干细胞温和消化酶
【干细胞温和消化酶 用途与描述】
专门用于干细胞的消化,包括脐带间充质干细胞,脂肪间充质干细胞,胚胎干细胞(ES)等。
消化作用温和,对细胞的损害小。为目前干细胞临床研究与临床应用领域的新产品。
本产品特别适用于大规模生产干细胞的企业。消除了导致干细胞培养失败的重要隐患——消化过度问题。
本产品也特别适用于干细胞药物的研究与开发企业。无动物来源组分,成分明确,降低了干细胞药物申报的验证工作量与申报难度。
【干细胞温和消化酶 规格与保存】
产品名称
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产品货号
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规格与保存
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干细胞温和消化酶
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NC1004.1
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500mL/瓶,2-8℃保存,效期12个月
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干细胞温和消化酶
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NC1004.2
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100mL/瓶,2-8℃保存,效期12个月
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【干细胞温和消化酶 产品特点】
1. 产品容错性好。
即便消化时间长达15分钟,对干细胞的后续传代也几乎没有影响。减少了对操作人员技能的要求。
2. 即取即用,不需等待。
4℃可稳定保存一年,不再需要-20℃保存。
3. 纯人工合成,无动物来源组分。
无感染疯牛病毒(天然牛胰酶)或口蹄疫病毒(天然猪胰酶)的可能性,成分明确。
【干细胞温和消化酶 产品性能】
新一代消化产品(温和消化酶)与传统消化产品(猪牛天然胰酶)对比表
项目类型
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细分类别
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传统产品
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新一代产品
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消化性能
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正常消化 (未消化过度)
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细胞活率
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85%
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95%以上
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消化后继续培养得到的细胞数
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1.06×106
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1.14×106
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超时消化 (消化过度)
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细胞活率 |
60% |
95%以上 |
消化后继续培养得到的细胞数 |
0.64×106 |
1.08×106 |
极端消化 (15分钟消化)
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细胞活率 |
0-10%
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90%以上 |
消化后继续培养得到的细胞数 |
无法收获细胞
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1.04×106 |
使用便利程度
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消化后是否需要终止?
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需要 |
不需要 |
是否需要-20℃保存?
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需要 |
不需要 |
是否可以即取即用?
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不可以 |
可以 |
使用综合成本
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终止消化的成本 |
高。 需要使用血清、完全培养基或胰酶抑制剂。
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低。 不需终止消化。 加细胞培养上清稀释即可。
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细胞应用前病毒检测的成本 |
高。 需检测猪口蹄疫、牛 疯牛病等动物病毒。
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0成本。 无动物源,所以无需检测
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产品安全性
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是否无动物来源组分?
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不是 |
是 |
是否可以确知无动物病毒?
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不可以 |
可以 |
细胞药物申报难度
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产品的残留影响的证明难度
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大。 各种杂质组分不明, 难以证明。
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小。 成分明确,均为人工 合成的组分。
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上述数据为接种脐带来源的MSC的P2代种子细胞,T25培养瓶,接种密度8000 cells/cm2,72小时后消化所得P3代细胞的对应数据。
正常消化(未消化过度)时,温和酶 确定好于 传统胰酶。
P2代MSC种子细胞,传代培养72小时后,分别用温和酶和传统胰酶消化,得到P3代MSC细胞,检测消化后的细胞活率。
P3代MSC细胞继续培养72小时,分别用温和酶和传统胰酶消化,收获P4代MSC细胞,细胞计数。
细胞数量方面相差不大:温和酶比传统胰酶多出 7%。
细胞活率方面相差较大:温和酶比传统胰酶高出10%。
对比类别
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传统胰酶
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温和消化酶
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P3代MSC细胞活率 |
85%
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95%
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收到的P4代MSC细胞数量 |
1.06×106cells |
1.14×106cells |
复苏P2代MSC种子细胞,连续传代3次,分别用温和酶和传统胰酶消化。
细胞数量方面:每一代温和酶均比传统胰酶多出 5%-10%。
4℃可稳定保存一年,不再需要-20℃保存。
干细胞温和消化酶在4℃环境下保存14个月,在超过有效期两个月后,酶活性仍保持在96%。
操作更便利,消化后不需终止消化,细胞培养上清稀释即可。
传统胰酶消化细胞后,需要额外添加血清,或完全培养基,或胰酶抑制剂,结合胰酶的消化位点,以达到终止消化的目的。
温和消化酶由于其设计原理,在消化细胞后,不需要终止消化,只需要添加细胞培养上清,稀释消化酶,离心去除即可。便利了操作。
成分明确,无任何动物来源组分,更安全。更适合临床研究、临床应用或药物申报用途。
传统胰酶,取自牛或猪羊的胰脏,经后期纯化结晶而得。动物来源与提取工艺决定了传统胰酶难以避免感染动物病毒,如疯牛病毒,猪口蹄疫病毒等。因此难以应用于生物制药与细胞治疗等临床相关领域。
温和消化酶,为全人工合成酶,消化位点清晰,经原核或真核系统表达,生产过程无任何动物来源组分的引入,所以安全性高,尤其适用于生物制药与细胞治疗等临床相关领域。
超时消化(消化过度)时,温和酶可多收细胞 68%。
分别超时2min消化MSC细胞,后传代培养72小时,收获细胞进行计数:
温和酶收到的细胞数量超出传统胰酶 68%。且细胞镜下形态良好。
而经传统胰酶消化的细胞,培养后镜下细胞形态杂乱。
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传统胰酶延长消化2分钟,MSC的细胞照片 |
传统胰酶消化后,传代72h 后的细胞照片 |
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温和酶延长消化2分钟,MSC的细胞照片 |
温和酶消化后,传代72h 后的细胞照片 |
极端消化(消化15分钟)时,温和酶基本不受影响。传统胰酶完全失败。
分别 15min消化MSC细胞,后传代培养72小时,收获细胞进行计数:
温和酶收到的细胞数量超出传统胰酶 11倍。且细胞镜下形态良好。
而经传统胰酶消化的细胞,培养后镜下细胞形态杂乱。
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传统胰酶延长消化15分钟,MSC的细胞照片 |
传统胰酶消化后,传代72h 后的细胞照片 |
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温和酶延长消化15分钟,MSC的细胞照片 |
温和酶消化后,传代72h 后的细胞照片 |
客户问答
Q: 为什么要开发干细胞温和消化酶产品?
A:消化过度与生长过密是干细胞培养失败的前两大原因。在生产级的大规模培养中,消化过度更是一个难以控制的工艺难题。温和消化酶就是为了解决这个问题而设计的:在该产品的消化时间挑战实验中,浸润在温和酶中长达30min的干细胞,细胞活率均能保持在90%以上,表型正常,且后续传代正常。
Q:干细胞温和消化酶的保存温度条件是2-8℃。我如果-20℃保存,会不会更好?
A:不会更好,会更差。温和酶是特殊设计的重组蛋白酶产品,蛋白结构稳定,在2-8℃条件下可稳定保存。
若放置-20℃环境,会涉及反复冻融问题,会导致该重组蛋白酶活性下降,细胞消化时间延长。
Q:温和消化酶消化细胞后,需要添加培养基或胰酶抑制剂终止消化过程吗?
A:不需要。细胞变圆后添加细胞培养上清稀释即可。体积为添加的消化酶的2倍体积,可降低用户使用成本。
Q:在消化时间方面,温和消化酶与传统胰酶有什么差别?
A:温和消化酶消化时间要稍长一些。消化干细胞需要2-5min左右的时间。
Q:添加完细胞培养上清稀释后,可不离心去除消化酶吗?
A:不可以。残留的消化酶会影响后续干细胞的培养过程,会导致干细胞的形态变化。
Q:用无血清培养基及含血清培养基培养的干细胞,在使用温和酶消化方面有什么异同?
A:相同之处是:无论使用何种培养基,在消化前均需要使用无钙镁离子的缓冲液冲洗细胞。
不同之处:如果使用无血清培养基,清洗一次即可。
如果使用血清培养基,需要连续清洗细胞三次,以确保无血清残留,否则消化时间会变长。