certest冠状病毒(229E,NL63、0C43和HKU1)说明书

 

 

certest冠状病毒(229E,NL63、0C43和HKU1)说明书

Coronavirus (229E, NL63, 0C43 & HKU1)

certest冠状病毒(229E,NL63、0C43和HKU1)

内容描述

certest VIASURE 冠状病毒229E + NL63 + OC43 + HKU1实时荧光定量PCR检测试剂盒用于从呼吸道感染症状和体征患者的呼吸道样本中特异性鉴定和区分冠状病毒229E,NL63,OC43和HKU1菌株。

该测试的预期用途是促进诊断冠状病毒229E,NL63,OC43和HKU1并结合临床和流行病学危险因素。

从呼吸道样本中提取RNA,然后一步合成合成互补DNA,并通过实时PCR进行扩增。使用特定的寡核苷酸和标记有荧光分子的探针和另一种筛选器(淬灭剂)进行检测,以检测冠状病毒229E,NL63,OC43和HKU1。

技术指标

方法

实时PCR

样品类型

呼吸道样本

贮藏

(自生产以来)2年

储存温度

(也用于运输)环境温度

资讯中心

下呼吸道疾病每年导致约四百万人死亡。造成这种情况的原因很多,包括冠状病毒科的冠状病毒

这些病毒在范围内分布,其特征是被单极性RNA基因组包裹的带正性的病毒,并且与呼吸道,消化道或中枢神经系统疾病直接相关。常见的症状如下:发烧,消化问题,鼻炎,咽炎,喉炎,中耳炎,支气管炎,细支气管炎,肺炎或更严重的并发症,例如脑膜炎。

因此,由于其特异性,实时荧光定量PCR已被证明是有效的方法之一。具体而言,实时荧光定量PCR可建立菌株229E,OC43和NL63中的核蛋白基因作为靶标,而对于HKU1菌株则可建立1B复制酶基因。

VIASURE冠状病毒229E、NL63、OC43和HKU1实时PCR检测试剂盒是专为有呼吸道感染症状和体征的患者的呼吸道样本中冠状病毒229E、NL63、OC43和/或HKU1株的特异性鉴定和鉴别而设计的。本试验旨在结合临床和流行病学危险因素,辅助诊断冠状病毒229E、NL63、OC43和HKU1株。
从标本中提取RNA,用RT-PCR扩增,用冠状病毒229E、NL63、OC43和HKU1株的荧光报告染料探针检测。
2。总结与说明

冠状病毒分为三个血清型或群。一组和第二组是哺乳动物冠状病毒,而第三组是鸟类冠状病毒。常见的人类冠状病毒是HCoV-229E、HCoV-OC43、HCoV-NL63和HCoV-HKU1菌株。它们的传播途径尚不清楚,因为空气被怀疑是它们的主要传播媒介,尽管已知它们在环境中无处不在。
HCoVs很难通过常见的诊断方法进行检测,因为它们通常与其他呼吸道病毒(如HRSV或流感病毒)共保护,而且不同菌株之间的差异很小症状学。鉴于此,实时聚合酶链反应(Real-Time PCR)因其特异性而成为诊断冠状病毒的优选方法之一。更具体地说,实时PCR将229E、OC43和NL63菌株的核蛋白基因以及HKU1菌株的复制酶基因作为靶点。

 

 

 

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Antibody)

IFA Kit

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Tissue Test System IFA Kit

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intronbio犬冠状病毒诊断试剂盒

intronbio IR0441071说明书

LiliF™ Canine Coronavirus Ag rapid test kit

IR0441071 1 test X 10 / kit

intronbio犬冠状病毒诊断试剂盒产品信息

背景资料

 

犬冠状病毒是冠状病毒科的一种病毒,它在世界范围内导致狗的高度传染性肠道疾病。它于1971年在德国哨兵犬爆发期间被发现。潜伏期为一至三天。这种疾病具有高度传染性,通过感染犬的粪便传播,感染犬通常会在病毒感染后6至9天内排出病毒,但有时会感染6个月。症状包括腹泻,呕吐和厌食症。诊断是通过检测粪便中的病毒颗粒。

LiliF CCV Ag快速试剂盒是一种侧流式免疫色谱分析试剂盒,用于快速和定性检测犬体内分泌物中的犬冠状病毒抗原。

 

原理

 

 

有可能的使用

• 检测犬冠状病毒

 

解释

 

套件内容

没有 内容 10个测试/套件
1 测试设备 10个测试
2 FOB一次性瓶子包括样品稀释剂 0.5ml x 1ea
3 棉签 10EA

 

 

犬冠状病毒百科

犬冠状病毒为单胜RNA病毒,有6~7种多肽,其中4种是糖肽,不含RNA聚合酶及神经氨酸酶。犬冠状病毒(canine coronavirus,CCV)是1种严重危害养犬业、经济动物养殖业和野生动物保护的病毒性传染病病源 [1]  。可使犬发生程度不同的胃肠炎症状,特征有频繁呕吐、腹泻、沉郁、厌食等症状。本病一年四季均可发生,以冬季多发,病犬是主要的传染原,犬可通过呼吸道、消化道、粪便及污染物传染。该病一但发生,同窝犬同室犬很难控制均可造成感染。该病经常和犬细小病毒,轮状病毒及其它胃肠道疾病混合感染。幼犬死亡率较高。

中文学名

犬冠状病毒

别    称

Canine coronavirus

病毒界

网巢病毒目

冠状病毒科

冠状病毒属

犬冠状病毒

简介

 

犬 冠状 病 毒 (Caninecoronavi,l~S,CCV)属 于尼 多病 毒 目

犬冠状病毒

(Nidovirales)、冠 状 病 毒 科 (Coronaviridae)、冠状 病 毒 属 (Coronavirus)、冠 状 病 毒 I群 。CCV 由 Binn等 (1971)首先从腹泻的德国军犬中分离到的 ,病毒粒 子直 径为 60~200nm,呈球 形 ,有囊膜 。核衣壳呈细丝状 .螺旋对称 ,像其它囊膜病毒一样。CCV 对热 、脂溶剂 、非离子去污剂 、甲醛和氧化剂敏 感 ,对酸稳定 ,在-70℃或 冻干后 在 4℃下可保存数年 。CCV 可在多种犬和猫的细 胞系中增殖 ,如原代犬肾细胞 ,犬胸腺和皮肤纤维瘤细胞 (A72),猫肺细胞 (CRFK)等 。

犬冠状病毒(CCV)基因组为一28~ 32 kb大小的单股正链RNA,基因在病毒自身RNA聚合酶的存在下、以先导引物转录机制进行转录,不同的病毒基因组和亚基因组翻译产生除病毒依赖RNA的RNA聚合酶以外,还产生其它病毒的结构蛋白和非结构蛋白,其中有相对比较保守、参与病毒核衣壳形成、介导宿主细胞免疫的核衣壳蛋白(N);在病毒出芽、组装和成熟中起重要作用的膜蛋白(M);能刺激机体产生中和抗体,且易变异的纤突蛋白(S),另外S蛋白还决定着病毒血清型、感染力,同时通过识别,并与病毒宿主细胞受体相互作用决定病毒感染的宿主范围;参与病毒组装的小膜蛋白(E)和其它病毒蛋白.CCV还可识别猫氨肽酶N(fAPN)并与之相互作用。 [2] 

发病特点

 

该病多发于寒冷的冬季 ,传播迅速,数日内常成窝暴发 ;该病的发生虽无品种 、年龄、性别之分 ,但在犬群中流行时 ,通常都是幼犬先发病 ,然后波及其他年龄的犬。幼犬的发病率和致死率均高于成年犬。幼犬症状加剧,呕吐和腹泻是该病的主要症状,成年犬症状轻微 。该病的临床症状和流行病学与轮状病毒感染相似 ,而且常与轮状病毒、犬细小病毒等混合感染 ,诊断较为困难。从动物回归试验来看,病毒接种后1d就出现临床症状。所有攻毒犬扑杀后都有肠以及肠系膜淋巴结病变。但有1只犬没有可观察到的明显症状 ,原因可能是该病毒需与细菌混合感染才表现出明显的临床症状 [3]  。

犬冠状病毒病因

 

犬冠状病毒病是由犬冠状病毒引起的,犬冠状病毒可感染所有品种和各种年龄的狗(以幼犬受害严重),使狗产生轻重不一的胃肠炎症状,临床上出现频繁地呕吐、腹泻、沉郁、厌食,临床症状消失后14~21天仍可复发,是目前危害狗的一大传染病。感染途径是消化道,主要是由于接触了病狗排出的粪便及污染物所致。病毒在粪便里存活6~9天,污染物在水中可保持数天的传染性。犬冠状病毒可与猫传染性腹膜炎病毒和猪传染性胃肠炎病毒的抗血清发生反应,说明三者可能是一组病毒。该病毒对热、紫外线和一般的化学药品敏感。

症状

 

潜伏期1~8天。本病传染迅速,数日内可蔓延全群。一般先表现嗜睡、衰弱、反复呕吐,以后粪便由糊状、半糊状至水样,橙色或绿色,含黏液或血液,发烧或不发烧,白细胞减少,迅速脱水,死亡。随着日龄的增长,死亡率降低。有的病例不表现临床症状。犬冠状病毒常和细小病毒一起混合感染,构成犬腹泻大流行。

治疗

 

采用对症疗法,如止吐、止泻、补液,用抗生素防止继发感染,立即断食断水,冠状病毒是肠胃病,必须断食断水,如果肠胃里面有食物和水分,病菌就会一直有而且拉稀更频繁,之后带到“正规兽医站“输液消炎和输营养液,之后打血清,一般七天的疗程就可以恢复,冠状的治愈几率在95%左右(兽医站医生说的),疫苗对犬冠状病毒病没有预防效果。减少发病的措施,就是加强饲养管理,严格执行兽医卫生措施。

猫检测

 

介绍

猫传染性腹膜炎(FIP)是目前导致猫死亡的重要原因之一,从3个月到3龄猫以及大于10龄猫,特别是发生在那些纯种猫和其它数量及种类繁多但养在一起的家养猫。猫冠状病毒FeCV(Feline enteric Coronavirus)是高度传染性病毒而且偏好发生在数量及种类繁多而且养在一起的家养猫。FeCV给猫带来了极大的危险,FeCV阳性通常被认为是FIP的前奏。要控制猫FIP根本的方法就是要做好FeCV的预防和控制。FeCV是广泛的猫冠状病毒Feline Coronavirus (FCoV)中的一种,FeCV抗体的存在仅表示有FeCV病毒存在和/或感染了FIP的可能性。对FeCV抗体呈阳性结果也不一定表示猫得到了FeCV病毒和/或感染了FIP,应该要和其它临床症状结合起来一齐判断。但阴性结果可说明没有FeCV病毒和/或感染了FIP。

检测原理

酶标板的孔中包被有纯化的冠状病毒抗原。从金黄色葡萄球菌Staphylococcus aureus提取的蛋白A与HRP结合成复合物。血清或血浆样品和蛋白A酶标记物一起在酶标板的孔中孵育。如果猫样品里存在FCoV抗体,抗体将与孔中的抗原结合,再与蛋白A酶标记物结合。多余的酶标记蛋白A被洗掉,加入发色底物。清晰的蓝色表示FCoV抗体存在,没有颜色变化表明没有FCoV抗体。

该试剂盒具有高特异性和灵敏度,操作简单,30分钟内可以知道结果。试剂盒里包括阳性质控和阴性质控,仅需肉眼通过与阴性质控颜色进行比较,就可以准确地判断样品里FCoV抗体的存在。

样品

需1ul血清或血浆,只能检测猫的样品。样品可在2-8C保存7天,如果需要更长的保存,样品可保存在-20C。严重红细胞溶解或脂溶血会产生干扰的颜色,所以尽可能去得到更好质量的样品。

准备洗涤液

让洗涤浓缩液达到室温,轻轻地倒置混匀。用蒸馏水或去离子水稀释洗涤浓缩液(1份洗涤浓缩液加至9份水中),稀释后的洗涤液可保存于2-7上升℃。

结果

a. 检测的有效性必须是:阳性质控孔里的液体呈清晰的蓝色,而阴性质控孔里的液体保持清澈。

b. 假若样品孔的颜色变化比阴性质控孔深很多则表明,该动物以前或目前正受到FCoV感染,并且有可能通过排泄物传播病毒。此时便需要与其它的临床数据结合起来以确诊FIP。

c. 如果样品孔里无颜色变化表明没有感染FIP疾病。

试剂盒组份

以下内容物包含在试剂盒里:

包被好的酶标板 8×12孔

阳性质控血清 1.5ml

阴性质控血清 7.0ml

蛋白A HRP标记物 5.0ml

TMB 7.0ml

底物缓冲液 7.0ml

浓缩洗涤液 100.0ml

注意事项

* 试剂盒使用前恢复至室温(21-25C)

* 不同样品使用不同的加样器头

* 不要把试剂盒直接暴露在阳光下

* 不要使用过期的试剂或不同试剂盒里试剂一齐混杂使用

* 严格按照步骤操作,不适当的洗涤或试剂污染将产生非专一性的颜色

* 兽医使用

保存和稳定性

将试剂盒和稀释的洗涤液保存于2-7℃,不要冷冻。只要在适当保存条件下,试剂在有效期内是稳定的。

参考资料

  • 1.  犬瘟热一犬冠状病毒双重PCR诊断方法的建立及初步应用  .万方数据库[引用日期2019-03-12]
  • 2.  犬冠状病毒分子生物学研究进展  .万方数据库[引用日期2019-03-12]
  • 3.  犬冠状病毒的分离及鉴定  .维普[引用日期2019-03-12]

学术论文

内容来自 

  •  胡桂学,高凤山,夏咸柱等.    大熊猫犬冠状病毒的分离与鉴定. 《 畜牧兽医学报 》 , 2004
  •  
  •  乔军,孟庆龄,夏咸柱等.    犬瘟热、犬冠状病毒联合RT—PCR检测方法的建立及应用. 《 西南农业学报 》 , 2002
  •  
  •  高凤山,胡桂学,夏咸柱等.    联合PCR诊断大熊猫犬瘟热和犬冠状病毒的混合感染. 《 吉林农业大学学报 》 , 2003
  •  
  •  胡桂学,高凤山,夏咸柱等.    大熊猫犬冠状病毒的分离与鉴定. 《 吉林省畜牧兽医学会学术年会 》 , 2003
  •  
  •  范志强,夏咸柱,武银莲等.    检测犬冠状病毒中和抗体的方法与应用. 《 中国预防兽医学报 》 , 1998

新型冠状病毒(2019-nCoV)S糖蛋白(S1)

Native Antigen Company专业从事天然和重组病毒和细菌抗原,抗体和免疫测定的开发和生产,以及定制产品的开发和定制生产。该公司通过其专有的哺乳动物细胞表达系统在生产高质量蛋白质方面拥有数十年的经验,可确保正确的糖基化和正确的折叠。Native Antigen Company的高质量试剂已被*的制药,体外诊断测定制造商和前沿疫苗研究和血清学领域的学术团体广泛采用,在这些领域中正确的折叠和糖基化至关重要。

thenativeantigencompany目前为新的冠状病毒(2019 NCOV,Covid-19)提供S1和S2刺蛋白.

Novel Coronavirus Antigens
本机抗原公司目前提供了Spike 1和2蛋白质的2019新型冠状病毒。这些蛋白质在哺乳动物HEK293细胞确保proper folding满满的糖基化它们适用于基础研究、诊断和疫苗的开发。

我们的S1抗原包括2019 NCOV尖峰蛋白(残基1-674)的C-末端这个抗原包含一个单体羊FC标签为了方便表达和净化。

Novel Coronavirus (2019-nCoV) Spike Glycoprotein (S1), Sheep Fc-Tag (HEK293)

新型冠状病毒(2019-nCoV)S糖蛋白(S1),绵羊Fc-标签(HEK293)

 

新型冠状病毒2019-nCoV(SARS-CoV-2)S糖蛋白(S1)是一种重组抗原,其中包含S蛋白氨基酸1-674。Spike S1蛋白在HEK293哺乳动物细胞中生产,可确保可靠的翻译后修饰。

SKU:REC31806 分类:抗原和抗体,人类冠状病毒抗原 标签:新型冠状病毒2019-nCoV

 

SDS-PAGE:考马斯染色的SDS-PAGE显示纯化的2019-nCoV Spike S1蛋白。

新型冠状病毒(2019-NCOV)S糖蛋白(S1)

新型冠状病毒2019-nCoV S糖蛋白(S1)是一种重组抗原,其中包含S蛋白氨基酸1-674。Spike S1蛋白在HEK293哺乳动物细胞中生产,可确保可靠的翻译后修饰。

 

产品详细信息–新冠状病毒(2019-NCOV)S糖蛋白(S1)

  • 新型冠状病毒2019-nCoV  S糖蛋白(S1),武汉-Hu-1株。
  • 重组蛋白在HEK293细胞中生产,并通过蛋白G色谱法从培养上清液中纯化。
  • 包含S蛋白11-674,C端标有绵羊Fc。
  • 在Dulbecco的磷酸盐缓冲液(DPBS)pH 7.4中提供。

 

背景

在2019年12月下旬,发现许多病毒性肺炎(现称为2019-nCoV急性呼吸系统疾病)患者在流行病学上与中国湖北省武汉市的华南海鲜市场有关。通过基因组测序鉴定了一种新型的感染人的冠状病毒,临时命名为2019年的新型冠状病毒(2019-nCoV),并自此命名为SARS-CoV-2(Lu等,2020)。2019-nCoV与2018年在中国东部舟山采集的两种蝙蝠衍生的严重急性呼吸综合征(SARS)样冠状病毒密切相关(同一性为88%),但与SARS-CoV距离较远(同一性为79%)和MERS-CoV(约50%身份)。但是,尽管蝙蝠可能是这种病毒的原始宿主,但武汉海鲜市场上出售的一种动物可能充当了中间宿主(Lu等人,2020)。相对同义密码子使用(RSCU)分析表明,2019-nCoV是蝙蝠冠状病毒与未知来源的冠状病毒之间的重组体,有人提出蛇可能充当了宿主。重组事件发生在病毒刺突糖蛋白内(Ji等,2020)。同源性建模显示,2019-nCoV具有与SARS-CoV相似的受体结合结构域结构,尽管某些关键残基处存在氨基酸差异。因此,2019-nCoV可能能够与人类血管紧张素转化酶2(ACE2)受体结合(Lu等人,2020)。

2019-nCoV是一种呼吸道病毒,主要通过与被感染者的接触,通过人咳嗽或打喷嚏时产生的呼吸道飞沫,唾液飞沫或从鼻子排出而传播。潜伏期被认为是2-11天。感染2019-nCoV可引起轻度症状,包括流鼻涕,喉咙痛,咳嗽和发烧。但是,对于某些人来说,可能情况更严重,并可能导致肺炎或呼吸困难。老年人和患有先前疾病(例如糖尿病和心脏病)的人似乎更容易感染该病毒。目前有来自24个国家的40,000例确诊病例,尽管绝大多数仍在中国境内,迄今为止已有900多例死亡(世卫组织,2020年)。

冠状病毒刺突(S)糖蛋白是病毒体外壳上的I类病毒融合蛋白,通过识别宿主细胞受体并介导病毒和细胞膜融合来在病毒感染中发挥关键作用(Li,2016)。S糖蛋白被合成为前体蛋白,由约1,300个氨基酸组成,然后被切割成一个氨基(N)端S1亚基(〜700个氨基酸)和一个羧基(C)端S2亚基(〜600个氨基酸) )。三个S1 / S2异二聚体组装形成一个三聚体尖峰,从病毒包膜突出。S1亚基包含受体结合结构域(RBD),而S2亚基包含疏水融合肽和两个七肽重复区。由受体结合​​,蛋白水解过程和/或细胞室中的酸性pH触发,I类病毒融合蛋白在感染过程中经历了从亚稳态的预融合状态到稳定的融合后状态的转变,其中受体结合亚基被裂解,Belouzard等人,2012年)。由三个S1-S2异二聚体组成的三聚体SARS冠状病毒(SARS-CoV)S糖蛋白与细胞受体血管紧张素转化酶2(ACE2)结合,并通过融合前到融合后的构象转换介导病毒膜和细胞膜的融合(Song等等,2018)。

 

参考资料

  • Gallagher和Buchmeier(2001)。冠状病毒会在病毒进入和发病机理中刺入蛋白质。病毒学。279(2):371-4。
  • Ji等。(2020)。新发现的冠状病毒的突触糖蛋白内的同源重组可能会促进跨物种从蛇到人的传播。J Med Virol。2020; 10.1002 / jmv.25682。doi:10.1002 / jmv.25682.Li F.(2016)。冠状病毒刺突蛋白的结构,功能和进化。Annu Rev Virol。3(1):237-261。
  • Lu等。(2015)。蝙蝠对人:尖峰特征决定了冠状病毒SARS-CoV,MERS-CoV等的“宿主跳跃”。趋势微生物。23(8):468–78。
  • 陆荣,赵鑫,李健,等。(2020)。2019年新型冠状病毒的基因组表征和流行病学:对病毒起源和受体结合的影响。柳叶刀。S0140-6736(20)30251-8。doi:10.1016 / S0140-6736(20)30251-8。
  • 宋等。(2018)。SARS冠状病毒的冷冻EM结构将糖蛋白与其宿主细胞受体ACE2结合在一起。PLoS Pathog。2018年8月; 14(8)。
  • Su等。(2016)。冠状病毒的流行病学,遗传重组和发病机理。趋势微生物。2016年6月; 24(6):490-502。
  • 新型冠状病毒(2019-nCoV),世界卫生组织(WHO),2020。