apexbt常见问题解答

apexbt常见问题解答

1. 我应该如何溶解产品以制备原液?
大多数小分子化合物不能直接用水、PBS或盐水溶解,但可溶于DMSO或乙醇等有机溶剂。为了获得更高的溶解度,将试管加热至 37°C 并在超声波浴中进行超声处理。溶解度与温度有关。冷却或冷冻可能会导致沉淀,因此在使用前将溶液*重新溶解。

2. 我应该如何稀释和储存原液?
储备溶液可以用水性介质进一步稀释,用于体外和体内测定。尽管有机溶剂残留部分(例如 0.1% DMSO)不应该影响大多数测定,但运行溶剂控制以防万一。
原液可在-20℃以下保存数月。小分子化合物的活性不应受到多次冻融循环的影响。

3. 如何溶解冻干肽并储存溶液?
在适当的缓冲液中重构肽,如果需要,简单地进行超声处理。建议将肽溶液等分并储存在 -20°C。
如果肽呈酸性(净电荷为负)或中性(净电荷为零),将肽溶解在少量 0.1 M 碳酸氢铵中并用水稀释至所需浓度。
如果肽是碱性的(净电荷为正),将肽溶解在少量 25% 的乙酸中并用水稀释至所需浓度。
如果肽是疏水的(不带电荷的),将肽溶解在有机溶剂中,例如 CAN、DMSO 和 DMF。
小心避免在含有 Trp、Met 或 Cys 的肽中发生氧化。可以使用无氧水或还原剂。

4. 为什么我的产品在指示的储存温度为+4°C或-20°C时到达室温?
如果产品在室温下交付,则意味着它们在运输和正确处理过程中是稳定的。一般情况下,冷藏或冷冻保存是为了长期保存,粉末状的产品在-20°C下最多可以保存2年。

5. 评价样品的数量是多少?
我们提供 1 mg 的评估样品。

6. 产品纯度和质量如何确定?
我们非常注重产品的质量。典型的产品纯度>98%。所有产品均按照严格的指导方针制造,并附有分析证书、HPLC、质谱和 HMNR 数据,可在产品网页上找到。

7. 不同批次的产品看起来总是一样的吗?
有时,不同批次的产品在颜色和外观上可能会略有不同。但不会影响产品的纯度、质量或性能。

8. 产品应该如何使用?
我们所有的产品仅供实验室研究使用。它们不应用于制药、农业、化妆品、食品、家庭或任何其他人类用途。
如果有抑制剂的 Ki 或 IC50 值的公布数据可用,建议使用比这些值高 5-10 倍的抑制剂,以最大限度地发挥抑制作用。
生物数据、背景信息和参考资料都列在我们的产品网页上以供您参考,但它们并不总是新的或*全面的。因此,我们建议您在开始实验之前也进行自己的文献研究。

9. 为什么我的产品在小瓶中几乎看不到?
有时,少量产品很容易附着在小瓶壁上,因此小瓶看起来几乎是空的。使用涡旋或超声处理确保产品*溶解在正确的溶剂中。

10. 处理蜡质或吸湿性物质。
蜡状和粘性物质很难精确称量。因此,我们建议您将此类产品直接溶解在正确的溶剂中。
吸湿性物质往往会从环境中吸收水分,从而变成浸泡或液体形式。您可以通过存放在干燥器中来保护此类产品。


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novamatrix常见问题解答

 

 

 

novamatrix常见问题解答

我还能订购超纯壳聚糖盐(PROTASAN)吗?
否。该产品停产。NovaMatrix提供多种藻酸盐和透明质酸。

您的交货条件是什么?
我们的交货条件为挪威FCA Sandvika(2010年国际贸易术语解释通则)。发票中将包含75美元的快递费用。付款条件为净发票日期(30天)。请注意,不包括关税和增值税。订单交货时间大约是10天加上发货时间。(产品将由联邦快递直接交付,联邦快递将处理进口手续并向客户收取任何进口成本或费用。)

根据FCA国际贸易术语解释通则是什么意思?
“免费承运人”是指卖方在将货物移交给承运人负责时履行了交货义务。卖方负责原点的出口包装和装货,但买方负责内陆运费和港口收货费。这意味着买方必须为进口货物执行所有海关手续。自承运人提起货物之日起,买方承担货物灭失或损坏的一切风险。除非另有说明,否则产品将由联邦快递直接交付,联邦快递将处理进口手续并向客户收取任何进口成本或费用。

我的产品卡在海关中,在哪里可以找到航空提单号,TSA声明等?
在发货时,所有用于海关的必要文件都会发送到下订单时提供的电子邮件中。请搜索您的电子邮件,并按照给定的说明进行操作。

我可以将产品出售给其他人吗?
否。我们的许多产品都用于实际的医疗设备和应用中,我们需要确保遵守杜邦医疗政策。我们的风险管理政策要求NovaMatrix仅将我们的产品出售给最终用户(公司/大学/部门等),并且只有在最终用户接受了我们的条款和条件(也定义了我们对产品的使用)之后,才可将其出售;在现阶段还没有人类。

如何储存海藻酸钠?
在2-8°C的密闭容器中

为什么没有在2-8°C下运输产品?
建议在收到客户后,将标有2-8°C的PRONOVA UP海藻酸盐冷藏。这是NovaMatrix对于内部存储的建议。但是,根据稳定性研究,在环境温度下最长运输3个月被认为是安全的。

随着时间的流逝,产品会发生什么变化?
粘度和分子量是稳定性极限参数,它们受温度影响。M / G比,生物负荷,元素,内毒素和蛋白质随时间和温度稳定。

暴露于更高温度下的藻酸盐会怎样?
在温度> 20°C时,藻酸盐溶液的表观粘度将低于CoA中所述的表观粘度。不建议对藻酸钠溶液进行高压灭菌,因为高温会严重降解聚合物链,从而降低分子量和粘度。

PRONOVA UP研究等级和GMP等级材料之间有什么区别?
我们按照GMP等级出售的产品是根据GMP要求生产,测试和存储的。研究级产品已超过GMP允许的最长5年保质期,但仍适用于研究目的。它们带有最新的CoA。

在哪里可以找到批次特定的分析结果?
所有产品装运均包括特定批次的CoA或分析报告。

如何溶解海藻酸钠粉末?
通过将藻酸盐逐渐添加到水/缓冲液等中来溶解粉末状藻酸盐,并使其充分混合。考虑到藻酸盐凝胶将在二价阳离子(如Ca 2 +,Ba 2+或Sr 2+)存在时立即形成,并且藻酸钠在低pH值下会以藻酸的形式沉淀。

如何将冻干的海藻酸钠悬浮在小瓶中?(例如PRONOVA SL和NOVATACH)
通过在室温下轻轻摇动约1小时或过夜(冷藏),将藻酸盐溶解在水,培养基,缓冲液或同分异构体溶液中。高粘度溶液需要更长的时间并且需要进行更剧烈的混合才能*溶解。

我的藻酸盐不能溶解,该怎么办?
允许更长的时间进行搅拌/混合或稍微提高温度可能有助于溶解您的产品。请记住,高粘度溶液需要更长的时间才能*溶解。关于粘度和浓度的经验法则是,浓度加倍会导致粘度增加十倍。

我将藻酸盐用于细胞,您建议使用哪种缓冲液?
为了重悬,我们建议使用通常用于特定应用程序/细胞类型的WFI /缓冲液/细胞培养基。但是,当您计划利用藻酸盐的胶凝特性时,应将磷酸盐和其他非胶凝离子(如钠)的含量保持在水平。这些类型的介质可能会削弱离子胶凝的藻酸盐。应考虑到二价阳离子的存在,因为藻酸钠在二价阳离子如钙的存在下形成离子交联的凝胶网络。

如何将细胞掺入藻酸盐中?
有几种将细胞掺入藻酸盐凝胶中的技术。
首先制作藻酸盐储备溶液。在藻酸盐储备溶液中重悬所需数量的细胞,或用培养基将藻酸盐储备溶液稀释至所需藻酸盐浓度,并用所需数量的细胞重悬细胞沉淀。对于藻酸盐珠;浓度为1,5-2%的藻酸盐通常在50 mM CaCl 2中凝胶化。由于藻酸盐溶液是粘性的,因此建议您针对特定细胞类型同时优化细胞密度和藻酸盐浓度。

如何从钙藻酸盐凝胶中收获细胞?
当涉及细胞收获时,我们建议将凝胶转移至等渗的脱胶溶液/螯合剂(建议使用50 mM柠檬酸三钠二水合物和104 mM氯化钠)并在37°C下孵育。在除胶期间,轻轻搅动或转动试管几次。最后离心以沉淀细胞,除去上清液,然后将细胞重悬于培养基中。

富含M和富含G的藻酸盐有什么区别?
海藻酸盐由两种单体组成。β-D-甘露糖醛酸(M)和α-L-古洛糖醛酸(G)。富含G的藻酸盐比富含M的藻酸盐具有更高的与二价阳离子的结合活性,从而促进了凝胶的形成。通常,具有低MW的凝胶网络比具有较高MW的凝胶网络降解得更快,并且富含M的凝胶网络比富含G的凝胶网络降解得更快。富含M的凝胶网络中的溶胀率通常也较高,形成的结构比富含G的凝胶网络更柔软。我们富含M的藻酸盐的规格为M> 50%,富含G的藻酸盐G> 60%

我购买的产品的G / M比率是多少?
与产品一起运输的CoA中提供了古洛糖醛酸或甘露糖醛酸含量。

PRONOVA UP的分子量是多少?
分子量不是所有产品的标准规格。请参见表中基于表观粘度的估算值。

 

NOVATACH的肽偶联率是多少?
请参阅产品后的分析报告或CoA。

对于NOVATACH,该肽是否与藻酸盐共价结合?
是的

Indoor Bio产品中常见问题解答

INDOOR Biotechnologies Inc公司是一家专业开发生产用于研究哮喘以及其他过敏性疾病的免疫诊断和相关生物学检测产品的生物技术公司,IB由两家子公司组成,一家是位于美国弗吉尼亚的INDOOR Biotechnologies Inc. (IBI),另一家为位于英国INDOOR Biotechnologies Limited (IBL)。IB的创始人Martin D. Chapman博士曾经是美国弗吉尼亚大学的医学和微生物教授,并曾经担任过美国NIH、环保署已及多家生物公司的顾问科学家。做为环境过敏原(变应原)检测系统的领导公司,IB生产的一系列过敏原研究和检测用抗体拥有来自美国弗吉尼亚大学的*,能够用于检测屋尘螨、猫、狗、蟑螂和真菌来源过敏原。 IB开发生产面向实验室用户的过敏原Elisa检测试剂盒以及面向家庭用户的过敏原快速检测试剂盒,利用后者用户在家中即可于10分钟之内检测出屋尘螨抗原。这些检测系统可用于对过敏原环境暴露水平的评估,也能让用户对使用的过敏原隔离清除程序、相关产品和设备的有效性进行可靠的评估,还可应用于过敏原标准化以及相关产品的研究开发 上海金畔生物作为其中国代理长期为中国科研客户带来产品,以下是INDOOR Biotechnologies Inc产品一些问题的解答

一、MARIATM 试剂盒

Indoor Biotechnologies研发出一种针对Indoor过敏原(MARIATM)的多重芯片,可以在一次检测中同时测试8个zui重要的Indoor过敏原。芯片同时检测Der p 1, Der f 1, Mite Group 2, Fel d 1, Can f 1, Rat n 1, Mus m 1 Bla g 2MARIATM可以提升高通量系统的实验分析能力(灵敏度,度和精密度增加),并可以节省时间和成本。

MARIATM技术与Radix BiosolutionsLuminex Corporation合作研发,并受到小企业创新研究所(SBIR)从国家环境健康科学研究(NIEHS)所得到的合同支持。结合了Indoor对过敏原特异的单抗生物技术产权与LuminexxMAP技术的力量,表现了过敏原检测的工艺水平。

MARIATM的性能与实验室内部的重复性已经在多通道研究,包括来自美国和欧洲的9个实验室中被证实了。研究对比了32,000个过敏原的检查结果,表明MARIA在不同实验室的重复性都很好。近期的Indoor的数据发表在EAACI 2010上,在一个ISO17025依从的分析实验室检测结果表明MARIA的结果具有可重复性,

具体产品:

Premixed 5-plex Multiplex Array for Indoor Allergens (MRA-P5)

描述:

这个试剂盒可以分析Der p 1,Der f 1, Der p 2, Fel d 1Can f 1。这是一个多通量分析试剂盒,由INDOOR Biotechnologies生产。可以同时定量测定5个常见的Indoor过敏原:房屋灰尘螨Der p1(屋尘螨),Der f 1(粉尘螨),和螨2型及动物过敏原Fel d 1(猫,猫属)和Can f 1(狗,狗属)

这个试剂盒可以用于分析环境样品中的上述indoor过敏原,如房屋灰尘螨,或空气过滤器样本和其他生物学或环境学样本。

remixed 5-plex Multiplex Array for Indoor Allergens (MRA-P5B)

描述:

这个试剂盒可以用于分析Der p 1Der f 1Fel d 1Can f 1 Bla g 2。这是一个多通量分析试剂盒,由INDOOR Biotechnologies生产。可以同时定量测定5个常见的Indoor过敏原:房屋灰尘螨Der p1(屋尘螨),Der f 1(粉尘螨),及动物过敏原Fel d 1(猫,猫属),Can f 1(狗,狗属)和Bla g 2德国小蠊

这个试剂盒可以用于分析环境样品中的上述indoor过敏原,如房屋灰尘螨,或空气过滤器样本和其他生物学或环境学样本。

 

Premixed 8-plex Multiplex Array for Indoor Allergens (MRA-P8)

描述:

这个试剂盒可以用于分析Der p 1,Der f 1, Der p 2, Fel d 1, Can f 1, Bla g 2, Rat n 1 Mus m 1

这是一个多通量分析试剂盒,由INDOOR Biotechnologies生产。可以同时定量测定8个常见的Indoor过敏原:房屋灰尘螨Der p1(屋尘螨),Der f 1(粉尘螨),和螨2型及动物过敏原Fel d 1(猫,猫属),Can f 1(狗,狗属),Mus m 1 (小鼠), Rat n 1 (大鼠)和德国蟑螂,Bla g 2 (德国小蠊)

这个试剂盒可以用于分析环境样品中的上述indoor过敏原,如房屋灰尘螨,或空气过滤器样本和其他生物学或环境学样本。

 

二、ELISA试剂盒

Indoor生产定量检测ELISA试剂盒范围广泛,包裹来源于灰尘满,猫,狗,小鼠,大鼠,德国蟑螂,花粉和霉的过敏原,并且在超过200篇的科学论著中都有提到这些试剂盒。

每个试剂盒包含:

单克隆捕获抗体

校准过的过敏原标准品

校准过的生物素化的第二单抗(或兔来源的多克隆抗体)

10份(ELISA-10)或20份(ELISA-2096孔板分析的足量试剂

完整的实验操作步骤和参考资料

应用:

在环境和生物样品中检测过敏原水平

家庭过敏原检测和监测,避免一些繁琐的操作

过敏原操作规程和设备控制的售前检测

过敏原标准化

过敏原产品,诊断和疫苗的组份

产品列表:

Ø House Dust Mite房屋灰尘螨

Ø 检测Animal动物过敏原 检测

Ø Cockroach蟑螂过敏原 检测

Ø Mold霉菌过敏原 检测

Ø Pollen花粉过敏原 检测

Ø FITkit® for Latex Allergens胶乳过敏原检测FIT试剂盒

三、Purified Allergens 纯化的过敏原

 INDOOR有超过50种的天然或重组的过敏原来满足您的研究需要。过敏原通过亲和层析或者和HPLC的方法纯化,他们的活性通过检测单克隆抗体结合和IgE抗体结合(重组IgE ELISA)来确定。

应用

T细胞功能和抗原递呈的体外研究

IgE反应&哮喘的动物模型

天然免疫

抗体检测,组胺释放实验

结构学研究和生物实验

厌倦处理内毒素?请使用LoToxTM纯化的过敏原
Tired of dealing with endotoxin?  Use LoTox™ – Purified Allergens

我们向可能存在内毒素干扰细胞反应任何实验研究者推荐LoToxTM产品。LoToxTM过敏原的内毒素水平都很低(<0.03EU/µg蛋白),是应用于T细胞,APC和树突状细胞人类和鼠类细胞研究的理想产品。

产品列表:

Ø LoTox™ Purified Allergens LoToxTM纯化过敏原(15个产品 )

Ø Purified Natural Allergens 纯化的天然过敏原(24个产品)

Ø Purified Recombinant Allergens 纯化的重组过敏原(28个产品)

Ø cDNA Products cDNA产品

INDOOR Allergopharma Joachim Ganzer KG (Hamburg, Germany)的许可证协议,是*可以销售研究用过敏原cDNA的公司。

在该许可下,INDOOR可以销售以下cDNA’s:

灰尘螨:Der p 1, Der f 1, Der p 2, Der f 2, Der p 3, Der p 7, Der f 7
: Fel d 1

: Can f 1, Can f 2

草花粉: Phl p 1, Phl p 5, Lol p 1, Lol p 5, Cyn d 1, Sor h 1

杂草花粉: Amb a 1

过敏原cDNA可应要求提供,目前可以提供的上面已用粗体字表示。其他我们生产的重组抗原cDNA请咨询。

四、Antibodies 抗体

公司有为检测房屋灰尘螨,狗,猫,蟑螂,和真菌过敏原的单克隆抗体,覆盖范围广泛。

产品列表:

Ø Monoclonal Antibodies 单克隆抗体

Ø Mouse/Human Chimeric Antibodies/人的嵌合抗体

Mouse anti-Der p 2/human IgE (2B12-IgE)

鼠类抗Der p 1单抗的轻链与一个VH结构域与人IgE的重链可变(VH)结构域在杂交瘤细胞中共表达,收集细胞培养液上清。

Mouse anti-Der p 2/human IgG1 (2B12-IgG1)

在双氯金霉素反应器中生产。通过IgG亲和层析纯化。

Mouse anti-Der p 2/human IgG4 (2B12-IgG4)

在双氯金霉素反应器中生产。通过IgG亲和层析纯化。

Ø Biotinylated Monoclonal Antibodies生物素标记的单克隆抗体

Ø Polyclonal Antibodies多克隆抗体

五、Allergen Standards 过敏原标准品

定义明确的过敏原对于免疫实验的校准是很关键的。Indoor生产的通用过敏原标准品(UAS)包含8个纯化的过敏原,是按照欧洲联合CREATE项目原则要求制造的。UAS的过敏原通过氨基酸分析确认,并且标准品对ELISAMARIA均适用。

用于其他ELISA试剂盒的过敏原标准品在室内生产并经过校准,有可能与国家或参考制剂有不同之处。

Indoor的过敏原标准品只推荐用于免疫分析校准,作为对ELISAMARIATM试剂盒的补充。这些标准品不推荐用于体外抗体检测,T细胞研究,免疫接种或其他用途。请看LoToxTM产品和其他纯化的过敏原的综合应用信息。

产品列表:

Ø Universal Allergen Standard 通用过敏原标准品

Ø House Dust Mite 房屋灰尘螨

Ø Cockroach 蟑螂

Ø Mold霉菌

六、Rapid Test and Dust Collection 快速检测和集尘器

Indoor研发了集尘器和取出设备,使检测成为一个简单,便利的过程。我们的产品DUSTREAMTM集尘器为我们的环境检测和Indoor®过敏原检测服务提供了*的样品。

DUSTREAMTM是一个我们检测灰尘螨的Ventia™快速过敏原检测整体组分,消费者用快速检测试剂盒可以在家中用10分钟完成灰尘螨的检测。VentiaTM有大包装,可作为室内空气质量,工业卫生,职业卫生等行业专业人士的IAQ-PAK

 

产品列表:

Ø Ventia™ Rapid Allergen Test VentiaTM过敏原快速检测

Ø DUSTREAM™ Collector 灰尘收集器

Ø Mitest Collector 螨收集器

FAQ

过敏原:

Q1 过敏原应该怎样保存?

A 过敏原应该在-20℃冷冻保存。

Q2  过敏原是怎样纯化的?

A 不同的过敏原纯化的步骤是不同的。我们通过亲和层析,离子交换,疏水性相互作用,用疏水性相互作用联合尺寸排除色谱法纯化天然的,重组的及LoToXTM过敏原。

Q3: 提供的抗原是在什么缓冲体系中?

A天然和重组的抗原是在无防腐剂和无载体的磷酸盐缓冲液中的,pH 7.4,无菌。 LoTox™抗原是在有防腐剂,无载体,无内对手,无菌的磷酸盐缓冲液中的,pH 7.4.

Q4 LoTox™ 过敏原是什么?

A LoTox™过敏原内毒素水平很低,低于0.03 EU/µg 蛋白,是用T细胞,APC细胞,树突状细胞做人类和鼠细胞研究的理想过敏原。

 Q5 我的T细胞研究为什么要用 LoTox™ 产品?

A LoTox™ 产品是理想的是因为它几乎不含内毒素并且可以避免有内毒素引起的T细胞反应。

Q6 为什么要用纯化的过敏原,而不是过敏原提取物?

A 过敏原提取物是非均质的,包含非过敏原的蛋白和其他大分子。研究者经常用提取物是因为他们需要高T细胞应答,但这些信号的判读是不可靠的。应答的特异性不能被确认,很有可能这个应答是由非过敏原蛋白引起的,如IgEIgG抗体应答,组胺释放实验和动物模型。我们强烈推荐在内毒素可能干扰细胞应答的任何细胞研究中使用LoTox™ 产品。

Q7我应该如何选择天然或重组过敏原?

 A 重组过敏原与其天然的过敏原结构非常近似,与IgE抗体结合的实验结果也非常近似。毕赤酵母表达的重组蛋白组成糖分过多可能会干扰与IgE的结合。我们提供的重组过敏原LoTox™ Fel d 1 (LTR-FD1D), rBla g 2 (RP-BG2) rDer p1 (RP-DP1D)是去糖基化的产品。 

Q8 我如何激活Der p 1的半胱氨酸蛋白酶活性?

 A Der p 1 5 mM半胱氨酸或1mM二硫苏糖醇激活而再生巯基,使其在纯化中氧化。(Gough et al. Journal of Experimental Medicine, 1999).

 

Q9 我应用何种底物来检测 Der p 1的半胱氨酸蛋白酶活性?

A DTT依赖的半胱氨酸蛋白酶活性可以在荧光实验中通过荧光肽底物Boc-QAR-MCA来检测。

Q10我需要激活 Der p 丝氨酸蛋白酶活性吗?

 A 不需要,Der p丝氨酸蛋白酶(NA-DPSP)不需要被激活。 

Q11 我应该用哪种底物来测试Der p丝氨酸蛋白酶的活性?

 A DTT依赖的丝氨酸蛋白酶活性可以在荧光实验中通过荧光肽底物Boc-QGR-MCA来检测。

MARIA™

 Q1 MARIA™ 试剂盒是冷冻保存还是在室温下保存?

 A 都不是,试剂盒和所有的试剂都应保存在4℃冰箱中,这是很关键的。冷冻会破坏试剂。N

Q2 MARIA™ kit的有效期是多久?

 A 假如保存得当的话,试剂盒在收到后的6个月内都说是有保障的。

Q3在实验前有没有必要将样品离心?

A 是的,MARIA™ 是基于微粒的实验,所以将样品中异质的颗粒减少到zui小是很重要的。

Q4 你们推荐的样品稀释比例是多少?

 A 推荐的样品稀释比例取决于您样品的类型及您研究所需达到的灵敏度。对于房屋灰尘提取物来说,我们推荐将样品以 1/10, 1/100 1/10,000稀释,这将使您达到较低的检测限0.1-0.9ng/ml(相当于0.002-0.012µg/g灰尘)

如果您不需要这么高的灵敏度,只需将样本用1/10010,000稀释,灵敏度水平就为1-6ng/ml (灰尘0.02-0.12µg/g)。这样您每块板子可以检测35个样品。

 空气过滤器提取物中的过敏原浓度要更低些,分析这类样本,我们通常不稀释,或以1/101/50稀释。

Q5 我应该如何进行系列梯度稀释?

 A1对于系列稀释1/10, 1/100 1/10,000:

 

每个样品准备三个微量离心管,管11/10稀释,将10µL样品加入到90µL实验缓冲液中,管2中加入90µL实验缓冲液,再加入管11/10稀释)中的10µL液体,涡旋振荡混匀。管3中加入990µL实验缓冲液,再加入管21/100稀释)中的10µL液体,涡旋振荡混匀。50µL of each prepared dilution are used in the MARIA™ 实验中每种稀释比例用50µL

A2 对于系列稀释1/101/50:

 每个样品准备两个微量离心管:1中加入90µL实验缓冲液,再加10µL 未稀释样品,涡旋振荡混匀。管2中加入80µL实验缓冲液及20µL1中稀释过的样品,涡旋振荡混匀。

Q6实验缓冲液必须要灭菌吗?

 A 是的!Yes! 未灭菌的实验缓冲液有较高的颗粒负荷,这会干扰xMAP系统的检测。它会导致高微粒聚集比率,读板时间可能会增加3-4倍。

Q7 ELISA洗板机可以用于MARIA™ 实验吗?

A 不可以。翻转板子或重新板中的孔会洗掉微球。所有的洗脱步骤都需要通过多头抽真空装置来过滤,试剂盒中有提供滤板。

Q8 在孵育过程中我需要摇动板子吗?

 A 不需要。在每步孵育前,微粒和事件要通过剧烈吹打使微粒和试剂充分混匀。不需要在孵育过程中晃动。

Q9 在暗室孵育的重要性是什么?我可以将板子放在工作台上吗?

A 所有的孵育必须在暗室中进行,否则微球会丧失其可被荧光辨别的标记。

Q10在孵育过程中我需要用铝箔纸封住板子吗?

 A 我们通常用配套的盖住封住板子,孵育时将其放在空的抽屉中。

Q11 我要用什么仪器读板?

 A 试剂盒只能与Luminex公司基于激光的荧光分析检测仪相配对:Luminex® 100, Luminex 200 和其他来自Luminex公司仪器或的经销商包括Bio-Rad 实验室(赫拉克勒斯, CA )Qiagen 公司 (巴伦比亚, CA) and MiraiBio (南旧金山, CA))Luminex仪器。我们使用Bio-Plex 仪器及其Bio-Plex管理软件(Bio-Rad, Hercules, CA).

 Q12 检测每个分析需要使用多少微粒?

A我们推荐每个分析物用100个微粒以求的重复性。

Q13 我应选择怎样的拟合曲线?

 A我们使用5个参数的logistic (5PL)曲线拟合。(该拟合曲线可以很容易的在Bio-Plex 管理软件中找到)

 Q14我应该怎样决定标准曲线中可用的部分?

 A1 如果曲线底端的荧光强度(FI)接近空白对照的FI,则不要使用在空白对照的FI加减3个空白对照标准差之内的FI

A2 我们通常不使用在曲线顶部平直部分内FI的数据。这意味着我们通常排除Der p 1, Der f 1, Der p 2, Fel d 1, Can f 1, Rat n 1 Mus m 1测得曲线顶部的2-3个点。Bla g 2 曲线的顶部是可用,然而底部的3-4个点就太接近空白对照数据了(看上)。

A3一些软件包,如Bio-Plex Manager® (Bio-Rad, Hercules, CA) 会在输出的Excel文档中自动显示期望值与实测标准值。我们使用这个功能作为额外的质量控制和*使用值,并且实测值和期望值的比率在15%之内。

A4 变异率(CV%)应在两个标准差之间没有超过15%。如果不是这样,您的移液器和移液过程的准确性需要被检测。

Q15用不同的样品稀释倍数我得到了不同的结果,我应该怎样选择正确的结果?

 A 从不同的样品稀释倍数获得不同的结果,这是取决于您样品中过敏原的浓度。有很多标准供您选择正确的结果。

只选择落入可用MFI范围的结果。如果多于一倍的稀释倍数得到相似的结果:取平均结果。除去Der f 1 外的所有分析物:如果稀释倍数增高而结果升高:选择基于zui高稀释倍数,含有很少Der f 1的样品与特定的灰尘提取物中底物出现低水平的干扰,并通过高稀释倍数的计算而增大。如果您观察到这样的结果如1/10= 7ng/ml, 1/100=74ng/ml, 1/10,000=4500ng/ml,那么就会出现上面所说的效应。在这种情况下,使用1/10稀释得到的结果,除非这个结果达到~100ng/ml ,若是这个点,则您可以信赖更高稀释倍数所得到的结果。这种异常现象在我们所检测样本中的比率<5%,并且只出现在Der f 1低水平的样本中。

 Q16 我可以获得 MARIA™ 技术的培训吗?
A可以的,我们在美国维吉尼亚州夏洛特维尔的公司中安排了一年两次的培训课程,请查询我们的以获得更多的信息。我们同样提供基于一年的循环MARIA™客户培训

ELISA

 

Q1 Der p 1 ELISA 试剂盒 EL-DP1和EL-DP1A的区别是什么?

 A INDOOR 推出的两个检测Der p 1 ELISA试剂盒,实验中与之结合的单抗是不同的。

EL-DP1:捕获单抗为5H8 ,生物素标记的单抗为4C1

EL-DP1A: 捕获单抗为10B9,生物素标记的单抗为5H8

 zui广泛使用的ELISA试剂盒为EL-DP1 (5H8/4C1)生物素4C1单抗在Der f 1 ELISA (EL-DF1)试剂盒中也有使用. EL-DP1推荐用于大多数常规灰尘和空气样本检测Der p 1。然而在EL-DP1实验中一定程度上存在与Der f 1的交叉反应,约为2% (参见 Luczynska et al, J Immunol Meth, 1989)。在常规分析中,这种水平的交叉反应不显著。

EL-DP1A试剂盒与Der f1的交叉反应<0.1% ,可应用于区分Der p 1 Der f 1。举例来说,过敏原生产商用于确定他们灰尘螨培养的样本没有交叉污染。EL-DP1A分析与EL-DP1试剂盒的敏感性水平相同(1-2ng/ml)

 Q2我们注意到实验显影非常慢(并且从未打到过 OD 2.0). 这有问题吗?

A 您的结果明显存在问题。控制曲线在zui高浓度的读值应在OD 2.0-2.4 ,敏感度应下至1-4ng/ml。如果您所有的实验,OD值都没有达到2.0 ,那么您实验的底物和显色方面可能存在问题。

A 在储存中所有生物素化的试剂是不是一直处于冷冻状态?这会减小这些单抗的敏感性

A 您是否混用了试剂或使用缓冲液片剂?我们发现一些缓冲液片剂不如新鲜制备的溶液有用。所有溶液通常在4℃保存不超过1个月,并不使用硫柳汞。

A 是否有试剂使用过*作为防腐?这会阻止显色,因为*是过氧化物酶的抑制剂。

 A 在为ABTS配置溶液B时,使用的磷酸钠形式是否正确?磷酸钠必须是二元的,即Na2HPO4·7H2

A ABST溶液中是否加了足量的过氧化氢?每毫升ABST溶液中要加入1µl 30% H2O2

A链霉菌抗生物素蛋白素过氧化物酶是否被正确稀释了?

A柠檬酸盐缓冲液的pH值是否正确? ABTS溶液的pH值应为4.2,并在调节前就应靠近这个pH。如果偏离较远,溶液A或溶液B或他们的组成就可能是错的。

A 洗板机污染有时可能会妨碍显色,导致显色非常缓慢,或达不到OD 2.0.洗板机应当定期清洁。

A直接通过窗户外的日光曝光会导致上述问题,孵育时让板子远离窗户。

Q3 我们实验的背景值很高,这是什么原因引起的?

 

A 通常当二抗是兔的多克隆抗体时,实验的背景较高。背景值通常在0.15OD左右。其他引起高背景的原因可能是:

A过氧化物酶标记的羊抗兔IgG抗体的来源问题。我们使用的为Biosource InternationalJackson实验室产品。这两个抗体的实验背景都非常低,BioSource: 1- (货号 # ALI4404) Jackson实验室为: 1- (货号 # 111-036-045)

A ABST底物在4°C能保持多久? 在冰箱中通常一个月内可以保持稳定。如果保存更长的时间试剂可能会变绿,并且出现高背景。ABST溶液在实验中应该差不多是无色的。其他溶液也应如此。所有溶液在4°C保存时间通常不超过1个月,并不含硫柳汞。

A 在加入过敏原溶液之前用1%BSA/PBS-T封闭板子30分钟。

A在某些情况下,出现高背景或在系列稀释时,zui初的几个样本稀释得太低或检测不到,却出现随机样本检测值高,可能是由于洗板机的污染。洗板机应当定期清洗预防一些随即孔污染和堵塞。

A 如果手动洗板,实验时增加清洗的次数会有助于降低背景。将各孔*填满不要溢出,然后小心的将板倾倒不要污染。然后在纸巾上温和的轻敲以去除剩余缓冲液。

Q4 我们重复的标准曲线和/或样品测试结果有很高的CV值,这是什么原因?

A 加入ABST后,读数确认显色值之前,要自始至终时常通过轻打板子两侧来温和摇晃。

A在进行ELISA实验室洗液是非常重要的。确认移液器特别是多孔道的在整块板倍比稀释时每个孔吸取和排出的量都一样。并且确认在移液时没有气泡。

Q5 我们可以保存微孔中包被的抗体吗?他们能被保存多久,我们应该怎样保存?

 A包被过的板子只能保存很短的一段时间,如一个周末,或长至1周。我们通常将用抗体溶液包被的板子用塑料薄膜抱住放入实验室冰箱中或冷室中。我们未尝试过更长的保存时间。

Q6 我们可以用OPD货TMB来代替ABST吗,按照Sigma的要求(放在干燥器中,含氩)保存ABST有些困难。

A 您可以用OPDTMB。我们不将ABST保存在氩中(这个不是很必要),同样得到了好的结果。

Q7 灰尘样本应该保存在 4°C吗,或是要冷冻?

 A 实验前我们通常将房屋灰尘样本保存在4°C,但一定提取过后应保存在-20°C

Q8在ELISA中我如何终止酶反应?

 A终止反应可以在每个孔内加入0.1ml 0.002M *。大部分ELISA读板机扫描板子的时间在5-20秒内,若未终止反应,OD值应达到。如果有大量的板子(5-10个板子)需要处理,或因其他原因如拍照需要保存时,可以加入叠氮化合物。

Q9 ELISA孵育的温度是多少?

 A用捕获抗体包被ELISA板的温度为4°C一晚.其他所有步骤都在室温下进行,通常为20-25°C

 Q10 一个ELISA试剂盒可以分析多少灰尘或空气样本?你们推荐分享多少?

A IndoorELISA试剂盒对10份或20份的96孔板来说包含足够的试剂(捕获mAb, 生物素化的检测mAb,的过敏原标准品),每块板子可以分析的样品数量取决于每个样本的稀释数量  

重复的标准曲线需要4个对照孔(PBS-T),占用24个孔,每个板剩余的72个孔检测样本。一般每个灰尘样本我们倍比稀释4个(螨过敏原1/10, 1/20, 1/40, 1/80),这意味着每块板可以检测18个样本。在这样的条件下一个20块板的ELISA试剂盒可以分析18 x 20 = 360个样本。

每个样本我们稀释四种,这样在大多数情况下,在一个单一实验中我们可以达到就>90%的检测结果。四个稀释度会增加每个样本控制曲线线性部分至少有两个点的可能性。,果样本已知过敏原水平范围,也可以用较少的稀释梯度。其他样本,如过敏原提取物,可能含有非常高的过敏原水平,那么在倍比稀释时,需要增加稀释的倍数,从1/100 1/1000开始,并可能需要在整个ELISA板上作梯度稀释。

空气样本通常过敏原水平较低,实验时可以以1/2, 1/4, 1/8, 1/16来稀释。

Q补充为什么没有单独检测Der p 2ELISA试剂盒呢?

A由于Der p 2Der f 2为相同抗原表位,所以使用的检测抗体无法区分这两种物质。我们有试剂盒EL-D2就是检测Der p 2Der f 2过敏原的

 

Environmental Testing

 Q1我想给Indoor邮寄一些样本做过敏原分析,你们需要多少量?

A 分析大量灰尘样本的过敏原水平,我们需要100mg的灰尘。我们近期的研究发现由于差异的可能性增加,除非至少有10mg的灰尘样品可用否则不能做过敏原分析。少于10mg可用灰尘不能做分析,会被邮寄退回(NES-不足量样本)

“Variability introduced into allergen immunoassays during the dust extraction process” 

如果用DUSTREAM™ 并在推荐的地区和时间采样也只有很少或没有灰尘,那么持续采样直到滤器达到1/4满。我们的过敏原结果不是基于地区的,而是基于每克灰尘中有多少微克过敏原。

 A对于过敏原提取物,或大量灰尘、空气过滤器中的的过敏原提取物,我们需要zui少0.5ml,特别是当要检测多个过敏原时。

A 对于空气采样录音带,整个过滤器要用1mlPBS提取溶液来提取,每个过滤器的结果据报道为ngµg 级。

 Q2我想给Indoor邮寄一些样本做内毒素分析,你们需要多少量

 A分析大量灰尘样本的内毒素水平,我们需要100mg的灰尘。如果少于20mg灰尘是无法做大量灰尘的分析的。如果用DUSTREAM™ 并在推荐的地区和时间采样也只有很少或没有灰尘,那么持续采样直到滤器达到1/4满。我们的内毒素结果不是基于地区的,而是基于每克灰尘中的内毒素单位。

A 我们收取的样本是要为提取过的,这点非常重要。提取的过程必须在一个干净的环境中进行,并且要用含0.05%吐温不含内毒素的水。样本的提取和分析应在同一天进行。这些步骤对于防止其他来源的内毒素污染非常重要。

A 空气过滤器样品也可邮来做内毒素分析。整个过滤器在1ml无内毒素含0.05%吐温的水中提取。结果报告形式为每个过滤器中含有多少内毒素单位。我们推荐同时邮寄一个空的过滤器检测作为使用后过滤器的基准。

Q3我在我的实验室中准备要分析的灰尘样本,我需要过滤这些灰尘吗?

A 是否过滤灰尘是由该灰尘的质量决定的。我们通常不过滤从床上和柔软的家具上收集的灰尘。地毯样本过滤(如用No.45,直径355um的筛子过滤)来分离纤维和灰尘中的大颗粒。我们推荐用DUSTREAM™收集器,可以大大减少过滤灰尘的需要。用DUSTREAM™收集器收集灰尘样本后,拆下含有灰尘样本的尼龙滤器,倒置滤器,轻拍,是灰尘落入一张称过重的纸上,灰尘会比纤维先从过滤器中出来。

Q4 灰尘样本和其提取物应该怎样保存?

A灰尘样本提取前应在室温下,保存在干燥的地方。灰尘提取物应在-20℃冰箱中冷冻保存。

Q5INDOOR分析服务的采样和委托程序是怎样的?

A 请看Collecting Dust SamplesSubmitting Samples.

A Download Analysis Request Form 

Q6你推荐用什么方法准备过敏原分析的灰尘提取物 ?

 A请看Sample Extraction Procedure.

 A用于内毒素实验的提取物需要在Indoor分析服务实验室中进行,同天进行分析,以防内毒素污染等多重风险。这项服务不应邮寄提取物,只要干的样本如大量灰尘和空气过滤器。

 
我们公司zui大优势是强大的采购,
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klentaq聚合酶常见问题解答​

 

klentaq聚合酶常见问题解答

 

问:Klentaq 和全长 Taq 有什么区别?

答:Klentaq 是 Taq 的截短版本,缺少酶的 5′>3′-外切核酸酶结构域。Klentaq 提高了保真度,并且比 Taq 更耐热、更坚固。Omni Klentaq 与 Klentaq 的保真度没有受到影响。Cesium Klentaq 的保真度略高于 Klentaq。其余突变酶的保真度尚未*确定。

与*级商业 Taq 相比,我们的突变酶的敏感性不会因牺牲其特殊的抑制抗性或冷敏感性特征而受到损害,并且允许从人类 DNA 中检测单基因拷贝。对于高产量扩增,Klentaq 酶通常需要比 Taq 更长的延伸时间,我们建议每个 1 kb DNA 靶标延伸 3-4 分钟。

 

 

问:你们的 LA 酶版本有什么优势?

答:“LA”代表“长而准确”。LA 酶与校对器混合,并以更好的保真度执行。此外,它们是长 DNA 靶标的优选酶,它们的表现异常出色。此外,它们通常更稳健,因此短目标扩增也可以从中受益。

*关于长靶点的提示:对于纯化的 DNA 模板,考虑酶浓度至少为 0.1 ul/1 kb 靶点/50-100 ul 反应体积,并允许每 1 kb 靶点有 3-4 分钟的延伸时间。对于粗制样品,可能需要更多的酶,具体取决于抑制水平(强烈建议使用酶滴定法)。考虑包括我们的 PEC 增强剂。

问:你们的抗抑制 Taq 酶和特殊 PCR 增强剂有哪些实际优势?

答:我们的新型酶是 Taq DNA 聚合酶的突变体,经过特别挑选,因为它们对广泛使用的强效 PCR 抑制剂具有高度抗性,例如全血、血清、血浆、尿液、腐殖酸、胆汁盐、植物组织提取物、各种食品相关抑制剂、GITC、乙醇等。因此,这些酶可以在大多数商业 Taq 产品无法执行的水平上耐受 PCR 中的此类抑制剂。Taq 突变体的这一*功能允许对各种临床、环境和法医原始样品进行直接 PCR,从而跳过 DNA 提取步骤。我们的 PCR 增强剂鸡尾酒 (PEC) 专为大多数抑制性粗制 PCR 样品配制,可进一步提高反应对抑制剂的耐受性。此外,我们的一些 PEC 旨在帮助处理困难的、富含 GC 的目标。

问:哪种酶和/或增强剂适合我的 PCR?

答:我们*的突变 Taq 酶选择,对各种强效 PCR 抑制剂具有耐受性,连同我们的 PCR 增强剂,可实现各种直接 PCR 应用,在许多情况下跳过 PCR 之前的 DNA 提取。酶/增强剂的选择取决于抑制物质的类型和浓度、qPCR 检测的类型、热启动 PCR 依赖性、模板的 GC 含量和其他因素。请参阅表格“哪种酶适合我”和“哪种增强剂适合我”。

问:Taq 突变酶是否适用于实时荧光定量 PCR?

答:我们所有的酶都非常适合嵌入染料,例如 SYBR Green。实际上,它们对 SYBR Green 的抗性比野生型 Taq 高 2-3 倍(这种染料在 1X 以上浓度时对普通 Taq 的 PCR 有抑制作用),这使它们在 qPCR 中具有一定的优势,特别是在一些荧光淬灭的反应中.

对于 TaqMan 检测,我们只推荐我们的全长 Taq 突变体(OmniTaq 系列或 CesiumTaq),但不推荐 Klentaq 突变体,因为它们缺乏切割 TaqMan 探针所需的 5′>3′- 核酸外切酶活性。

提示:对于复杂/抑制性 qPCR 样品,全长 Taq 和 Klentaq 酶的 1:1 混合物可能比单独使用全长酶效果更好。(Klentaqs 通常更坚固,半量的全长 Taq 酶足以用于探针切割)。如果你想试试这个,两个缓冲区也应该以相同的比例混合。

注意:我们的酶的 LA 版本不是适合 TaqMan 检测的,因为它们具有校对器活性。

问:我想直接从液体血液或血液 FTA 卡中扩增 DNA 靶标,无需提取 DNA,我应该选择什么产品,我需要修改我的循环条件吗?

答:我们建议您选择 Omni Klentaq、Omni Klentaq 2、OmniTaq 或 OmniTaq 3,必要时与 PEC 结合使用。我们强烈建议对此类粗样品进行酶滴定,因为更多的酶有助于更多的血液。请记住,血液样本的最佳酶量可能远远超过纯化 DNA 样本的最佳酶量,过量的酶可能导致过度扩增。通常推荐使用纯化 DNA 的酶量减少 5-10 倍。如果更高量的酶(至少 1 ul/25 ul 反应)不能令人满意,您可以加入 PEC 增强剂以进一步增强血液抵抗力。我们不建议您将 PEC 用于您的纯化 DNA,除非目标是富含 GC 且坚韧的。 

您也可以使用我们用这些酶配制的 5X PCR 试剂盒(提供方便,但限制了滴定酶的选择)。

根据循环条件,我们建议您使用针对目标优化的 PCR 方案进行两个更改: A. 在 94-95 度下引入更长的初始加热步骤,即 8-10 分钟。在骑自行车之前,以及 B. 延长时间的两倍或三倍。请注意:如果您使用 PEC 增强剂,请记住它可能会将您的最佳退火温度降低几度。

注意:在为您的应用选择合适的酶后,同样的注意事项也适用于其他抑制性粗样品。

问:除了常规 PCR 或终点 PCR,我还可以使用抗抑制 Taq 突变体对全血进行 qPCR 吗?

答:是的,在协议中进行了一些简单的更改。我们的新型酶在 PCR 中可以抵抗高达 40% 的血液。因此,在血液的 qPCR 中,扩增应该没问题(如果你想在琼脂糖凝胶中运行它们,你应该看到预期的产品)。然而,qPCR 中扩增产物的光学检测的并发症源于血红素的荧光猝灭效应。如果您使用 SYBR Green,解决此问题的方法是简单地将输入染料浓度提高到 20-30 X(对于 5-10% 的血液),甚至更高,具体取决于血液浓度。这将补偿淬灭效应,并减少背景。

如果您使用 TaqMan 检测,同样由于血液的淬灭作用,我们建议将荧光探针浓度提高到 400-500 nM,并且不超过 4-5% 的血液。

注意:如果您扩增血清、血浆或其他非淬灭粗样品,则无需更改这些方案。

Q:DNA纯化后PCR结果为阴性,是什么原因,如何解决?

答:有些 DNA 提取试剂盒不能*去除起始材料中的 PCR 抑制剂,例如血液或植物组织成分或腐植酸,甚至会引入一些抑制剂,例如微量的苯酚、氯仿、硫氰酸胍或乙醇。在仔细滴定酶后,可以通过使用我们的 Taq 抑制剂抗性突变体来消除这个问题。(与粗制 PCR 样品相比,这对我们的酶来说应该是一项相对“容易”的工作,并且您必须确保您不会过量使用酶)。

问:你们的冷敏感 Taq 突变体和其他热启动酶有什么区别?

答:我们的冷敏感酶,例如 Cesium Taq、Cesium Klentaq AC 和 Cesium Klentaq C,在低温下表现出抑制的活性,而在 65 度以上时它们变得*活跃,因此在 PCR 中具有内在的热启动性能。与涉及抗 Taq 抗体或酶化学修饰的热启动 Taq 配方不同,它们不需要对循环条件进行任何更改。

问:为什么酶以体积/反应形式提供,而不是单位浓度?

答:一些 Taq 制造商提供的酶单位浓度是由传统 DNA 聚合酶活性测定法的略微修改版本确定的,该测定法是早期为非热稳定性 DNA 聚合酶开发的。该测定基于相对简单和“容易”的反应,仅测量核苷酸在 72 度下掺入带切口的 DNA 中,不考虑 PCR 条件下重要的酶质量,例如热稳定性和持续合成能力。因此,它本身不是 PCR 检测,并且不提供实际的“PCR 单位”。因此,它可能无法显示和预测 PCR 中真正的酶性能。因此,我们与其他制造商一样,相信为每个反应提供推荐的酶量对于最终用户来说更加可靠和实用。

 

Wayne Barnes 耐热酶的常见问题解答表

[实际上,这张表只有答案,没有问题。]

Klentaq1 是 Taq DNA 聚合酶的 Klenow 片段类似物。它是已知的最热稳定的 Taq 形式,它没有任何外切核酸酶或内切核酸酶,并且其晶体结构是已知的 [4]。

LA PCR 是长而准确的 PCR [1]。

根据美国 5,436,149,后缀 LA 表示已混入少量校对酶。

KlentaqLA (KTLA) 或 TaqLA 或 TthLA 是高温下进行长 DNA 延伸的最佳酶,例如引物定向诱变、长 PCR 或高保真 PCR,或用 PCR 产物引发(大引物)。(这些“酶”实际上是混合物,美国 5,436,149,由 Wayne Barnes 发明,现在由日本 Takara BIO, Inc. 所有)。

– 观看此空间以了解我在保真度方面的改进。

– TaqLA 由 Boehringer-Mannheim 出售为“Expand”,Takara Shuzo 出售为“ExTaq for LA PCR”,Life Technologies 出售为“Elongase”。

– Perkin Elmer 以“Tth XL”出售 TthLA,Clontech 以“Advantage Tth”出售 – Stratagene 的“TaqPlus”和“Taq Extender”也申请了美国 5,436,149。

“LA 技术”是将两种耐热酶混合在一起以获得更长、更准确(更高保真度)的 DNA 延伸的概念,通常用于 PCR。由 Wayne M. Barnes、美国 5,436,149 和国外同行发明。该现在归 Takara Shuzo 所有

以下两种推荐的缓冲液都假定您添加的 dNTP 和它们自己的(等摩尔)镁。如果您要添加 250 uM 每个 dNTP,请添加额外的 1 mM 镁(最终 3.5 mM)以实现此目的。
我们通过储备 10 mM 每个 dNTP、40 mM MgCl2(“10/40”)来做到这一点。然后,以下缓冲液将在 1X 时提供最佳的“过量”镁。[您可能更愿意在下面添加额外的 10 mM MgCl2,然后添加不含 Mg

的 dNTP。] Tris-HCl 原液由 Trizma Base 和 HCl 制成,浓度为 1 M Tris。然而,在室温下以 50 mM 在其他普通水中读取 pH 值。

* Klentaq1、KlentaqLA 和 Taquenase 的 10xKLA 为

* 500 mM Tris-HCl pH 9.2;160 mM 硫酸铵;25 毫米氯化镁;1% 吐温 20。

* Taq 和 TaqLA 的 10xTLA 相同,但只有 7.5 mM MgCl2。

* 包括用于高 GC 目标和多重 PCR 的最终 1.3 M 甜菜碱。还将加热步骤减少到 92-93 度。C. [从参考修改。2 & 5]

我们的“基准强度”Klentaq1、KTLA 和 TAQUENASE 相当于 wt Taq 的活性,如果它们用于 2 kb 的扩增。也就是说,0.1 ul 正好适合 50 ul 的反应大小。(野生型)Taq 的其他供应商将此称为 5 单位/ul;我们称其为“5 个 2kb-PCR 单元”/ul。更长的目标需要更多的 Klentaq1,最大为 0.65 ul/50 ul(目标大小为 35 kb;需要 KTLA 而不是 Klentaq1)。对于小于 2 kb 的目标,需要更少的 Klentaq1(但 0.1 ul 仍然可以)。

对于 2 kb 以下的 PCR 目标,如果延伸温度降低到 60 度,则需要 1/2 的酶(TaqLA 或 KlentaqLA)。并且延伸时间有所增加(即从 5′ 到 8′ 或 10’)。

Klentaq1 适用于短 PCR、RAPD 等。对于循环测序,它非常出色,但与 Taquenase 相比,它现在是旧技术。

KlentaqLA 是否在其 PCR 产物上留下钝端?部分是,部分不是。Klentaq1 确实添加了额外的 A。然而,要有效地做到这一点,需要一个额外的最后延长时间(20-30 分钟)。混合物中的校对
酶预计会去除这个额外的 A。哪一个获胜可能取决于您的 PCR 反应在完成
循环后得到的确切处理。可能性是
:4度过夜。
湾。25度吃午饭。
C。68度的咖啡。
d。上述任何一项,然后在 25 度时打个电话。
e. 上述以外。
– 我是否完成了上述实验条件,然后检查了
DNA 的末端?否。
– 我是否将我的产品克隆到平端载体中?是的,在 T4 DNA 聚合酶的钝端连接过程中使用 1 mM 六氨合氯化钴和 1 mM DTT。
– 我检查过整个克隆位点的阅读框吗?不是通过测序。
– 我是否曾经将 KlentaqLA 制造的阅读框关键 PCR 产物克隆到 ORF 的钝端?是的,根据编码产物的酶活性,大约一半的克隆似乎没有问题。
– 我用过 T 向量吗?不。

我们有数据表明 Taquenase 是循环测序的最佳酶。它必须与 MnSO4(除了 MgCl2)一起使用以获得最佳结果(Barnes,未发表)。不幸的是,由于和许可问题(见下文),您无法使用它。

1.25 M 甜菜碱(Sigma 编号 B-2629)也是一个不错的主意,可包含在循环测序反应中 [Barnes,未发表]

“Taquenase”(tm)是两种Taq突变体的组合。突变体 1 是 N 端缺失 Klentaq1(美国 5,436,149 和其他国家正在申请中。突变体 2 是由 Stan Tabor [3] 发现的 F667Y。F667Y 突变允许 ddNTP 减少 100 到 1000 倍才能正常工作。截至 3 月 25 日, 1997 年,这种突变被授予 Tabor & Richardson 并给 Amersham 的美国 5,614,365 涵盖。因此,除非我们获得 Amersham 的许可,否则我们无法提供这种酶,这是意料之中的。

我们认为没有涉及循环测序的(由 M. Craxton, MRC Cambridge, England 发明),也不是双脱氧测序(由 Fred Sanger, MRC Cambridge, England 发明)

。ddNTP 的意思是“双脱氧 NTPs”或“双脱氧终止子”。

NTP是指三磷酸核苷,聚合酶的组成部分。它们可以是 ATP、GTP、CTP 或 UTP==TTP。对于 RNA,有时为了清楚起见会添加前缀 r,例如 rCTP。对于 DNA,通常会添加前缀 d,例如 dATP。

双脱氧是指没有 OH 基团的两个位置(2′ 和 3′ 位置)。

Perkin Elmer 最近将其荧光 ddNTP 的价格(通过降低浓度)提高了 1000 倍。

DYE-ddNTP 的意思是“DYE 终止剂”或 DYE-双脱氧终止剂,它会变得很拗口。它们由 ABI 销售,但它们最初是由 Dupont 发明的,可从其子公司 NEN 获得,或即将推出。

DYE 是指荧光标记,由测序仪上的激光束激活。

Klentaq1 是已知的稳定的 Taq DNA 聚合酶形式,在 98 或 99 度的加热步骤中通过 PCR 测试。Taquenase 保持这种热稳定性。由于 Thermo Sequenase 是含有 7 个额外氨基酸的 Taquenase,我们相信它也具有这种更高的热稳定性。

 

ethosbiosciences白蛋白ELISA试剂盒常见问题解答

 

ethosbiosciences白蛋白ELISA试剂盒常见问题解答

 

优化用于微量白蛋白尿测量的白蛋白ELISA试剂盒

 

Hu Albuwell(人类白蛋白ELISA)$ 590.00

Albuwell M(小鼠白蛋白ELISA)$ 590.00

Albuwell O(绵羊白蛋白ELISA)$ 690.00

Nephrat II(大鼠白蛋白ELISA)$ 590.00

通过基于ELISA的微量白蛋白尿测量,从人,小鼠,绵羊和大鼠样品中有效评估肾脏功能。

仅供研究使用

作为我们Exocell ELISA产品组合的一部分,每个微量白蛋白ELISA试剂盒都可以对微量白蛋白尿进行可靠的定量检测和监测,微量白蛋白尿的定义是尿液中白蛋白的浓度,这是常规试纸法无法检测到的。这些测定具有高度特异性,易于使用,并有助于监测初期肾病的发展。 

 

为什么选择Albuwell和Nephrat II ELISA?

与旨在测量血浆或血清中高得多的白蛋白浓度的其他ELISA试剂盒不同,Albuwell和Nephrat II ELISA经过优化,可高度准确地测量肾病或肾脏损伤期间尿液中低得多的白蛋白浓度。 。随附的试剂可立即使用或需要小的稀释度,这限制了可变性的引入。图1展示了在生成标准曲线时Albuwell M分析的稳健性,其中平均变异系数(CV)仅4.166%(n = 8)。

 

1. Albuwell M具有出色的重现性,n = 8,误差线(橙色)显示平均值的标准误差。在其各自的产品页面上查看其他测定的数据。

Albuwell和Nephrat II ELISA速览 

 

技术细节

Albuwell H,M,O和Nephrat II ELISA被设置为竞争性ELISA分析。人类,小鼠,绵羊和大鼠的试剂盒在大多数简化的工作流程中使用直接检测,而绵羊试剂盒则使用兔抗绵羊白蛋白作为一抗进行间接检测。通过缀合的辣根过氧化物酶(HRP)和在450 nm处吸收的比色底物完成检测。  

ELISA常见问题解答

什么是竞争性ELISA?

顾名思义,在竞争性ELISA中,样品中的分析物含量是通过竞争性反应确定的,其中增加的分析物含量会导致信号降低。运作方式如下:

在竞争性ELISA中,在平板的孔上预涂一定量的纯化分析物,这些分析物仍固定在孔中。在没有样品的情况下,添加检测抗体会产生大信号。但是,当添加样品时,存在的任何分析物都会与固定的分析物竞争与检测抗体的结合,从而导致清洗后残留在孔中的抗体减少,因此在分析物存在时信号减少。

为什么要使用竞争性ELISA?

竞争性ELISA可提供高度定量的结果,但由于它们几乎不需要样品处理就可以相对快速地完成。由于检测是通过竞争性反应进行的,因此将低亲和力,脱靶结合的影响小化,从而可以使用相当粗略的样品,并使测定对样品稀释和样品基质效应的敏感性降低。竞争性ELISA的重现性也更高,在重复实验之间以及每次测定之间的变异性都较低,它们具有与小型抗原,具有很少表位的抗原以及未纯化或多克隆抗体一起使用的灵活性。

什么是直接检测还是间接检测?

直接检测与间接检测是指如何将HRP引入测定中。通过直接检测,HRP直接与识别分析物的抗体缀合。这是两种方法中更简单快捷的方法,因为只需要一种抗体。通过间接检测,一抗识别被分析物,然后与HRP偶联的二抗识别一抗。添加第二抗体会增加洗涤步骤,增加测定工作流程中涉及的时间和劳动,并增加可能引入变异性的步骤。