cfPure™血清/血浆游离 DNA（cfDNA） 提取试剂盒
（磁珠法）
目录号：K5011610, K5011625
产品内容
产品号：K5011610（100ml 血清/血浆样本提取试剂盒）
|
组分
|
产品号
|
规格
|
|
1. 裂解/结合液 Lysis/Binding Buffer
|
K5011610-1
|
1 x 115 ml
|
|
2. 洗涤液 Wash Buffer
|
K5011610-2
|
2 x 55 ml
|
|
3. 洗脱液 Elution Buffer
|
K5011610-3
|
1 x 6 ml
|
|
4. 磁珠溶液 Magnetic Bead Solution
|
K5011610-4
|
2 x 1.33 ml
|
产品号：K5011625（250ml 血清/血浆样本提取试剂盒）
|
组分
|
产品号
|
规格
|
|
1. 裂解/结合液 Lysis/Binding Buffer
|
K5011625-1
|
3 x 95 ml
|
|
2. 洗涤液 Wash Buffer
|
K5011625-2
|
5 x 55 ml
|
|
3. 洗脱液 Elution Buffer
|
K5011625-3
|
1 x 15 ml
|
|
4. 磁珠溶液 Magnetic Bead Solution
|
K5011625-4
|
5 x 1.33 ml
|
储存条件
该试剂盒置于室温（15-25℃）干燥条件下，可保存 12 个月。
特点
l 无毒。
l 高回收率。
l 操作灵活的实验程序。
l 纯化的 DNA 可用于二代测序(NGS), 荧光定量 PCR 和亚硫酸氢盐测序等。
产品简介
本试剂盒可率从血清/血浆中提取游离 DNA，磁珠法程序适用于多种核酸自动化提取 仪，所得游离 DNA 可直接用于 PCR 模 板、qPCR、二代测序（NGS）和其他应用程序。 规格
100ml 血清/血浆样本提取试剂盒
250ml 血清/血浆样本提取试剂盒 质量控制 所有试剂均经过纯度和有效性测试。
注意事项 请务必在使用本试剂盒之前阅读此注意事项
样本：新鲜和冻存血清/血浆均可使用，新鲜样本会有较高的得率。
量化：每毫升血清/血浆游离 DNA 得率为 1-100 微克。用分光光度法定量（例如. Nanodrop）
可能无法准确地测定得率。可使用 Qubit™ dsDNA High Sensitivity Assay。
聚合酶链反应(PCR)的建议：由于血清/血浆中提取 DNA 多数为小片段特性，设计引物时需谨
慎。游离 DNA 往往为小片段 170bp 左右，因此，PCR 引物设计应该生成的产物为小于 150 bp
范围。健康人血浆游离 DNA 浓度低，PCR 的循环次数在某些情况下需达到 40 个循环。
treck Cell-Free DNA BCT Tube(s) 基因检测无创采血管: 无创管经蛋白酶 K 处理可分离高质
量的无细胞 DNA，否则 DNA 得率会减少 50%。
自备设备和试剂
l 移液管
l 涡流混合器
l 磁力架
l 1.5 ml 不黏离心管
l 无水乙醇
使用前：裂解/结合液 Lysis/Binding Buffer 及 Wash Buffer 洗涤液为浓缩液。若溶液发生 沉淀，放置 37°C 水浴中预热 30 分钟，以溶解沉淀。*次使用试剂盒时，请按照提示在裂 解/结合液 Lysis/Binding Buffer 及洗涤液 Wash Buffer 加入无水乙醇，储存 2–8°C 有效期一年， 盖紧瓶盖以确保长期存储。
产品号：K5011610
l 加入 23ml 无水乙醇至裂解/结合液 Lysis/Binding Buffer 中，轻轻颠倒混匀。
l 加入 51 ml 无水乙醇至每个洗涤液 Wash Buffer 中，轻轻颠倒混匀。
l 每次提取前配制新鲜 80%乙醇。
产品号：K5011625
l 加入 19ml 无水乙醇至每个裂解/结合液 Lysis/Binding Buffer 中，轻轻颠倒混匀。
l 加入 51 ml 无水乙醇至每个洗涤液 Wash Buffer 中，轻轻颠倒混匀。
l 每次提取前配制新鲜 80%乙醇。
实验前确定要提取的血清/血浆量（100µl~10ml 均可），按下表计算所需裂解/结合液
Lysis/Binding Buffer 和 Magnetic Bead Solution 磁珠溶液使用量。
|
血清/血浆
|
裂解/结合液
Lysis/Binding Buffer
|
磁珠溶液 Magnetic
Bead Solution
|
离心管尺寸
|
|
x (x=ml of 血清/血浆)
|
1.25x
|
0.025x
|
N/A
|
|
500 µl
|
750 µl
|
12.5 µl
|
2 ml
|
|
1 ml
|
1.25 ml
|
25 µl
|
15 ml
|
|
5 ml
|
6.25 ml
|
125 µl
|
15 ml or 或 50ml*
|
|
10 ml
|
12.50 ml
|
250 µl
|
50 ml
|
*5ml 或以上血清/血浆建议使用 50ml 离心管，使用 15ml 离心管造成泄露会造成得率降低。
蛋白酶 K 处理
如果样品使用基因检测无创采血管 Streck Cell-Free DNA BCT Tube(s)采集，蛋白酶 K 处理可
确保高回收率。非该采血管采集的样本可直接进行裂解/结合 Lysis/Binding 步骤。
|
血清/血浆
|
蛋白酶 K
|
20% SDS 溶液
|
|
x (x=ml of 血清/血浆)
|
0.015 x
|
0.050 x
|
|
500 µl
|
7.5 µl
|
25 µl
|
|
1 ml
|
15 µl
|
50 µl
|
|
5 ml
|
75 µl
|
250 µl
|
|
10 ml
|
150 µl
|
500 µl
|
1. 加入适量血清/血浆到适合的离心管中。
2. 每 1ml 血清/血浆加入 15 µl 蛋白酶 K（20 mg/ml）。
3. 每 1ml 血清/血浆加入 50 µl SDS（20%）溶液。
4. 颠倒混匀 5 次。
5. 60°C 孵育 20 分钟。
6. 冰上预冷 5 分钟，放置室温。
7. 放置室温后可进行裂解/结合 Lysis/Binding 第二步
裂解/结合 Lysis/Binding
1. 加入适量血清/血浆到适合离心管中。
2. 每 1ml 血清/血浆加入 1.25ml 裂解/结合液 Lysis/Binding Buffer。
3. 每 1ml 血清/血浆加入 25µl 磁珠溶液 Magnetic Bead Solution。 注意：加入之前混匀磁珠溶液，确保溶液无磁珠沉淀。磁珠会迅速下沉所以每次加样前都 要混匀磁珠，以免造成 DNA 得率不一致。
4. 室温涡流混合或用力摇动离心管 10 分钟。*为获得高产量，确保血样本/缓冲溶液在管内混 合，推荐使用旋涡混合器。
5. 将离心管置于磁力架磁分离 2~5 分钟或直至溶液清透。
6. 保持离心管置于磁力架上小心去除上清，不要触碰磁珠。
7. 保持离心管置于磁力架上 1 分钟，去除残液。
*次洗涤
8. 加入 1000µl 洗涤液 Wash Buffer 至第 7 步裂解/结合 Lysis/Binding 管中。 9. 涡流混合 10 秒或移液管吹打 6 次重悬磁珠。
10. 将重悬液移至 1.5ml 离心管置于磁力架。
11. 置于磁力架 10~30 秒。
12. 移液管抽取上清至裂解/结合 Lysis/Bindin 管。
13. 将裂解/结合 Lysis/Bindin 管中剩余磁珠全部移至 1.5ml 离心管。
14. 1.5ml 离心管置于磁力架磁分离 10~30 秒至液体清澈。
15. 用 1000µl 移液枪头尽量去除上清。
16. 用装有离心管的磁力架轻轻敲击实验台 5 次，用 200µl 移液枪头去除废液。
17. 离心管移至试管架上加入 1000µl 洗涤液 Wash Buffer。
18. 涡流混合 20 秒或移液管吹打 6 次重悬磁珠。
19. 短暂离心。*离心仅用于涡流混合之重悬磁珠，短暂离心仅为去除离心管盖上的吸附液体。
20. 离心管置于磁力架磁分离 10~30 秒。
21. 用 1000µl 移液枪头尽量去除上清。
22. 用装有离心管的磁力架轻轻敲击实验台 5 次，用 200µl 移液枪头去除废液。
第二次洗涤
23. 离心管移至试管架上加入 1000µl 乙醇（80%）。
24. 涡流混合 20 秒或移液管吹打 6 次重悬磁珠。
25. 短暂离心。
26. 离心管置于磁力架磁分离 10~30 秒至溶液清澈。
27. 用 1000µl 移液枪头尽量去除上清。
28. 用装有离心管的磁力架轻轻敲击实验台 5 次，用 200µl 移液枪头去除废液。
29. 离心管移至试管架上加入 1000µl 乙醇（80%）。
30. 涡流混合 20 秒或移液管吹打 6 次重悬磁珠。
31. 短暂离心。
32. 离心管置于磁力架磁分离 10~20 秒。
33. 用 1000µl 移液枪头尽量去除上清并保持管盖打开。
34. 用装有离心管的磁力架轻轻敲击实验台 5 次。
35. 用 200µl 移液枪头去除废液。
36. 保持管盖打开 2 分钟，磁力架轻轻敲击实验台 5 次，用 200µl 移液枪头去除废液。
37. 继续干燥 1-3 分钟。*注意不要过分干燥以免磁珠粘在管壁上。
洗脱
38. 离心管移至试管架上加入适量洗脱液 Elution Buffer。注意：建议每毫升血清/血浆加入 12.5
µl 洗脱液 Elution Buffer 以确保*得率。 39. 涡流混合或用力摇动离心管 5 分钟。
40. 短暂离心。
41. 置于磁力架 10~30 秒。
42. 上清移至新 1.5ml 离心管。
