入10ul CCK-8溶液。如果起始的培养体积为200ul,则需加入20ul CCK-8溶液,以此类推。可以用加相应量细胞培养基和CCK-8但不加细胞的孔作为空白对照,若担心所使用的药物会干扰检测,需设置加相应量细胞培养液、药物和CCK-8溶液但不加细胞的孔作为空白对照。

4、在细胞培养箱内继续孵育1-4小时,具体时间可以通过预实验确定。预实验时可以在0.5124小时后分别用酶标仪检测,然后选取吸光度范围比较适宜的一个时间点用于后续实验

5、用酶标仪测定在450 nm处的吸光值,若无450nm滤光片,可以使用420-480nm的滤光片。如果样品为高浑浊度的细胞悬液,可以使用大于600nm的波长,例如650nm,作为参考波长进行双波长测定

 

实验结果分析:

细胞活力 = [OD(加药) – OD(空白)] / [OD(0加药) – OD(空白)]×100%

抑制率 = [OD(0加药) – OD(加药)] / [OD(0加药) – OD(空白)]×100%

OD(加药):具有细胞、培养基、CCK-8溶液和药物溶液的孔的吸光值

OD(空白):具有培养基、CCK-8溶液,没有细胞的孔的吸光值

OD(0加药):具有细胞、培养基、CCK-8溶液,没有药物溶液的孔的吸光值

 

注意事项:

1、使用96 孔板进行检测时,如果细胞培养时间较长,请注意蒸发问题。可将96 孔板外围一圈加培养基、水或PBS 保湿。同时,可以把96 孔板置于培养箱内靠近水盘的位置

以缓解蒸发。

2、培养时间根据细胞种类的不同和每孔内细胞数量的多少而不同。在正式实验前,建议先做预实验摸索铺板的细胞数量以及加入CCK-8 试剂后的培养时间。

3、铺板时请注意保证每个孔细胞数量均匀,建议铺板过程中注意时常混匀,防止因细胞沉淀造成不均匀。加入CCK-8 后请前后左右轻轻晃动培养板数次,使培养基和CCK-8 溶液充分混匀。

4、本试剂盒的检测依赖于脱氢酶催化的反应,如果待测物质有氧化性或还原性,可在加CCK-8 之前更换新鲜培养基,去掉药物的影响。若药物影响比较小的情况可以不更换培养基,直接扣除培养基中加入药物后的空白吸收即可。

5、加入CCK-8 时,如果细胞培养时间较长,培养基颜色或pH 值已变化,建议换用新鲜的培养基。

6、用酶标仪检测前需确保每个孔内没有气泡,否则会干扰测定。

7、本试剂盒系无菌环境生产。在使用过程中,请在生物安全柜内无菌操作,避免污染。

8、为了您的健康和安全,请穿着实验服并戴一次性手套或乳胶手套操作。

 

保存方法:

    4避光保存,有效期一年。长期保存建议-20℃保存,但不能反复冻融。

货号 BL1055A
规格 100T
品牌 Jinpan
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