荧光二抗的选择——Dylight荧光与传统荧光标记的比较

顾名思义,荧光二抗通常指代的就是带荧光团标记的二抗,这样的二抗可以通过观察其在不同波长下荧光的强度来确定其二抗的含量。常见的荧光团包括FITC、Rhodamine、Texas Red、PE、Cy系列等。比如FITC即异硫氰酸荧光素,是目前应用zui广泛的荧光素。zui大吸收光波长为490~495nm,zui大发射光波长为 520~530nm,呈现明亮的黄绿色荧光。其优势是分子量较小为389.4,每一个抗体可标记几个FITC分子,而且人眼对黄绿色较为敏感,因此具有很好的对比度其缺点是淬灭快。罗丹明(Rhodamin)及其衍生物则是一群带黄红色荧光的荧光素,包括TRITC、Texas Red等。罗丹明及其衍生物与FITC的绿色荧光对比鲜明,可配合用于双重标记或对比染色。因其荧光淬灭慢,也可用于单独标记染色,但是其荧光强度偏弱,其中Rhodamin比Texas Red荧光又要偏弱。艾美捷能为客户提供全系列的各种*荧光二抗,包括Jackson的大包装粉末形式的荧光二抗,另外,也提供EarthOx的小包装液体形式荧光二抗,均具有很高的性价比。更多二抗产品,请查看:艾美捷二抗产品。

 

花箐素Cy是另一类荧光团,包括绿色的Cy2、黄红色的Cy3、红色的Cy5、近红外的Cy5.5等荧光染料,由于结构的稍微区别,其吸收和发射波长也有所区别。比如Cy2耦联基团激发波长为492nm,发光为波长510nm的绿色可见光。Cy2和FITC使用相同的滤波片,但是要避免使用含有磷酸化的苯二胺的封片剂,因为这种抗淬灭剂和Cy2反应,在染色片储存后会导致荧光微弱和扩散。Cy3和Cy5比其他的荧光团探针要更亮,更稳定,背景更弱。Cy3耦联基团激发光的zui大波长为550nm,zui强发射光为570nm。因为激发光和发射光波长很接近TRITC, 在荧光显微镜中,可使用和TRITC一样的滤波片。Cy5可以和很多其他的荧光基团一起用在多标记的实验中。由于它的zui大发射波长在670nm,Cy5很难用裸眼观察,而且不能用汞灯作理想的激发。通常观察Cy5时采用具有合适激发光和远红外检测器的共聚焦显微镜。下面我们看一组荧光二抗的比照图片:

 

 

我们知道,FITC的绿色荧光强度肉眼观察已经很亮了,但是从左上面的图可见,与Cy2相比还是偏弱,而Dylight 488则更胜*;右上图是不同荧光团在含有90%甘油的PBS里的荧光淬灭情况,由图可见。FITC的淬灭都很快,Cy2其次,而Dylight 488和Alexa 488都具有很好的光稳定性。下面再看另一组有关于红色荧光的数据:

 

 

由左上图可见,Dylight 594比Alexa 594和Texas Red的荧光强度都要强,Dylight 594的特异性也很好;同样,右上图显示Dylight 594的光稳定性也很优异。那么Dylight到底是一种什么样的荧光团?不管在结构以及功能和应用上,Dylight都是一种新的荧光团,与传统的荧光团相比,其分子量相对较小,因此一个大分子上可以标记更多的Dylight,同时单个的Dylight荧光团,其荧光强度更强,特异性更好;Dylight对光更稳定,这意味着其具有更高的抗淬灭性,不像FITC因为快速发生淬灭而无法及时捕捉到荧光图像。Dylight还有一个优势是种类很全,比如做三标的时候,除了常见的红色和绿色荧光,蓝色荧光应该是第三选择,Dylight 405就是蓝色的。Dylight 488是绿色的,可*替代FITC;*替代Cy3和Rhodamin的Dylight 549;替代Texas Red的Dylight 594;Dylight 633和Dylight 649则是更强的红色荧光;另外,Dylight还有适配Odyssey系统的近红外和远红外二抗,分别是Dylight 680和Dylight 800。

 

可能还需要考虑的一个问题是价格的问题,其实Dylight的荧光二抗与常规荧光二抗相比,具有更高的性价比,一般来说,Dylight的价格比常规二抗只高20%左右,但是Dylight的效价通常是常规荧光二抗的2-4倍左右,因此就zui终的性价比,Dylight更胜*。举例来说,EarthOx的FITC标记的山羊抗小鼠IgG二抗(货号为E031210),100μl是¥160;而相应的EarthOx的Dylight 488标记的山羊抗小鼠IgG二抗(货号为E032210),100μl报价是¥240,但是在具体使用时,比如免疫荧光实验,其推荐稀释比率分别为1:100和1:400,即100μl的FITC标记山羊抗小鼠IgG二抗(货号为E031210)zui终使用液是10ml,而100μl的Dylight 488标记山羊抗小鼠IgG二抗(货号为E032210)zui终使用液是40ml,可见,即使不考虑Dylight更高的荧光强度、更好的光学稳定性和特异性,但就价格来说,Dylight荧光二抗也具有更高的性价比。

 

作为多家的中国或区域代理,金畔生物能为您提供全系列的Dylight*荧光二抗,包括Jackson、KPL的大包装粉末形式的Dylight荧光二抗,另外,也提供EarthOx的小包装液体形式Dylight荧光二抗,均具有很高的性价比。针对荧光标记二抗,有FITC、TRITC、Rhodamine、PE、Cy3/5、AMCA、Dylight等多种荧光标记二抗;按照检测物种分,有抗 人、大鼠、小鼠、猪、驴、绵羊、山羊、小鸡、马、兔、仓鼠、狗、牛,以及多种细菌类二抗;另外,还有IgG、IgA、IgM以及IgG(Fc)、 IgG(ab’)2等不同类型抗体。

碱性磷酸酶标记生物素

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产品编号 bs-0311P-AP
英文名称 Biotin/AP
中文名称 碱性磷酸酶标记生物素
别    名   生物素化碱性磷酸酶;
保存条件 Store at -20℃.
注意事项 This product as supplied is intended for research use only, not for use in human, therapeutic or diagnostic applications.
产品介绍

荧光素标记庆大霉素

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产品编号 bsF-0972
英文名称 Gentamicin/FITC
中文名称 荧光素标记庆大霉素
别    名 Gentamycin  
荧光素标记庆大霉素
Specific References  (2)     |     bsF-0972 has been referenced in 2 publications.
[IF=5.08] Ye, Fan. et al. Rutin ameliorates inflammatory pain by inhibiting P2X7 receptor in mast cells. J PHYSIOL BIOCHEM. 2022 Dec;:1-9  
PubMed:36512286

[IF=4.45] Lo, Jung-Hsin, et al. “Sensitization of Intracellular Salmonella to Aminoglycosides in vitro and in vivo by a Host-Targeted Antimicrobial Agent.” Antimicrobial Agents and Chemotherapy (2014): AAC-03778.  Other ;  Mouse.  
PubMed:25267669

性    状 Lyophilized powder
保存条件 Shipped at 4℃. Stored at -20℃ for one year, protect from light.
产品介绍

荧光标记染料Cy3

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产品编号 D-9602
英文名称 Cy3,SE
中文名称 荧光标记染料Cy3
别    名   荧光染料; 荧光素; 荧光素Cy3
荧光标记染料Cy3
Specific References  (1)     |     D-9602 has been referenced in 1 publications.
[IF=6.986] Jienan Shen. et al. Digital Microfluidic Thermal Control Chip-Based Multichannel Immunosensor for Noninvasively Detecting Acute Myocardial Infarction. Anal Chem. 2021;XXXX(XXX):XXX-XXX  
PubMed:34730944

保存条件 Store at -20 °C for one year.
注意事项 This product as supplied is intended for research use only, not for use in human, therapeutic or diagnostic applications.
产品介绍 Cy3 fluoresces greenish yellow (~550 nm excitation, ~570 nm emission), while Cy5 is fluorescent in the red region (~650 excitation, 670 nm emission). Cy3 can be detected by various fluorometers, imagers, and microscopes with standard filters for Tetramethylrhodamine (TRITC). Due to inherently high extinction coefficient, this dye is also easily detected by naked eye on gels, and in solution. Cy5 become very popular to replace far red fluorescent dyes, because of its high extinction coefficient (as small as 1 nanomol can be detected in gel electrophoresis by naked eye) and of its fluorophore emission maximum in red region, where many CCD detectors have maximum sensitivity, and biological objects have low background.
The scanners actually use different laser emission wavelengths (typically 532 nm and 635 nm) and filter wavelengths (550-600 nm and 655-695 nm) to avoid background contamination. They are thus able to easily distinguish colors from Cy3 and from Cy5, and also able to quantify the amount of Cy3 and Cy5 labeling in one sample (multiparametric detection).

菁染料是性能优良的荧光标记染料,摩尔吸光系数在荧光染料中是最高的,其琥珀酰亚胺酯是最常用的脂肪氨基标记试剂,广泛用于蛋白、抗体、核酸及其他生物分子的标记和检测。通过改变次甲基链的长度, 可改变其荧光发射波长,每增加一个双键,按照Huoffman 规则正好红移约100nm。
菁染料Cy3 和Cy5 已成为基因芯片的首选荧光标记物; 另外,Cy5, Cy5.5 和Cy7 的吸收在近红外区背景非常低,是荧光强度最高、最稳定的长波长染料。特别适合于活体小动物体内成像代替放射性元素。
花菁染料Cy3, SE是一种为数不多的近红外荧光标记染料,它产生的红色荧光背景低、荧光强度高,而且荧光稳定性好。Cy3, SE常被应用于生物分子标记,荧光成像及其他荧光生物分析,例如标记多肽、蛋白质和核酸等。Cy3, SE 荧光标记染料与蛋白质结合后可以显著增强荧光强度。

荧光标记染料Cy5

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产品编号 D-9604
英文名称 Cy5,SE
中文名称 荧光标记染料Cy5
别    名   荧光染料; 荧光素Cy5
保存条件 Store at -20 °C for one year.
注意事项 This product as supplied is intended for research use only, not for use in human, therapeutic or diagnostic applications.
产品介绍 Cy3 fluoresces greenish yellow (~550 nm excitation, ~570 nm emission), while Cy5 is fluorescent in the red region (~650 excitation, 670 nm emission). Cy3 can be detected by various fluorometers, imagers, and microscopes with standard filters for Tetramethylrhodamine (TRITC). Due to inherently high extinction coefficient, this dye is also easily detected by naked eye on gels, and in solution. Cy5 become very popular to replace far red fluorescent dyes, because of its high extinction coefficient (as small as 1 nanomol can be detected in gel electrophoresis by naked eye) and of its fluorophore emission maximum in red region, where many CCD detectors have maximum sensitivity, and biological objects have low background.
The scanners actually use different laser emission wavelengths (typically 532 nm and 635 nm) and filter wavelengths (550-600 nm and 655-695 nm) to avoid background contamination. They are thus able to easily distinguish colors from Cy3 and from Cy5, and also able to quantify the amount of Cy3 and Cy5 labeling in one sample (multiparametric detection).

菁染料是性能优良的荧光标记染料,摩尔吸光系数在荧光染料中是最高的,其琥珀酰亚胺酯是最常用的脂肪氨基标记试剂,广泛用于蛋白、抗体、核酸及其他生物分子的标记和检测。通过改变次甲基链的长度, 可改变其荧光发射波长,每增加一个双键,按照Huoffman 规则正好红移约100nm。
菁染料Cy3 和Cy5 已成为基因芯片的首选荧光标记物; 另外,Cy5, Cy5.5 和Cy7 的吸收在近红外区背景非常低,是荧光强度最高、最稳定的长波长染料。特别适合于活体小动物体内成像代替放射性元素。
花菁染料Cy5, SE是一种为数不多的近红外荧光标记染料,它产生的红色荧光背景低、荧光强度高,而且荧光稳定性好。Cy5, SE常被应用于生物分子标记,荧光成像及其他荧光生物分析,例如标记多肽、蛋白质和核酸等。Cy5, SE 荧光标记染料与蛋白质结合后可以显著增强荧光强度。