类风湿性关节炎动物模型CIA建立

(一)佐剂性关节炎(AA)的动物模型

1.模型概述: 此模型是细菌学家Freund于50年代创立,又称福氏佐剂关节炎,福氏佐剂分为*佐剂(CFA)和不*佐剂(IFA)。福氏佐剂是将液体石蜡与无水羊毛脂按2:1或6:4比例混合的混合液1ml,高压灭菌,加入8O℃ 灭活1h的减毒卡介苗或干燥结核菌10 mg制成。不加卡介苗的为不*佐剂。

2.模型制备:造模多采用大鼠,足跖部皮下注射法:将液体石蜡高压灭菌,BCG 80℃ 灭活1h,把BCG加入液体石蜡配成10 g•L-1的乳剂,充分碾磨、混匀,即得CFA,于大鼠左后足跖皮内注射CFA 01ml致炎[1515]。原发病变主要表现为致炎局部的炎症反应,续发病变一般于致炎后10~20天左右出现,20天左右达到高峰,病理改变为滑膜下组织炎症,滑膜增生,血管翳形成。软骨破坏。4周后,关节红肿减退,骨质减少,新骨形成,关节间隙变窄。形成不可逆的关节改变。

(二) Ⅱ 型胶原诱导的关节炎(CIA)模型

1.模型概述:CIA模型是Trentham等1977建立的实验性关节炎动物模型,20世纪80年代至90年代初期,国外大量重复实验并在临床表现、病理组织学和免疫学等方面进行了广泛深入的研究。鸡、小牛、大鼠的Ⅱ型胶原(CⅡ)均能引起关节炎。选择的动物一般为啮齿类和灵长类。CⅡ大量存在于关节软骨中,同时也存在于视网膜和玻璃体中,CⅡ是一种与免疫系统隔绝的蛋白质,但在某些病理条件下可作为一种自身抗原呈现出来。Trenthem发现50%的RA患者血清中存在有抗CⅡ的自身抗体,这表明CⅡ可诱导体内产生关节炎性质的自身免疫反应。根据这些理论人们用CⅡ免疫大鼠或小鼠,从而成功地建立了ClA模型。

      以Ⅱ型胶原免疫所致动物有两个要素,一是保持Ⅱ型胶原的自然状态,即完整的三股螺旋,另外就是有佐剂的参与。Ⅱ型胶原可以是同种的,也可以是异种的。Ⅱ型胶原免疫诱发关节炎的产生和发展都依赖于自身T 细胞和B细胞的激活。去除T 细胞或去除B细胞,动物都不能用Ⅱ型胶原免疫诱发关节炎病变。

2.模型制备:Ⅱ型胶原诱导的关节炎模型是DE Trentham 等于1977年创立的,将纯化的天然胶原溶于0.1M 的醋酸制成浓度1mg/ml的溶液,与等量的福氏佐剂或不*佐剂混合成稳定的乳剂。用1ml乳剂分4~6个部位注射大鼠背部皮内,注射部位会出现小溃疡(在7~1O天后自愈),21天后,可将0.5mg胶原溶于0.5ml 1M 的醋酸中注入大鼠腹腔再次免疫。初次注射后14~60天后,出现关节红肿,通常发生于关节远端,后足踝关节是zui常累的部位。CIA 急性期病理改变可分为两期,免疫1O天后,关节内只有一些纤维沉积物而滑膜细胞无改变,12天后,肉眼可见踝关节红肿,2O% 的膝关节出现红肿.光镜下滑膜细胞增多.层数增至3~7层,并向软骨骨面爬行,滑膜及滑膜下组织有纤维沉积。电镜下则见滑膜细胞变圆。细胞间接触减少,丝状伪足增多.细胞内溶酶体和内质网增大、增多。19天后进入第二期。增生滑膜由6~10μm 增厚至200~250μm,形成血管翳,其中有大量单核细胞、多形核巨细胞、巨噬细胞,在微血管周围形成微脓肿,可见到单核细胞侵入软骨连接处的软组织。6~7周后,炎症进入慢性期,水肿仍存在,浸润的细胞以CD 的T 细胞为主,关节内出现瘢痕,颗粒状增生组织,软骨及软骨下骨被破坏,zui后(6个月),导致关节强直。

(三)卵蛋白诱导性动物模型

 

模型制备:鸡卵蛋白溶液(20mg/ml)、卡介苗和福氏不*佐剂(三者比例lml:2ml:lm1)混合在1500r/min匀浆器下制成混合乳剂。将混合乳剂1ml在兔肩胛间区分5个部位皮下注射,2周及4周分别加强免疫1次,然后双膝关节腔内各注射5mg卵蛋白。病理学观察发现,在双膝注射卵蛋白后第1天关节直径和表面温度大幅度上升.以后缓慢下降,至14~21天后达到平台期。镜下可观察到滑膜细胞明显增生,排列紊乱并有WBC 浸润,淋巴细胞大量增生,纤维组织亦增生,部分软骨缺损。其免疫过程大致为,在致敏兔关节腔内注射一定量抗原后,产生的免疫复合物沉积在关节滑膜上,注射后数小时,滑膜上大量多核细胞浸润。然后诱导细胞介导的免疫反应,引起大量单核细胞浸润,从而形成慢性滑膜炎、滑膜增生,淋巴细胞生发中心形成针对免疫抗原的*性抗体。随后,关节软骨上生成血管翳,侵蚀骨和软骨,其病理过程类似RA。

(四)PIA

      PIA是以体液免疫和细胞免疫异常为特征的血清阳性的实验性关节炎,是由CD4 T细胞介导,Pristante使多克隆T细胞扩增,进一步引起淋巴结变,浸润滑膜。因此选择性T细胞浸润炎症性关节是PIA易感性的重要因素。

(五)DIA

     由DDA诱导的关节炎大鼠也是研究关节炎的动物模型。当皮下注射2 mg溶于PBS的DDA时,可以在Lewis和DA大鼠中诱导多关节炎,但发病率低,病情严重程度较轻;而注射2 mg混合非*弗氏佐剂的DDA,能诱导严重多关节炎,Lewis大鼠发病率为100%。DIA组织学表现为关节部位细胞浸润,滑膜充血,肉芽组织增生,软骨破坏和骨质变形。用DIA大鼠淋巴细胞能成功转移同系鼠发生多关节炎。

(六)ACII

     为佐剂角又菜胶诱导的关节炎动物模型,其诱导的方法是:以小鼠为例,在实验条件下。选择有效、敏感小鼠,先在皮下注射CFA,随后在不同时间,于足跖皮下注射角叉菜胶。实验表明,大鼠与小鼠之间对免疫诱导的应答不同,在DAB/1小鼠表现为足爪及踝关节的肿胀,于注射角叉菜21d后更明显,不依赖于应用炎性剂的特点,其组织病理变化与大鼠相似,都有皮下充血、淋巴细胞浸润及肉芽肿的形成。ACⅡ模型主要用于炎**物的筛选等。

虎 克自身免疫性疾病实验动物模型

    Hookelabs是的自身免疫性疾病实验动物模型及其相关产品研发和生产企业,其创始人Suzana Marusic博士曾在惠氏制药长期担任炎性靶点验证实验室的主管,负责哮喘和自身免疫性疾病的研究,研发制备出高度相似性的哮喘和实验性自身免疫性脑脊髓炎小鼠模型,并以此验证了多个药物靶点。Suzana Marusic凭借其多年来在T细胞分离培养、细胞免疫、外周耐受机制及免疫相关疾病和肿瘤研究的丰富经验,创立了虎克实验动物模型公司,致力于为科研和药物研发提供的自身免疫性实验动物模型建立试剂盒,以及相关的实验动物组织和血清。公司目前的实验动物模型主要包括胶原诱导的关节炎模型、实验性自身免疫性脑脊髓炎模型、系统红斑狼疮、炎性肠病等模型的制备试剂盒,以及多种免疫状态下动物组织和血清样本。虎克实验动物模型提供的模型制备试剂盒以预充免疫原的注射器为主,操作简单,结果可靠,可重复性高

上海金畔生物科技有限公司专业从事生命科学研究领域产品代理及部分生物产品自主研发,以为科研人员提供高品质科研产品为己任,是您值得信赖的科研伙伴!
     

一、胶原诱导的类风湿关节炎模型CIA

类风湿关节炎Rheumatoid arthritis (RA)是一种常见的自体免疫性疾病,多见于关节部位,但在心脏结缔组织、血管、肺、眼皮肤及肾脏均有发现。RA发病中女性多余男性(约21),其症状包括疼痛、肿胀感和僵硬、粘连、关节面糜烂、骨吸收关节变形甚至失去功能。

虎克实验室在RA实验动物模型的建立上有着丰富的经验,其核心动物模型胶原蛋白诱导的类风湿关节炎模型(CIA)即是常用的类风湿关节炎模型,该模型常用DBA/1小鼠建立,但是也可用B10.R111 小鼠, B10.Q 小鼠及Lewis 大鼠建立。

1、虎克公司提供的CIA模型诱导试剂盒

四种试剂盒区别在使用不同来源的胶原蛋白诱导,斜线后为相应的免疫佐剂。

2、CIA免疫流程

3、CIA模型评价指标

虎克公司其他产品LIST

货号 品名 价格 品牌
EK-2110 MOG35-55/CFA Emulsion PTX 5746.00  Hooke Laboratories
EK-2160 MOG1-125/CFA Emulsion PTX  30090.00  Hooke Laboratories
       
EK-0120 PLP139-151/CFA Emulsion 5882.00  Hooke Laboratories
EK-2120 PLP139-151/CFA Emulsion PTX 7072.00  Hooke Laboratories
       
EK-3110 gpMBP69-88/CFA Emulsion 5151.00  Hooke Laboratories
EK-3111 gpMBP69-88/CFA Emulsion PTX 6341.00  Hooke Laboratories
       
LT-0105 PTX vial, lyophilized, 5 ug 1190.00  Hooke Laboratories
       
EK-0113 MOG35-55/CFA Emulsion PTX 1X 6409.00  Hooke Laboratories
EK-0110 MOG35-55/CFA Emulsion PTX 1.5X 6409.00  Hooke Laboratories
EK-0112 MOG35-55/CFA Emulsion PTX 2.5X 6783.00  Hooke Laboratories
EK-0114 MOG35-55/CFA Emulsion PTX 3.75X 7327.00  Hooke Laboratories
EK-0115 MOG35-55/CFA Emulsion PTX 5X 8058.00  Hooke Laboratories
EK-0116 MOG35-55/CFA Emulsion PTX 7X 8976.00  Hooke Laboratories
       
EK-0162 MOG1-125/CFA Emulstion PTX 2.5X 33269.00  Hooke Laboratories
EK-0164 MOG1-125/CFA Emulstion PTX 3.75X 33711.00  Hooke Laboratories
       
EK-0121 PLP139-151/CFA Emulsion PTX 7752.00  Hooke Laboratories
EK-0123 PLP139-151/CFA Emulsion PTXx2 8160.00  Hooke Laboratories
       
INDUCTION OF CIA      
       
EK-0210 Chicken Collagen/CFA Emulsion 6154.00  Hooke Laboratories
EK-0211 Chicken Collagen/IFA Emulsion 5763.00  Hooke Laboratories
EK-0220 Bovine Collagen/CFA Emulsion 6154.00  Hooke Laboratories
EK-0221 Bovine Collagen/IFA Emulsion 5763.00  Hooke Laboratories
       
IMMUNIZATION      
       
EK-0111 MOG35-55/CFA Emulsion 4539.00  Hooke Laboratories
EK-0122 PLP139-151/CFA Emulsion 5882.00  Hooke Laboratories
EK-0130 MBP1-17/CFA Emulsion 3876.00  Hooke Laboratories
EK-0132 OVA323-339 Emulsion 6341.00  Hooke Laboratories
EK-0133 mBSA/CFA Emulsion 3876.00  Hooke Laboratories
EK-0301 Ovalbumin/CFA Emulsion 3876.00  Hooke Laboratories
EK-0311 Ovalbumin/IFA Emulsion 3672.00  Hooke Laboratories
EK-0302 Pigeon cytochrome c/CFA Emulsion 3876.00  Hooke Laboratories
EK-0312 Pigeon Cytochrome c/IFA Emulsion 3672.00  Hooke Laboratories
EK-0303 Hen Egg Lysozyme/CFA Emulsion 3876.00  Hooke Laboratories
EK-0313 Hen Egg Lysozyme/IFA Emulsion 3672.00  Hooke Laboratories
       
CONTROL KITS      
       
CK-0111 Hooke Control Kit™  2788.00  Hooke Laboratories
CK-0120 Hooke Control Kit™  4743.00  Hooke Laboratories
CK-0122 Hooke Control Kit™  2788.00  Hooke Laboratories
CK-0130 Hooke Control Kit™  2788.00  Hooke Laboratories
CK-0132 Hooke Control Kit™  2788.00  Hooke Laboratories
CK-0133 Hooke Control Kit™  2788.00  Hooke Laboratories
CK-0210 Hooke Control Kit™  4981.00  Hooke Laboratories
CK-0211 Hooke Control Kit™  4556.00  Hooke Laboratories
CK-0220 Hooke Control Kit™  4981.00  Hooke Laboratories
CK-0221 Hooke Control Kit™  4556.00  Hooke Laboratories
CK-0301 Hooke Control Kit™  2788.00  Hooke Laboratories
CK-0302 Hooke Control Kit™  2788.00  Hooke Laboratories
CK-0303 Hooke Control Kit™  2703.00  Hooke Laboratories
CK-0311 Hooke Control Kit™  2788.00  Hooke Laboratories
CK-0312 Hooke Control Kit™  2788.00  Hooke Laboratories
CK-0313 Hooke Control Kit™  2788.00  Hooke Laboratories
CK-2110 Hooke Control Kit™  4352.00  Hooke Laboratories
CK-2120 Hooke Control Kit™  4352.00  Hooke Laboratories
CK-2160 Hooke Control Kit™  4352.00  Hooke Laboratories
CK-3110 Hooke Control Kit™  3876.00  Hooke Laboratories
CK-3111 Hooke Control Kit™  4760.00  Hooke Laboratories
       
CK-5111 Hooke Control Kit™  1904.00  Hooke Laboratories
CK-5120 Hooke Control Kit™  2873.00  Hooke Laboratories
CK-5122 Hooke Control Kit™  1904.00  Hooke Laboratories
CK-5130 Hooke Control Kit™  1904.00  Hooke Laboratories
CK-5132 Hooke Control Kit™  1904.00  Hooke Laboratories
CK-5133 Hooke Control Kit™  1904.00  Hooke Laboratories
       
CK-5301 Hooke Control Kit™  1904.00  Hooke Laboratories
CK-5302 Hooke Control Kit™  1904.00  Hooke Laboratories
CK-5303 Hooke Control Kit™  1853.00  Hooke Laboratories
CK-5311 Hooke Control Kit™  1904.00  Hooke Laboratories
CK-5312 Hooke Control Kit™  1904.00  Hooke Laboratories
CK-5313 Hooke Control Kit™  1904.00  Hooke Laboratories
CK-7110 Hooke Control Kit™  3383.00  Hooke Laboratories
CK-7120 Hooke Control Kit™  3383.00  Hooke Laboratories
CK-7160 Hooke Control Kit™  3383.00  Hooke Laboratories
CK-8110 Hooke Control Kit™  2448.00  Hooke Laboratories
CK-8111 Hooke Control Kit™  3587.00  Hooke Laboratories
       
CK-0110 Hooke Control Kit™  3570.00  Hooke Laboratories
CK-0112 Hooke Control Kit™  3961.00  Hooke Laboratories
CK-0113 Hooke Control Kit™  3570.00  Hooke Laboratories
CK-0114 Hooke Control Kit™  4352.00  Hooke Laboratories
CK-0115 Hooke Control Kit™  5066.00  Hooke Laboratories
CK-0116 Hooke Control Kit™  5967.00  Hooke Laboratories
CK-0121 Hooke Control Kit™  5151.00  Hooke Laboratories
CK-0123 Hooke Control Kit™  5525.00  Hooke Laboratories
CK-0162 Hooke Control Kit™  3961.00  Hooke Laboratories
CK-0164 Hooke Control Kit™  4352.00  Hooke Laboratories
       
CK-5110 Hooke Control Kit™  2295.00  Hooke Laboratories
CK-5112 Hooke Control Kit™  2482.00  Hooke Laboratories
CK-5113 Hooke Control Kit™  2295.00  Hooke Laboratories
CK-5114 Hooke Control Kit™  2686.00  Hooke Laboratories
CK-5115 Hooke Control Kit™  3043.00  Hooke Laboratories
CK-5116 Hooke Control Kit™  3485.00  Hooke Laboratories
CK-5121 Hooke Control Kit™  3077.00  Hooke Laboratories
CK-5123 Hooke Control Kit™  3264.00  Hooke Laboratories
CK-5162 Hooke Control Kit™  2482.00  Hooke Laboratories
CK-5164 Hooke Control Kit™  2686.00  Hooke Laboratories
       
ANTIGENS IN TC MEDIA      
       
DS-0111 MOG35-55 solution, 100x, 2 mg 2363.00  Hooke Laboratories
DS-0121 PLP139-151 solution, 100x, 2 mg 2363.00  Hooke Laboratories
DS-0131 MBP1-17 solution, 100x, 2 mg 2193.00  Hooke Laboratories
DS-0141 OVA323-339 solution, 100x, 2 mg 2363.00  Hooke Laboratories
DS-0151 gpMBP69-88 in solution, 100x, 2 mg 2363.00  Hooke Laboratories
       
FROZEN SERUM      
SZ-0101 FBS for T cell culture, 100 mL 1921.00  Hooke Laboratories
SZ-0501 FBS for T cell culture, 500 mL 6613.00  Hooke Laboratories
       
FROZEN EAE TISSUE FROM MICE      
       
EZ-1110 Frozen spleen & spinal cord from B6 mice at EAE onset 4046.00  Hooke Laboratories
EZ-1120 Frozen spleen & spinal cord from B6 mice at EAE disease peak 4046.00  Hooke Laboratories
EZ-1130 Frozen spleen & spinal cord B6 from mice at EAE recovery 4046.00  Hooke Laboratories
EZ-1210 Frozen spleen & spinal cord from SJL mice at 1st wave EAE onset 4369.00  Hooke Laboratories
EZ-1220 Frozen spleen & spinal cord from SJL mice at 1st wave EAE peak 4369.00  Hooke Laboratories
EZ-1230 Frozen spleen & spinal cord from SJL mice at 1st wave EAE remission 4369.00  Hooke Laboratories
EZ-1240 Frozen spleen & spinal cord from SJL mice at EAE relapse onset 6069.00  Hooke Laboratories
EZ-1250 Frozen spleen & spinal cord from SJL mice at EAE relapse peak 6069.00  Hooke Laboratories
EZ-1260 Frozen spleen & spinal cord from SJL mice at EAE relapse recovery 4981.00  Hooke Laboratories
       
FROZEN EAE TISSUE FROM MICE (CONTROL TISSUE)      
       
EZ-1111 Frozen spleen & spinal cord from B6 mice at EAE onset 4046.00  Hooke Laboratories
EZ-1121 Frozen spleen & spinal cord from B6 mice at EAE disease peak 4046.00  Hooke Laboratories
EZ-1131 Frozen spleen & spinal cord B6 from mice at EAE recovery 4046.00  Hooke Laboratories
EZ-1211 Frozen spleen & spinal cord from SJL mice at 1st wave EAE onset 4369.00  Hooke Laboratories
EZ-1221 Frozen spleen & spinal cord from SJL mice at 1st wave EAE peak 4369.00  Hooke Laboratories
EZ-1231 Frozen spleen & spinal cord from SJL mice at 1st wave EAE remission 4369.00  Hooke Laboratories
EZ-1241 Frozen spleen & spinal cord from SJL mice at EAE relapse onset 3043.00  Hooke Laboratories
EZ-1251 Frozen spleen & spinal cord from SJL mice at EAE relapse peak 3043.00  Hooke Laboratories
EZ-1261 Frozen spleen & spinal cord from SJL mice at EAE relapse recovery 2499.00  Hooke Laboratories
       
FROZEN EAE TISSUE FROM MICE (NAIVE TISSUE)      
       
EZ-1100 Frozen spleen & spinal cord from B6 naïve mice 1564.00  Hooke Laboratories
EZ-1200 Frozen spleen & spinal cord from SJL mice – naïve 1887.00  Hooke Laboratories
       
FROZEN CIA TISSUE FROM MICE      
       
CZ-0110 DBA/1 CIA Spleen/paw/serum 1-2 days from ONSET 3026.00  Hooke Laboratories
CZ-0111 DBA/1 CIA Spleen/paw/serum 1-2 days from ONSET 2329.00  Hooke Laboratories
CZ-0120 DBA/1 CIA Spleen/paw/serum 4-5 days from ONSET 3026.00  Hooke Laboratories
CZ-0121 DBA/1 CIA Spleen/paw/serum 4-5 days from ONSET 2329.00  Hooke Laboratories
CZ-0130 DBA/1 CIA Spleen/paw/serum 14-21 days from ONSET 3026.00  Hooke Laboratories
CZ-0131 DBA/1 CIA Spleen/paw/serum 14-21 days from ONSET 2329.00  Hooke Laboratories
       
FROZEN CIA TISSUE FROM MICE (CONTROL)      
       
CZ-0010 DBA/1 CIA Spleen/paw/serum 1-2 days from ONSET 3842.00  Hooke Laboratories
CZ-0011 DBA/1 CIA Spleen/paw/serum 1-2 days from ONSET 3145.00  Hooke Laboratories
CZ-0020 DBA/1 CIA Spleen/paw/serum 4-5 days from ONSET 3842.00  Hooke Laboratories
CZ-0021 DBA/1 CIA Spleen/paw/serum 4-5 days from ONSET 3145.00  Hooke Laboratories
CZ-0030 DBA/1 CIA Spleen/paw/serum 14-21 days from ONSET 3842.00  Hooke Laboratories
CZ-0031 DBA/1 CIA Spleen/paw/serum 14-21 days from ONSET 3145.00  Hooke Laboratories
       
FROZEN CIA TISSUE FROM MICE (NAIVE)      
       
CZ-0100 DBA/1 CIA Spleen/paw/serum Naïve set 1292.00  Hooke Laboratories
CZ-0101 DBA/1 CIA Spleen/paw/serum Naïve set 1207.00  Hooke Laboratories
       
FROZEN SERUM FROM MICE WITH CIA      
       
CZ-0242 DBA/1 CIA Serum, 50-60 days from IMMUNIZATION, 1 mL 9197.00  Hooke Laboratories
CZ-5242 DBA/1 CIA Serum, 50-60 days from IMMUNIZATION, 250 uL 3672.00  Hooke Laboratories
CZ-0243 DBA/1 CIA Serum, 50-60 days from IMMUNIZATION, 1 mL 9197.00  Hooke Laboratories
CZ-5243 DBA/1 CIA Serum, 50-60 days from IMMUNIZATION, 250 uL 3672.00  Hooke Laboratories
CZ-0270 DBA/1 CIA Controls, 1000 uL 11033.00  Hooke Laboratories
CZ-5270 DBA/1 CIA Controls, 250 uL 4607.00  Hooke Laboratories
CZ-0280 DBA/1 Naïve, 1000 uL 6443.00  Hooke Laboratories
CZ-5280 DBA/1 Naïve, 250 uL 2210.00  Hooke Laboratories
       
FROZEN SLE TISSUE FROM (NZB x NZW)F1 HYBRID MICE     Hooke Laboratories
       
LZ-0100 Female (NZB x NZW)F1 mice, cyclophosphamide-treated (no or mild proteinuria) 5610.00  Hooke Laboratories
LZ-0101 Female (NZB x NZW)F1 mice, vehicle treated (severe proteinuria) 5610.00  Hooke Laboratories
LZ-0200 Female MRL/lpr mice, cyclophosphamide-treated (no or mild proteinuria) 4318.00  Hooke Laboratories
LZ-0201 Female MRL/lpr mice, vehicle treated (severe proteinuria) 4318.00  Hooke Laboratories
       
FROZEN SERUM FROM IMMUNIZED MICE – ANTIGEN IMMUNIZED      
       
CF-1001 Spleen cells 2397.00  Hooke Laboratories
CF-1002 Lymph node cells 2397.00  Hooke Laboratories
CF-1003 Spleen cells & lymph nodes cells 3128.00  Hooke Laboratories
CF-2001 Spleen cells 2720.00  Hooke Laboratories
CF-2002 Lymph node cells 2720.00  Hooke Laboratories
CF-2003 Spleen cells & lymph nodes cells 3451.00  Hooke Laboratories
       
FROZEN SERUM FROM IMMUNIZED MICE – CFA-ONLY IMMUNIZED      
       
CF-1101 Spleen cells 2397.00  Hooke Laboratories
CF-1102 Lymph node cells 2397.00  Hooke Laboratories
CF-1103 Spleen cells & lymph nodes cells 3128.00  Hooke Laboratories
CF-2101 Spleen cells 2720.00  Hooke Laboratories
CF-2102 Lymph node cells 2720.00  Hooke Laboratories
CF-2103 Spleen cells & lymph nodes cells 3451.00  Hooke Laboratories
       
FROZEN SERUM FROM IMMUNIZED MICE – (NAÏVE, NON-IMMUNIZED)      
       
CF-1201 Spleen cells 2023.00  Hooke Laboratories
CF-1202 Lymph node cells 2023.00  Hooke Laboratories
CF-1203 Spleen cells & lymph nodes cells 2754.00  Hooke Laboratories
CF-2201 Spleen cells 2346.00  Hooke Laboratories
CF-2202 Lymph node cells 2346.00  Hooke Laboratories
CF-2203 Spleen cells & lymph nodes cells 3077.00  Hooke Laboratories

EAE模型建立

EAE模型是一种以特异性致敏的CD4+T细胞介导为主的,以中枢神经系统内小血管周围出现单个核细胞浸润及髓鞘脱失为特征的自身免疫性疾病,是人类多发性硬化(MS)的理想动物模型,在临床神经免疫学的研究中具有重要意义。

实验动物的选择

国内外学者试用多种易感动物建立EAE模型,以期阐明MS及EAE的发病机制,并为其病情的监测、复发的预防、治疗方案的选择以及新疗法或新药物的筛选等提供可靠依据。本文就近年来EAE模型方面的研究综述如下。

 

EAE模型1.1 品系

鸟类哺乳类的多种动物如小鼠大鼠豚鼠家兔等均可成功诱发EAE,但不同种属或同一种属不同品系动物的敏感性有很大差异。对EAE敏感的动物有Lewis、DA大鼠,PL/J、SJL/J小鼠,Hartley、Strain13豚鼠。虽然豚鼠对诱发EAE相当敏感,但其品系复杂,有关试剂缺乏,一般不常用作实验对象。相比之下大鼠及小鼠的背景知识及相关试剂则较为全面,遗传学、免疫学等方面的研究也较深入,且其EAE在临床、病理、免疫及生化改变等方面都与人类脱髓鞘疾病较为相似,因此应用。

用大鼠制备EAE有许多优点,如品系多,选择余地大,繁殖快,同一品系中个体间差异小,实验方便。其中Lewis大鼠诱发的EAE具有稳定性好、敏感性高等特点,其病程为单相,多数可自行恢复,对再次诱发很快产生强的耐受性,多用作EAE激发和缓解机制的研究。而SJL/L及PL/J小鼠对再次诱发的敏感性没有明显降低,且几乎可见到人类MS的所有病理改变,可诱发出更接近于人类MS的缓解复发型EAE模型,但它的EAE发生率及潜伏期变化较大。人们对小鼠的遗传背景了解得比较清楚,因此小鼠更适用于有关基因、细胞间作用等领域的研究。然而不同品系小鼠对EAE的敏感性也不同,有人将其分为EAE—易感(EAE—susceptible)和EAE—抵抗(EAE?resistant)两种类型。基因型分析结果表明,单倍型为H?2s的小鼠(如SJL/J)及H?2q的小鼠(如DBA1/J)属于EAE—易感型。C57BL/10J及P/J小鼠可发生轻微的脱髓鞘病变。BABL/C和AKR/J小鼠基本不发生EAE,被认为是EAE—抵抗小鼠。

不同品种或同一品种不同品系动物对EAE的易感性主要受免疫反应基因(Ir基因)影响,Ir基因的调节作用表现为T细胞表面受体对髓鞘碱性蛋白(MBP)的特异性表达。动物的种类不同,其受体表达能力不同,对自身抗原的反应性不同,因而对EAE的易感性也不同,因此在选择动物时需要寻找EAE模型的敏感动物。

鉴于对EAE敏感的Lewis、DA大鼠,PL/J,SJL/J小鼠的价格昂贵、不宜获得且难以饲养,国内多采用价廉易得的Wistar大鼠,但其敏感性不及前者。

1998年Jon等用猴建立了EAE动物模型,与啮齿类EAE模型相比,其特征更接近人类脱髓鞘疾病MS,并能以磁共振评估白质损害和神经组织病理改变。

EAE发病有多种诱发因素,包括食物、药物及感染等。大鼠的饲养环境级别越高,清洁度越高,接触诱发因素的几率越小,在相同条件下致敏,其发病率就越低,因此选用普通动物即可。zui近有报道说明,EAE的发病还与动物的血脑屏障的形成有关。

 

EAE模型

1.2 年龄

EAE的发生发展与年龄密切相关。幼龄动物发病后症状很快达到高峰,随后又迅速恢复,和成年动物相比病程较短,其抗原注射部位及CNS内的炎性细胞浸润程度较轻,并且幼龄动物体重偏小,一般情况差,易出现麻醉意外而死亡。若动物体重(周龄)偏大,则发病延迟,且症状较重,所以选择受试动物以青年期为佳。但若作为抗原提供者,其年龄可适当放宽,一般大于4周即可。

 

EAE模型

1.3 性别

MS多为青年女性,EAE的发生发展也存在性别差异。一般来讲,雌性动物较雄性敏感,表现在雌性动物的发病率高,临床症状相对严重,如Wistar大鼠及SJL/J小鼠,但也有的动物如Lewis大鼠,雄性较雌性敏感。另外实验时间选择在夏季比冬春季节诱导动物模型的敏感性更高。敏感性高的动物,有时症状较严重且死亡率高,应引起注意。

 

EAE模型抗原的选择

常用的致敏抗原有髓鞘碱性蛋白(MBP)或其多肽片断(如MBP peptide 89—101)以及蛋白脂(PLP)等。长期以来MBP和PLP被认为是引起EAE和MS的主要抗原,MBP是髓鞘中抗原性zui强的蛋白质,占髓鞘总蛋白的40%,等电点在10以上,是强碱性蛋白质。研究表明MBP可激活体内Th+细胞,使之穿过血脑屏障,攻击自身神经髓鞘的MBP,从而导致中枢神经白质脱髓鞘,引起EAE或MS。近年来多用MBP肽代替MBP免疫动物。PLP是高度疏水的膜蛋白,对PLP不同肽决定簇发生反应的CD4+T细胞能诱导急性、慢性复发型及慢性进展型EAE。在MS患者体内也发现与PLP抗原决定簇发生反应的T细胞

zui近研究表明,体内含量较少的髓蛋白,如髓寡树突细胞糖蛋白(MOG)、髓碱相关糖蛋白(MAG)等也是很强的抗原。髓鞘素(Myelin)、脊髓组织匀浆(SCH)、脑组织匀浆(BH)等也可作为致敏抗原。某些非髓性蛋白,如神经原蛋白(neuronal protein,S100β)、胶原纤维酸蛋白(GFAP)也参与EAE的发病。

通常不同品种动物对同一抗原的敏感性不同、不同抗原的抗原性也不同,并且不同来源的同一抗原的活性也有明显差异。一般情况下,抗原性强弱依次为豚鼠脊髓>大鼠脊髓>牛脊髓,脊髓组织>脑组织,豚鼠MBP>牛MBP。蛋白或多肽单体不但结构明确,而且可以定量,因此利于进行EAE发病机制研究,但不易获得。脊髓匀浆和脑组织匀浆两种抗原均含有多种抗原表位,且易于获得,适用于多种动物,但其成分复杂,不易定量,这给某些特殊研究造成不便。诱导鼠类产生EAE的异种抗原,以新鲜豚鼠脊髓制备的抗原佐剂乳化物为。在一定范围内抗原的量和EAE的发病率及发病程度有相关性,注射抗原佐剂乳化物的剂量越大,EAE的发病率越高。抗原的剂量可因动物的品系、抗原种类、免疫方法、研究目的等的不同而有很大变化。另外,抗原的物理状态也很重要,高分散度的抗原易于被吞噬和递呈,进而较率地激活免疫系统。

 

 

EAE模型佐剂的选择

提取的抗原需与佐剂混合制成抗原乳剂后才能致敏动物。抗原佐剂为非特异性免疫增强剂,它可改变抗原的物理性状,延长抗原在体内的储留时间,刺激抗原提呈细胞及淋巴细胞,从而增强和扩大免疫应答效果,它还能引起迟发性血脑屏障通透性增加和自身免疫反应。zui常用的佐剂为*弗氏佐剂(CFA),CFA在提高抗体的幅度和持久性方面是当今作用zui强的佐剂。国外一般均采用人型结核杆菌(H37Ra)作为弗氏佐剂。不同实验室所用的致敏抗原及佐剂中分枝结核杆菌蛋白浓度有所差别,提高结核杆菌的浓度,可提高EAE 的发生率及复发率,但也容易引起注射部位坏死。由于H37Ra在国内不易获得,常采用廉价易得的卡介苗(BCG)来代替。

百日咳杆菌疫苗(BPV)毒素能增加血管壁的通透性和血管表面粘附分子的表达,有利于致敏的T细胞透过血脑屏障,攻击神经髓鞘,造成对脑、脊髓组织的免疫损伤。于FCA中加入BPV可明显缩短Wistar大鼠EAE的潜伏期,提高其发病率,加重其临床症状,对EAE有明显的促发作用。在用GPSCH诱导Wistar大鼠EAE的同时,给予BPV 可使EAE的潜伏期、发病率、临床症状、体重及病理改变等方面与敏感的Lewis大鼠EAE的上述表现近似。

 

EAE模型模型制备方法

EAE是实验动物通过神经组织(其中的某些成分)或病毒诱导产生的。EAE的诱导有主动诱导法和被动诱导法两种。不同的免疫方法,可影响抗原递呈,激发不同的免疫反应,这不但影响EAE的发生率,还可影响其发展与转归。

通常采用主动诱导法制备EAE模型,将抗原与佐剂的混合乳剂直接注射至动物体内,经过一定时间的潜伏期,诱导EAE的产生。抗原注射部位的不同,可影响EAE的发生率、潜伏期、死亡率及复发率。常用的注射部位有脚垫、颈部及背部(皮下、皮内、肌肉)、腹腔和尾静脉等多种,其中以皮下多点注射及脚垫注射的发病率zui高,而颈部注射则有较高的复发率。 因多次注射易引发免疫耐受,现在多采用单次注射抗原法。

EAE的被动转移实验是研究其发病机制的zui直接证据,也是研究EAE的治疗及预防措施的良好模型。将抗原激活的PLP特异性T细胞转输给同一品系的正常大鼠或小鼠,也可引起EAE。MBP特异性自身反应性T细胞在MS的发病机制中也起着关键作用,T细胞必须先在外周活化,通过血管内皮细胞进入CNS才能致病。

 

EAE模型临床表现

 

EAE模型5.1 症状分级

EAE的神经症状通常根据Kono等提出的标准分为5级。0级:无任何临床症状;1级:动物尾巴无力,2级:尾部无力+肢体无力,3级:肢体轻度麻痹,4级:肢体严重麻痹,被动翻身后不能复原;5级:濒死状态或死亡。

 

EAE模型5.2 发病过程

抗原诱导EAE后,如果发病,一般都在注射抗原佐剂乳化物后10d左右开始出现症状,第2~3周症状达高峰。有报道Lewis大鼠用豚鼠全脊髓匀浆诱发EAE时其潜伏期为12.1 dpi(10~14 dpi),发病率为51/53,临床评分一般在2.5~3.5分左右。采用BCG和Wistar大鼠建立的EAE模型,其发病率稳定在50%左右。存活者常在注射抗原后3周左右症状自行缓解,一月左右基本恢复。随症状缓解,体重也逐渐恢复。如果注射抗原3周后未出现EAE症状,则不再发病。

 

EAE模型小结

EAE是由针对CNS髓鞘发生免疫攻击的CD4+Th1细胞介导的自身免疫性疾病,抗原致敏的T细胞穿过血脑屏障进入中枢,诱发对自身髓鞘抗原的免疫应答,导致脑及脊髓的免疫损伤。EAE是人类MS的经典动物模型,通过对EAE发病机制、病情发生发展规律、临床及病理改变、治疗及预防等方面的深入研究,能够为MS的治疗提供充分的实验依据。

 

 

相关试剂

货号 品名 价格¥ 规格 品牌
A1031-10 Myelin Basic Protein (68-82), guinea pig 10mg 1540 10mg apexbio
A1031-25 Myelin Basic Protein (68-82), guinea pig 25mg 2156 25mg apexbio
A1031-5 Myelin Basic Protein (68-82), guinea pig 5mg 924 5mg apexbio
A1040-10 Myelin Basic Protein (87-99) 10mg 5600 10mg apexbio
A1040-1 Myelin Basic Protein (87-99) 1mg 1120 1mg apexbio
A1040-25 Myelin Basic Protein (87-99) 25mg 7840 25mg apexbio
A1040-5 Myelin Basic Protein (87-99) 5mg 3360 5mg apexbio
ARG62560 Myelin Basic Protein (MBP) 3289 0.5mL arigobio
ARG52344 Myelin Basic Protein (MBP) 3289 100?L arigobio
ARG62561 Myelin Basic Protein (MBP) 3289 200ul arigobio
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H-1072.0005 Myelin Basic Protein (4-14) 7600 5.0mg bachem
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H-4306.0001 Myelin Basic Protein (83-99) (bovine) 7140 1.0mg bachem
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231141 Mycobacterium tuberculosis H37Ra, Desiccated 6000 100mg BD
8642852 Freunds Adjuvant Incomplete (FICA)弗氏*佐剂 258 10ml Mpbio
list180 Pertussis Toxin Islet-Activating Protein Lyophilized in buffer百日咳毒素  4420 50µg listlabs
list181 Pertussis Toxin Islet Activating Protein Lyophilized (Salt-Free)百日咳毒素  4420 50µg listlabs