Click-iT EdU-647细胞增殖检测试剂盒(适用于FACS、FM)

Click-iT EdU-647细胞增殖检测试剂盒(适用于FACS、FM)

¥680.00

货号:BL918A

规格:100T

品牌:Jinpan

Click-iT EdU-647细胞增殖检测试剂盒(适用于FACSFM)

产品编号

产品名称

规格

BL918A

Click-iT EdU-647细胞增殖检测试剂盒(适用于FACSFM)

100 T

 

产品简介:

细胞增殖能力的检测是评估细胞活性、基因毒性和抗肿瘤药物效果等的基本方法。目前检测细胞增殖的方法有很多其中,公认最精确的检测细胞增殖的方法是直接检测细胞中DNA的合成由于该方法有放射性污染且很难实现单细胞检测,随后逐渐被基于抗体检测的BrdU(bromo-deoxyuridine)法所替代。BrdU法的缺点是需要变性DNA后才能与抗体结合,导致DNA双链结构破坏,影响其他染料的结合,染色弥散,准确性降低等问题不论是最初使用的放射性标记核苷掺入法,还是后续改进的基于抗体检测的BrdU法,都有着一定的自身局限性

EdU5-Ethynyl-2′- deoxyuridine5-乙炔基-2′-脱氧尿嘧啶核苷)是一种含有一个乙炔基团的胸腺嘧啶脱氧核苷类似物,当将其注射到动物体内或者对体外培养的细胞进行孵育,这些小分子能够迅速扩散到各个器官组织,并渗入到细胞中,可以在细胞增殖时期代替胸苷(T)掺入到新合成的DNA中。EdU分子中的乙炔基团能与荧光标记的叠氮化合物探针(Alexa Fluor 488Alexa Fluor 555Alexa Fluor 594Alexa Fluor 647)在铜离子催化下发生点击反应(Click reaction)形成稳定的三唑环,因此可以使新合成的DNA被相应的荧光探针所标记。与另外两种方法相比,没有放射性污染,无需使用抗体、操作便捷、检测灵敏度高。

本试剂盒可用于检测体外培养的细胞或动物组织中细胞增殖情况。试剂盒中荧光探针为粉色(远红外)荧光,最大激发波长为656 nm,最大发射波长为670 nm,处于增殖的细胞被标记后,细胞核会显示出明亮的粉色(远红外)荧光,通过配套常规细胞核染料共同标记细胞核(本试剂盒提供 Hoechst 33342细胞核染料)可用荧光显微镜、激光共聚焦显微镜等仪器直接观察细胞增殖情况;也可以使用流式细胞仪检测体外培养细胞群荧光强度,根据荧光强度,来判断细胞周期中S期的DNA复制活性。

 

 

产品组成:

组分

名称

规格

BL918A-1

EdU储存液(10 mM

100 μL

BL918A-2

催化试剂(试剂A

120 μL

BL918A-3

荧光染料iF647(试剂B

50 μL

BL918A-4

催化添加剂(试剂C

2×100 mg

BL918A-5

反应缓冲液

20 mL

BL918A-6

Hoechst 33342 染色液

30 μL

 

使用方法:

见说明书

 

注意事项:

1、 对于常见的哺乳动物细胞如HeLa3T3HEK293等,细胞周期大约在18-25小时,孵育时间宜在2小时左右。人胚胎细胞的细胞周期约30分钟,推荐的孵育时间为5分钟;酵母细胞的细胞周期约3小时,推荐的孵育时间为20分钟,增殖的神经细胞其细胞周期约5天,推荐的孵育时间为1天。孵育时间小于45分钟时,建议提高EdU的浓度;孵育时间大于20小时时,建议适当降低EdU的浓度。

2、 对于体外培养细胞,具体EdU使用浓度、孵育时间随样品以及研究目的的不同,可进行适当调整。

3、 部分组织细胞增殖速度缓慢,为了排除造模效果不佳等因素,建议选增殖快的组织样品作为参照样本(如肠道组织)。

4、 背景颜色过深,可能是实验中洗涤不充分、组织样品固定时间过长、固定液残余导致。

5、 EdU催化添加试剂(试剂C)易氧化,尽量避免长时间暴露于空气中,配制成水溶液后,建议分装保存;经测试,如EdU催化添加试剂颜色发生轻微变化,点击反应催化体系依旧能够正常进行,如呈现棕色,表明该组分已失效,请弃用。

6、 本产品仅限于专业人员的科学研究用,不得用于临床诊断或治疗,不得用于食品或药品。

7、 为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。

 

保存条件:

4避光保存一年

货号 BL918A
规格 100T
品牌 Jinpan
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