常见免疫组化难题集锦(下)


11、如何才能充分脱蜡?

 (1)蜡不溶于水,如果脱蜡不干净,少许蜡存留于切片上,将会引起染色不均匀、阳性物时隐时现、真假难辨、背景染色增加等。为了解决上述的问题,切片在染色前必须*脱蜡,目前用于脱蜡的试剂主要是二甲苯,因它脱蜡力强,脱蜡时间较短;
(2)脱蜡的时间要根据季节,室温和试剂的新鲜谋面是在不同。如果在夏天,室温较高,脱蜡试剂也新鲜,则脱蜡时间不需很多,3-5分钟就已足够。如果在冬天,室温较低,脱蜡试剂也较陈旧,则脱蜡时间需要延长,10-20分钟或更长。
(3)当天切的切片,烧烤2小时后进行染色,切片带有温度进行脱蜡这将可加速脱蜡的过程,如果预先切好烤好的切片,在染色前,还必须对切片进行加温10-20分钟,然后再行脱蜡,这样脱蜡速度加快,效果魁伟更好。总之,操作时应根据不同的季节,不同的室温,不同的试剂来决定,脱蜡的时间,原则上是要*、干净、*地脱去切片上的蜡。

12、如何zui大限度地降低组织非特异性染色?

(1)缩短一抗/二抗孵育时间、稀释抗体来控制。这是zui重要的一条。
(2)一抗用多克隆抗体易出现非特异性着色,建议试用单克隆抗体看看。
(3)内源性过氧化物酶和生物素在肝脏、肾脏等组织含量很高(含血细胞多的组织),需要通过延长灭活时间和增加灭活剂浓度来降低背景染色;
(4)非特异性组分与抗体结合,这需要通过延长二抗来源的动物免疫血清封闭时间和适当增加浓度来加强封闭效果;
(5)缩短DAB孵育时间或降低DAB浓度/过氧化氢浓度等;
(6)适当增加PBS冲洗次数和浸洗时间,在一抗、二抗或SP孵育之后的浸洗尤为重要;
(7)防止标本染色过程中出现干片,这容易增强非特异性着色。

13、苏木素复染时间的把握?

(1)苏木素复染时间要看当时的室温、溶液的新旧、目标抗原的定位等情况,一般数秒-数分钟。不过这个如果染色不理想可以补救的。即:染色深则分化时间稍长些即可;染色浅则再置于苏木素中染色即可。
(2)盐酸酒精是分化,氨水是返兰。作用不同。片子复染完后流水振洗,然后置于盐酸酒精中数秒(一定动作要快)后拿出流水振洗,在放入氨水中返兰即可。
(3)如果分化的颜色过浅,可以复置于苏木素中染色。

14、PBS的清洗方式选择、次数和时间的选择?

(1)单独冲洗,防止交叉反应造成污染。 临床上每天检测的病例很多,所用的抗体种类及项目也多,如果在加入一抗孵育完后,将它们在一个缸内洗,这样就会造成交叉污染,影响zui后的结果。正确的做法是单独地进行冲洗,冲洗的PBS为一次性,保证切片没有相互交叉污染的机会。
(2)温柔冲洗,防止切片的脱落。冲洗切片,取出切片,将PBS从上轻轻地冲洗,让PBS自上而下流下来,不要拿起切片将PBS对准切片冲洗,这样由于冲出的PBS有一定的冲击力,很容易使切片周边引起松动,导致切片的脱落。
(3)冲洗的时间要足够,才能*洗去结合的物质。冲洗切片有人提出用微振荡器振染,振下未结合的各种物,使之不产生背景,此种做法一是浪费时间,二是很容易导致切片的脱落。切片的冲洗据实践认为,用一小烧杯柔和地于切片上冲洗,就能*冲洗去未结合的物质,无需附加其它条件,冲洗好于切片上再注入PBS,持续2分钟左右就*足够了。
(4)PBS的PH和离子强度的使用和要求。刘彦仿指出:中性及弱硷性条件(PH7-8)有利于免疫复合物的形成,而酸性条件则有利于分解;低离子强度有利于免疫复合物的形成,而高离子强度则有利于分解。[]免疫组化P56我们目前常用的PBS的PH在7.4-7.6浓度是0.01M,根据本室十几年来的使用情况,认为该溶液价格便宜配制方面,使用效果好。
(5)常用试剂的配制和使用。在免疫组织化学的染色过程中,用得zui多的试剂就是缓冲液,因为切片在整个染色中,抗体的加、换、切片的冲洗,DAB的配制都离不开缓冲液。可见缓冲液在整个染色中都起至关键的作用,缓冲液的过酸或偏碱,都将影响染色的结果。

15、脱片产生的原因和如何防止脱片?

 (1)多聚赖氨酸玻片质量的问题。我原先是买的,迈新按说也是不错的,可是都脱成什么样子了。后面补做第二批时用的病理科老师自己做的片子,要好一点。
(2)组织切的不好,切片机的问题例如比较老的旧的机器切的厚或者不均匀,或者切片者手法不好等。
(3)组织的问题,我用的组织癌症的很多,越是癌症组织有坏死之类越容易脱。
(4)没烤好,时间短温度不够之类。
(5)操作的时候甩的太猛了,有脱片嫌疑的片子不甩或轻轻甩,用卫生纸从边缘上慢慢吸水。
(6)修复的问题:抗原修复的时候高压时间过长了,或者放进100度的修复液时手法不好,咚的一声就丢进去了,这样超容易脱片。此外,用EDTA修复比柠檬酸容易脱片,但是你要用到EDTA的时候也没办法,只有从另外的问题上着手。
(7)此外,一旦见到有组织漂起来操作就更加要谨慎,用PBS的时候尽量用泡的,不要冲。基本上把这些方面都注意到了,能改善的尽量改善,脱片可以减少很多。

16、背景染色较深的原因有哪些?

 (1)抗体浓度过高:一抗浓度过高是常见的原因之一。解决办法是,每次使用新抗体前应当对其工作浓度进行测试,使每一抗体个体化,找到适合自己实验室的理想工作浓度,既使是即用型的抗体也应如此,不能只简单的按说明书进行染色。
(2)抗体孵育时间过长或温度较高:解决办法是,严格执行操作规程,随身佩带报时表或报时钟,及时提醒,避免因遗忘而造成时间延长。现在流行的二步法(Polymer)敏感性很高,要求一抗孵育的时间不是传统的1小时,而是30分钟,因此,要根据染色结果进行调整。
(3)DAB变质和显色时间太长:DAB现用现配,如有沉渣应进行过滤后再用。配制好的DAB不应存放时间太长,因为在没有酶的情况下,过氧化氢也会游离出氧原子与DAB产生反应而降低DAB的效力,未用完的DAB存放在冰箱里几天后再用这种似乎节约的办法是不可取的。DAB的显色在显微镜下监控,达到理想的染色程度时立即终止反应。不过当染色片太多时或用染色机时,这样做似乎不现实,但至少应对一些新的或少用的抗体显色时进行监控,避免显色时间过长。
(4)组织变干:修复液溢出后未及时补充液体、染色切片太多、动作太慢、忘记滴液、滴液流失等都是造成组织变干的原因。解决的办法是操作要认真仔细,采用DAKO笔或PAP Pen在组织周围画圈,可以有效的避免液体流失,也能提高操作速度。
(5)切片在缓冲液或修复液中浸泡时间太长(大于24小时):原因上不清楚,但现象存在。有的实验室喜欢前一天将切片脱蜡至修复,第二天加抗体进行免疫组化染色,如果将装有切片和修复液的容器放在4ºC冰箱过夜,对结果无明显影响,如果放在室温,特别是炎热的夏天,会出现背景着色,因此,不可存放时间太长。
(6)一抗变质、质量差的多克隆抗体:注意抗体的有效期,过期的抗体要麽不显色要麽背景着色。用新买抗体时设立阳性对照和用使用过的抗体作比较。

17、苏木素复染后氨水返蓝这一步如何做、浓度多少、时间多长? 

答:返蓝可以用碱性溶液(PBS/Na2HPO4/淡氨水)或45度温水、冷水蓝化均可。一般蓝化5~10 min。淡氨水有人用50ml自来水+三四滴的氢氧化铵。

常见免疫组化难题集锦(上)

400-655-1678

1、石蜡切片和冰冻切片的比较?
(1)要求做冰冻切片的不一定能做石蜡切片。因为作石蜡切片时要高温烤片,可能会破坏组织的抗原性,如果组织的抗原性较稳定,则可作石蜡切片;但是要求做石蜡切片的,可作冰冻切片。
(2)冰冻切片的优点是能够较好的保存组织的抗原免疫活性,做免疫组化时不需抗原修复这一步。缺点是细胞内易形成冰晶而破坏细胞结构,可能会使抗原弥散;切片厚度较石蜡的厚,做的片子没石蜡的漂亮。当你买一抗时,目录上都写着做什么样的切片,如果它写着只能做冰冻,就不能做石蜡,如写着两者都可,那就都能做。
(3)石蜡切片的优点可以保持组织细胞的形态结构,且容易存放在室温,而冰冻切片比较麻烦,一定要存在-80度的低温冰箱中,尤其是用来做原位杂交的的切片,为了防止RNA降解,保存一贯很重要。由于石蜡切片可以切到4微米左右,所以原位杂交探针容易渗透到组织中去,容易成功,而且得到的颜色/形态都较冰冻切片好。

2、一抗的选择要点和技巧是什么?
(1)单克隆和多克隆抗体的选择。由一种克隆产生的特异性抗体叫做单克隆抗体。单克隆抗体能目标明确地与单一的特异抗原决定簇结合,就像导弹地命中目标一样。另一方面,即使是同一个抗原决定簇,在机体内也可以由好几种克隆来产生抗体,形成好几种单克隆抗体混杂物,称为多克隆抗体。在抗原抗体反应中,一般单克隆抗体特异性强,但亲和力相对小,检测抗原灵敏度相对就低;而多克隆抗体特异性稍弱,但抗体的亲和力强,灵敏度高,但易出现非特异性染色(可以通过封闭等避免)。
(2)应用范围的选择。有的一抗只能用于Western blotting,或免疫组化、免疫荧光、免疫沉淀等;甚至表明石蜡切片或冰冻切片。
(3)种属反应性的选择(species reactivity)。这一点很重要,表明这种抗体可能存在种属差异,且这种抗体适合检测哪种种属动物体内的抗原。
(4)种属来源,一般兔来源的多是多克隆;而小鼠来源的多是单克隆,但也有另外。根据此来源来选择相应的二抗。

3、在什么情况下使用TritonX-100?
(1)Triton X-100化学名称为聚乙二醇辛基苯基醚,是一种去污剂。在免疫组织化学(>10um厚切片) 和免疫细胞化学中一般用Triton X-100 作为细胞通透剂,在膜上打孔。
(2)其作用原理:Triton X-100 可以溶解细胞膜、细胞核膜、细胞器膜上的脂质而使抗体及大分子结构的物质进入胞浆和胞核内,故在细胞免疫组化时尤为推荐使用,这样抗体就能顺利进入胞内与相应抗原结合。
(3)Triton X-100既是一种表面活性剂,也有抗氧化作用,具体参阅:
http://www.dxy.cn/bbs/post/view?bid=68&id=12301317&sty=1

4、封闭血清的选择原则是什么?
(1)膜上或切片上有剩余的位点可以非特异性吸附抗体,造成后续结果的假阳性!
(2)封闭血清一般是和二抗同一来源的,血清中动物自身的抗体,预先能和组织中有交叉反应的位点发生结合,否则在后面的步骤中如果和二抗发生结合,会造成背景。
(3)也可以用小牛血清、BSA、羊血清等,但不能与一抗来源一致。
5、抗体孵育条件的比较?
(1)一抗孵育温度有几种:4度、室温、37度,其中4度效果*;孵育时间:这与温度、抗体浓度有关,一般37度1-2h,而4度过夜和从冰箱拿出后37度复温45min。
(2)二抗一般室温或37度30min-1h,具体时间需要摸索。

6、一抗4度孵育后为什么要进行37度复温?
一种说法是防止切片从4度直接放入PBS易脱片;另外一种观点是使抗原抗体结合更稳定。一般不需要,但对表达较弱的抗原可能有用,4度和37度时分子运动方式不同,前者分子碰撞机率和运动速度小于后者,后者结合更快,但敏感性也提高了并易造成非特异染色。我更赞同后一种说法,因为我尝试把肝脏或睾丸片子从4度过夜拿出后,直接用PBS洗没发生过脱片现象。

7、DAB显色时间如何把握?
(1)DAB显色时间不是固定的,主要由显微镜下控制显色时间,到出现浅棕色本底时即可冲洗;
(2)DAB显色时间很短(如几秒或几十秒)就出现很深的棕褐色,这很可能说明你的抗体浓度过高或抗体孵育时间过长,需要下调抗体浓度或缩短你的抗体孵育时间;
(3)此外,若很短时间就出现背景很深,还有可能你前面的封闭非特异性蛋白不全,需要延长封闭时间;
(4)DAB显色时间很长(如超过十几分钟)才出现阳性染色,一方面可能说明你的抗体浓度过低或孵育时间过短(一抗4度过夜);另一方面就是封闭时间过长。

8、免疫组化结果如何分析?
(1)阳性着色细胞计数法。在40*光镜下,随机选择不重叠的10个视野,人工或机器计数阳性着色细胞,每组3~6张不同动物组织切片,然后进行组间比较即可。
(2)灰密度分析法。通过在不同组别和不同动物组织切片上选择相同区域、相同条件下用image j进行灰密度分析,然后进行统计分析即可。
(3)评分法。通过在光学显微镜下对组织切片分别按染色程度(0~3分为阴性着色、淡黄色、浅褐色、深褐色)、阳性范围进行评分(1~4分为0~25%、26~50%、51~75%、76~100%),zui终可以分数相加,再进行比较。对于以上这几种方法,各有利弊,请细心选择。要想得到正确结果的前提是你要做出着色均匀、背景很浅的高质量切片。

9、在什么情况下进行组织抗原修复,抗原修复的条件是什么?
(1)由于组织中部分抗原在甲醛或多聚甲醛固定过程中,发生了蛋白之间交联及醛基的封闭作用,从而失去抗原性。通过抗原修复,使得细胞内抗原决定族重新暴露,提高抗原检测率。
(2)修复方法从强到弱一般分为三种,高压修复、微波修复、胰酶修复。修复液也分为若干种(具体的可以查阅相关资料,大量的:中性的、高pH的等)。
(3)微波修复,我们一般用6min*4次,效果不错。

10、内源性过氧化物酶的灭活时间和浓度是什么?
(1)一般3%过氧化氢灭活时间短点,可以10min左右;而0.3%过氧化氢则可以适当延长封闭时间,一般10~30min。
(2)用甲醇配置过氧化氢比双蒸水或PBS可能好在保护抗原和固定组织作用,过氧化氢孵育时间过长易引起脱片.
(3)现用现配,配好后4度避光保存。

apexbt常见问题解答

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1. 我应该如何溶解产品以制备原液?
大多数小分子化合物不能直接用水、PBS或盐水溶解,但可溶于DMSO或乙醇等有机溶剂。为了获得更高的溶解度,将试管加热至 37°C 并在超声波浴中进行超声处理。溶解度与温度有关。冷却或冷冻可能会导致沉淀,因此在使用前将溶液*重新溶解。

2. 我应该如何稀释和储存原液?
储备溶液可以用水性介质进一步稀释,用于体外和体内测定。尽管有机溶剂残留部分(例如 0.1% DMSO)不应该影响大多数测定,但运行溶剂控制以防万一。
原液可在-20℃以下保存数月。小分子化合物的活性不应受到多次冻融循环的影响。

3. 如何溶解冻干肽并储存溶液?
在适当的缓冲液中重构肽,如果需要,简单地进行超声处理。建议将肽溶液等分并储存在 -20°C。
如果肽呈酸性(净电荷为负)或中性(净电荷为零),将肽溶解在少量 0.1 M 碳酸氢铵中并用水稀释至所需浓度。
如果肽是碱性的(净电荷为正),将肽溶解在少量 25% 的乙酸中并用水稀释至所需浓度。
如果肽是疏水的(不带电荷的),将肽溶解在有机溶剂中,例如 CAN、DMSO 和 DMF。
小心避免在含有 Trp、Met 或 Cys 的肽中发生氧化。可以使用无氧水或还原剂。

4. 为什么我的产品在指示的储存温度为+4°C或-20°C时到达室温?
如果产品在室温下交付,则意味着它们在运输和正确处理过程中是稳定的。一般情况下,冷藏或冷冻保存是为了长期保存,粉末状的产品在-20°C下最多可以保存2年。

5. 评价样品的数量是多少?
我们提供 1 mg 的评估样品。

6. 产品纯度和质量如何确定?
我们非常注重产品的质量。典型的产品纯度>98%。所有产品均按照严格的指导方针制造,并附有分析证书、HPLC、质谱和 HMNR 数据,可在产品网页上找到。

7. 不同批次的产品看起来总是一样的吗?
有时,不同批次的产品在颜色和外观上可能会略有不同。但不会影响产品的纯度、质量或性能。

8. 产品应该如何使用?
我们所有的产品仅供实验室研究使用。它们不应用于制药、农业、化妆品、食品、家庭或任何其他人类用途。
如果有抑制剂的 Ki 或 IC50 值的公布数据可用,建议使用比这些值高 5-10 倍的抑制剂,以最大限度地发挥抑制作用。
生物数据、背景信息和参考资料都列在我们的产品网页上以供您参考,但它们并不总是新的或*全面的。因此,我们建议您在开始实验之前也进行自己的文献研究。

9. 为什么我的产品在小瓶中几乎看不到?
有时,少量产品很容易附着在小瓶壁上,因此小瓶看起来几乎是空的。使用涡旋或超声处理确保产品*溶解在正确的溶剂中。

10. 处理蜡质或吸湿性物质。
蜡状和粘性物质很难精确称量。因此,我们建议您将此类产品直接溶解在正确的溶剂中。
吸湿性物质往往会从环境中吸收水分,从而变成浸泡或液体形式。您可以通过存放在干燥器中来保护此类产品。


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novamatrix常见问题解答

 

 

 

novamatrix常见问题解答

我还能订购超纯壳聚糖盐(PROTASAN)吗?
否。该产品停产。NovaMatrix提供多种藻酸盐和透明质酸。

您的交货条件是什么?
我们的交货条件为挪威FCA Sandvika(2010年国际贸易术语解释通则)。发票中将包含75美元的快递费用。付款条件为净发票日期(30天)。请注意,不包括关税和增值税。订单交货时间大约是10天加上发货时间。(产品将由联邦快递直接交付,联邦快递将处理进口手续并向客户收取任何进口成本或费用。)

根据FCA国际贸易术语解释通则是什么意思?
“免费承运人”是指卖方在将货物移交给承运人负责时履行了交货义务。卖方负责原点的出口包装和装货,但买方负责内陆运费和港口收货费。这意味着买方必须为进口货物执行所有海关手续。自承运人提起货物之日起,买方承担货物灭失或损坏的一切风险。除非另有说明,否则产品将由联邦快递直接交付,联邦快递将处理进口手续并向客户收取任何进口成本或费用。

我的产品卡在海关中,在哪里可以找到航空提单号,TSA声明等?
在发货时,所有用于海关的必要文件都会发送到下订单时提供的电子邮件中。请搜索您的电子邮件,并按照给定的说明进行操作。

我可以将产品出售给其他人吗?
否。我们的许多产品都用于实际的医疗设备和应用中,我们需要确保遵守杜邦医疗政策。我们的风险管理政策要求NovaMatrix仅将我们的产品出售给最终用户(公司/大学/部门等),并且只有在最终用户接受了我们的条款和条件(也定义了我们对产品的使用)之后,才可将其出售;在现阶段还没有人类。

如何储存海藻酸钠?
在2-8°C的密闭容器中

为什么没有在2-8°C下运输产品?
建议在收到客户后,将标有2-8°C的PRONOVA UP海藻酸盐冷藏。这是NovaMatrix对于内部存储的建议。但是,根据稳定性研究,在环境温度下最长运输3个月被认为是安全的。

随着时间的流逝,产品会发生什么变化?
粘度和分子量是稳定性极限参数,它们受温度影响。M / G比,生物负荷,元素,内毒素和蛋白质随时间和温度稳定。

暴露于更高温度下的藻酸盐会怎样?
在温度> 20°C时,藻酸盐溶液的表观粘度将低于CoA中所述的表观粘度。不建议对藻酸钠溶液进行高压灭菌,因为高温会严重降解聚合物链,从而降低分子量和粘度。

PRONOVA UP研究等级和GMP等级材料之间有什么区别?
我们按照GMP等级出售的产品是根据GMP要求生产,测试和存储的。研究级产品已超过GMP允许的最长5年保质期,但仍适用于研究目的。它们带有最新的CoA。

在哪里可以找到批次特定的分析结果?
所有产品装运均包括特定批次的CoA或分析报告。

如何溶解海藻酸钠粉末?
通过将藻酸盐逐渐添加到水/缓冲液等中来溶解粉末状藻酸盐,并使其充分混合。考虑到藻酸盐凝胶将在二价阳离子(如Ca 2 +,Ba 2+或Sr 2+)存在时立即形成,并且藻酸钠在低pH值下会以藻酸的形式沉淀。

如何将冻干的海藻酸钠悬浮在小瓶中?(例如PRONOVA SL和NOVATACH)
通过在室温下轻轻摇动约1小时或过夜(冷藏),将藻酸盐溶解在水,培养基,缓冲液或同分异构体溶液中。高粘度溶液需要更长的时间并且需要进行更剧烈的混合才能*溶解。

我的藻酸盐不能溶解,该怎么办?
允许更长的时间进行搅拌/混合或稍微提高温度可能有助于溶解您的产品。请记住,高粘度溶液需要更长的时间才能*溶解。关于粘度和浓度的经验法则是,浓度加倍会导致粘度增加十倍。

我将藻酸盐用于细胞,您建议使用哪种缓冲液?
为了重悬,我们建议使用通常用于特定应用程序/细胞类型的WFI /缓冲液/细胞培养基。但是,当您计划利用藻酸盐的胶凝特性时,应将磷酸盐和其他非胶凝离子(如钠)的含量保持在水平。这些类型的介质可能会削弱离子胶凝的藻酸盐。应考虑到二价阳离子的存在,因为藻酸钠在二价阳离子如钙的存在下形成离子交联的凝胶网络。

如何将细胞掺入藻酸盐中?
有几种将细胞掺入藻酸盐凝胶中的技术。
首先制作藻酸盐储备溶液。在藻酸盐储备溶液中重悬所需数量的细胞,或用培养基将藻酸盐储备溶液稀释至所需藻酸盐浓度,并用所需数量的细胞重悬细胞沉淀。对于藻酸盐珠;浓度为1,5-2%的藻酸盐通常在50 mM CaCl 2中凝胶化。由于藻酸盐溶液是粘性的,因此建议您针对特定细胞类型同时优化细胞密度和藻酸盐浓度。

如何从钙藻酸盐凝胶中收获细胞?
当涉及细胞收获时,我们建议将凝胶转移至等渗的脱胶溶液/螯合剂(建议使用50 mM柠檬酸三钠二水合物和104 mM氯化钠)并在37°C下孵育。在除胶期间,轻轻搅动或转动试管几次。最后离心以沉淀细胞,除去上清液,然后将细胞重悬于培养基中。

富含M和富含G的藻酸盐有什么区别?
海藻酸盐由两种单体组成。β-D-甘露糖醛酸(M)和α-L-古洛糖醛酸(G)。富含G的藻酸盐比富含M的藻酸盐具有更高的与二价阳离子的结合活性,从而促进了凝胶的形成。通常,具有低MW的凝胶网络比具有较高MW的凝胶网络降解得更快,并且富含M的凝胶网络比富含G的凝胶网络降解得更快。富含M的凝胶网络中的溶胀率通常也较高,形成的结构比富含G的凝胶网络更柔软。我们富含M的藻酸盐的规格为M> 50%,富含G的藻酸盐G> 60%

我购买的产品的G / M比率是多少?
与产品一起运输的CoA中提供了古洛糖醛酸或甘露糖醛酸含量。

PRONOVA UP的分子量是多少?
分子量不是所有产品的标准规格。请参见表中基于表观粘度的估算值。

 

NOVATACH的肽偶联率是多少?
请参阅产品后的分析报告或CoA。

对于NOVATACH,该肽是否与藻酸盐共价结合?
是的

Indoor Bio产品中常见问题解答

INDOOR Biotechnologies Inc公司是一家专业开发生产用于研究哮喘以及其他过敏性疾病的免疫诊断和相关生物学检测产品的生物技术公司,IB由两家子公司组成,一家是位于美国弗吉尼亚的INDOOR Biotechnologies Inc. (IBI),另一家为位于英国INDOOR Biotechnologies Limited (IBL)。IB的创始人Martin D. Chapman博士曾经是美国弗吉尼亚大学的医学和微生物教授,并曾经担任过美国NIH、环保署已及多家生物公司的顾问科学家。做为环境过敏原(变应原)检测系统的领导公司,IB生产的一系列过敏原研究和检测用抗体拥有来自美国弗吉尼亚大学的*,能够用于检测屋尘螨、猫、狗、蟑螂和真菌来源过敏原。 IB开发生产面向实验室用户的过敏原Elisa检测试剂盒以及面向家庭用户的过敏原快速检测试剂盒,利用后者用户在家中即可于10分钟之内检测出屋尘螨抗原。这些检测系统可用于对过敏原环境暴露水平的评估,也能让用户对使用的过敏原隔离清除程序、相关产品和设备的有效性进行可靠的评估,还可应用于过敏原标准化以及相关产品的研究开发 上海金畔生物作为其中国代理长期为中国科研客户带来产品,以下是INDOOR Biotechnologies Inc产品一些问题的解答

一、MARIATM 试剂盒

Indoor Biotechnologies研发出一种针对Indoor过敏原(MARIATM)的多重芯片,可以在一次检测中同时测试8个zui重要的Indoor过敏原。芯片同时检测Der p 1, Der f 1, Mite Group 2, Fel d 1, Can f 1, Rat n 1, Mus m 1 Bla g 2MARIATM可以提升高通量系统的实验分析能力(灵敏度,度和精密度增加),并可以节省时间和成本。

MARIATM技术与Radix BiosolutionsLuminex Corporation合作研发,并受到小企业创新研究所(SBIR)从国家环境健康科学研究(NIEHS)所得到的合同支持。结合了Indoor对过敏原特异的单抗生物技术产权与LuminexxMAP技术的力量,表现了过敏原检测的工艺水平。

MARIATM的性能与实验室内部的重复性已经在多通道研究,包括来自美国和欧洲的9个实验室中被证实了。研究对比了32,000个过敏原的检查结果,表明MARIA在不同实验室的重复性都很好。近期的Indoor的数据发表在EAACI 2010上,在一个ISO17025依从的分析实验室检测结果表明MARIA的结果具有可重复性,

具体产品:

Premixed 5-plex Multiplex Array for Indoor Allergens (MRA-P5)

描述:

这个试剂盒可以分析Der p 1,Der f 1, Der p 2, Fel d 1Can f 1。这是一个多通量分析试剂盒,由INDOOR Biotechnologies生产。可以同时定量测定5个常见的Indoor过敏原:房屋灰尘螨Der p1(屋尘螨),Der f 1(粉尘螨),和螨2型及动物过敏原Fel d 1(猫,猫属)和Can f 1(狗,狗属)

这个试剂盒可以用于分析环境样品中的上述indoor过敏原,如房屋灰尘螨,或空气过滤器样本和其他生物学或环境学样本。

remixed 5-plex Multiplex Array for Indoor Allergens (MRA-P5B)

描述:

这个试剂盒可以用于分析Der p 1Der f 1Fel d 1Can f 1 Bla g 2。这是一个多通量分析试剂盒,由INDOOR Biotechnologies生产。可以同时定量测定5个常见的Indoor过敏原:房屋灰尘螨Der p1(屋尘螨),Der f 1(粉尘螨),及动物过敏原Fel d 1(猫,猫属),Can f 1(狗,狗属)和Bla g 2德国小蠊

这个试剂盒可以用于分析环境样品中的上述indoor过敏原,如房屋灰尘螨,或空气过滤器样本和其他生物学或环境学样本。

 

Premixed 8-plex Multiplex Array for Indoor Allergens (MRA-P8)

描述:

这个试剂盒可以用于分析Der p 1,Der f 1, Der p 2, Fel d 1, Can f 1, Bla g 2, Rat n 1 Mus m 1

这是一个多通量分析试剂盒,由INDOOR Biotechnologies生产。可以同时定量测定8个常见的Indoor过敏原:房屋灰尘螨Der p1(屋尘螨),Der f 1(粉尘螨),和螨2型及动物过敏原Fel d 1(猫,猫属),Can f 1(狗,狗属),Mus m 1 (小鼠), Rat n 1 (大鼠)和德国蟑螂,Bla g 2 (德国小蠊)

这个试剂盒可以用于分析环境样品中的上述indoor过敏原,如房屋灰尘螨,或空气过滤器样本和其他生物学或环境学样本。

 

二、ELISA试剂盒

Indoor生产定量检测ELISA试剂盒范围广泛,包裹来源于灰尘满,猫,狗,小鼠,大鼠,德国蟑螂,花粉和霉的过敏原,并且在超过200篇的科学论著中都有提到这些试剂盒。

每个试剂盒包含:

单克隆捕获抗体

校准过的过敏原标准品

校准过的生物素化的第二单抗(或兔来源的多克隆抗体)

10份(ELISA-10)或20份(ELISA-2096孔板分析的足量试剂

完整的实验操作步骤和参考资料

应用:

在环境和生物样品中检测过敏原水平

家庭过敏原检测和监测,避免一些繁琐的操作

过敏原操作规程和设备控制的售前检测

过敏原标准化

过敏原产品,诊断和疫苗的组份

产品列表:

Ø House Dust Mite房屋灰尘螨

Ø 检测Animal动物过敏原 检测

Ø Cockroach蟑螂过敏原 检测

Ø Mold霉菌过敏原 检测

Ø Pollen花粉过敏原 检测

Ø FITkit® for Latex Allergens胶乳过敏原检测FIT试剂盒

三、Purified Allergens 纯化的过敏原

 INDOOR有超过50种的天然或重组的过敏原来满足您的研究需要。过敏原通过亲和层析或者和HPLC的方法纯化,他们的活性通过检测单克隆抗体结合和IgE抗体结合(重组IgE ELISA)来确定。

应用

T细胞功能和抗原递呈的体外研究

IgE反应&哮喘的动物模型

天然免疫

抗体检测,组胺释放实验

结构学研究和生物实验

厌倦处理内毒素?请使用LoToxTM纯化的过敏原
Tired of dealing with endotoxin?  Use LoTox™ – Purified Allergens

我们向可能存在内毒素干扰细胞反应任何实验研究者推荐LoToxTM产品。LoToxTM过敏原的内毒素水平都很低(<0.03EU/µg蛋白),是应用于T细胞,APC和树突状细胞人类和鼠类细胞研究的理想产品。

产品列表:

Ø LoTox™ Purified Allergens LoToxTM纯化过敏原(15个产品 )

Ø Purified Natural Allergens 纯化的天然过敏原(24个产品)

Ø Purified Recombinant Allergens 纯化的重组过敏原(28个产品)

Ø cDNA Products cDNA产品

INDOOR Allergopharma Joachim Ganzer KG (Hamburg, Germany)的许可证协议,是*可以销售研究用过敏原cDNA的公司。

在该许可下,INDOOR可以销售以下cDNA’s:

灰尘螨:Der p 1, Der f 1, Der p 2, Der f 2, Der p 3, Der p 7, Der f 7
: Fel d 1

: Can f 1, Can f 2

草花粉: Phl p 1, Phl p 5, Lol p 1, Lol p 5, Cyn d 1, Sor h 1

杂草花粉: Amb a 1

过敏原cDNA可应要求提供,目前可以提供的上面已用粗体字表示。其他我们生产的重组抗原cDNA请咨询。

四、Antibodies 抗体

公司有为检测房屋灰尘螨,狗,猫,蟑螂,和真菌过敏原的单克隆抗体,覆盖范围广泛。

产品列表:

Ø Monoclonal Antibodies 单克隆抗体

Ø Mouse/Human Chimeric Antibodies/人的嵌合抗体

Mouse anti-Der p 2/human IgE (2B12-IgE)

鼠类抗Der p 1单抗的轻链与一个VH结构域与人IgE的重链可变(VH)结构域在杂交瘤细胞中共表达,收集细胞培养液上清。

Mouse anti-Der p 2/human IgG1 (2B12-IgG1)

在双氯金霉素反应器中生产。通过IgG亲和层析纯化。

Mouse anti-Der p 2/human IgG4 (2B12-IgG4)

在双氯金霉素反应器中生产。通过IgG亲和层析纯化。

Ø Biotinylated Monoclonal Antibodies生物素标记的单克隆抗体

Ø Polyclonal Antibodies多克隆抗体

五、Allergen Standards 过敏原标准品

定义明确的过敏原对于免疫实验的校准是很关键的。Indoor生产的通用过敏原标准品(UAS)包含8个纯化的过敏原,是按照欧洲联合CREATE项目原则要求制造的。UAS的过敏原通过氨基酸分析确认,并且标准品对ELISAMARIA均适用。

用于其他ELISA试剂盒的过敏原标准品在室内生产并经过校准,有可能与国家或参考制剂有不同之处。

Indoor的过敏原标准品只推荐用于免疫分析校准,作为对ELISAMARIATM试剂盒的补充。这些标准品不推荐用于体外抗体检测,T细胞研究,免疫接种或其他用途。请看LoToxTM产品和其他纯化的过敏原的综合应用信息。

产品列表:

Ø Universal Allergen Standard 通用过敏原标准品

Ø House Dust Mite 房屋灰尘螨

Ø Cockroach 蟑螂

Ø Mold霉菌

六、Rapid Test and Dust Collection 快速检测和集尘器

Indoor研发了集尘器和取出设备,使检测成为一个简单,便利的过程。我们的产品DUSTREAMTM集尘器为我们的环境检测和Indoor®过敏原检测服务提供了*的样品。

DUSTREAMTM是一个我们检测灰尘螨的Ventia™快速过敏原检测整体组分,消费者用快速检测试剂盒可以在家中用10分钟完成灰尘螨的检测。VentiaTM有大包装,可作为室内空气质量,工业卫生,职业卫生等行业专业人士的IAQ-PAK

 

产品列表:

Ø Ventia™ Rapid Allergen Test VentiaTM过敏原快速检测

Ø DUSTREAM™ Collector 灰尘收集器

Ø Mitest Collector 螨收集器

FAQ

过敏原:

Q1 过敏原应该怎样保存?

A 过敏原应该在-20℃冷冻保存。

Q2  过敏原是怎样纯化的?

A 不同的过敏原纯化的步骤是不同的。我们通过亲和层析,离子交换,疏水性相互作用,用疏水性相互作用联合尺寸排除色谱法纯化天然的,重组的及LoToXTM过敏原。

Q3: 提供的抗原是在什么缓冲体系中?

A天然和重组的抗原是在无防腐剂和无载体的磷酸盐缓冲液中的,pH 7.4,无菌。 LoTox™抗原是在有防腐剂,无载体,无内对手,无菌的磷酸盐缓冲液中的,pH 7.4.

Q4 LoTox™ 过敏原是什么?

A LoTox™过敏原内毒素水平很低,低于0.03 EU/µg 蛋白,是用T细胞,APC细胞,树突状细胞做人类和鼠细胞研究的理想过敏原。

 Q5 我的T细胞研究为什么要用 LoTox™ 产品?

A LoTox™ 产品是理想的是因为它几乎不含内毒素并且可以避免有内毒素引起的T细胞反应。

Q6 为什么要用纯化的过敏原,而不是过敏原提取物?

A 过敏原提取物是非均质的,包含非过敏原的蛋白和其他大分子。研究者经常用提取物是因为他们需要高T细胞应答,但这些信号的判读是不可靠的。应答的特异性不能被确认,很有可能这个应答是由非过敏原蛋白引起的,如IgEIgG抗体应答,组胺释放实验和动物模型。我们强烈推荐在内毒素可能干扰细胞应答的任何细胞研究中使用LoTox™ 产品。

Q7我应该如何选择天然或重组过敏原?

 A 重组过敏原与其天然的过敏原结构非常近似,与IgE抗体结合的实验结果也非常近似。毕赤酵母表达的重组蛋白组成糖分过多可能会干扰与IgE的结合。我们提供的重组过敏原LoTox™ Fel d 1 (LTR-FD1D), rBla g 2 (RP-BG2) rDer p1 (RP-DP1D)是去糖基化的产品。 

Q8 我如何激活Der p 1的半胱氨酸蛋白酶活性?

 A Der p 1 5 mM半胱氨酸或1mM二硫苏糖醇激活而再生巯基,使其在纯化中氧化。(Gough et al. Journal of Experimental Medicine, 1999).

 

Q9 我应用何种底物来检测 Der p 1的半胱氨酸蛋白酶活性?

A DTT依赖的半胱氨酸蛋白酶活性可以在荧光实验中通过荧光肽底物Boc-QAR-MCA来检测。

Q10我需要激活 Der p 丝氨酸蛋白酶活性吗?

 A 不需要,Der p丝氨酸蛋白酶(NA-DPSP)不需要被激活。 

Q11 我应该用哪种底物来测试Der p丝氨酸蛋白酶的活性?

 A DTT依赖的丝氨酸蛋白酶活性可以在荧光实验中通过荧光肽底物Boc-QGR-MCA来检测。

MARIA™

 Q1 MARIA™ 试剂盒是冷冻保存还是在室温下保存?

 A 都不是,试剂盒和所有的试剂都应保存在4℃冰箱中,这是很关键的。冷冻会破坏试剂。N

Q2 MARIA™ kit的有效期是多久?

 A 假如保存得当的话,试剂盒在收到后的6个月内都说是有保障的。

Q3在实验前有没有必要将样品离心?

A 是的,MARIA™ 是基于微粒的实验,所以将样品中异质的颗粒减少到zui小是很重要的。

Q4 你们推荐的样品稀释比例是多少?

 A 推荐的样品稀释比例取决于您样品的类型及您研究所需达到的灵敏度。对于房屋灰尘提取物来说,我们推荐将样品以 1/10, 1/100 1/10,000稀释,这将使您达到较低的检测限0.1-0.9ng/ml(相当于0.002-0.012µg/g灰尘)

如果您不需要这么高的灵敏度,只需将样本用1/10010,000稀释,灵敏度水平就为1-6ng/ml (灰尘0.02-0.12µg/g)。这样您每块板子可以检测35个样品。

 空气过滤器提取物中的过敏原浓度要更低些,分析这类样本,我们通常不稀释,或以1/101/50稀释。

Q5 我应该如何进行系列梯度稀释?

 A1对于系列稀释1/10, 1/100 1/10,000:

 

每个样品准备三个微量离心管,管11/10稀释,将10µL样品加入到90µL实验缓冲液中,管2中加入90µL实验缓冲液,再加入管11/10稀释)中的10µL液体,涡旋振荡混匀。管3中加入990µL实验缓冲液,再加入管21/100稀释)中的10µL液体,涡旋振荡混匀。50µL of each prepared dilution are used in the MARIA™ 实验中每种稀释比例用50µL

A2 对于系列稀释1/101/50:

 每个样品准备两个微量离心管:1中加入90µL实验缓冲液,再加10µL 未稀释样品,涡旋振荡混匀。管2中加入80µL实验缓冲液及20µL1中稀释过的样品,涡旋振荡混匀。

Q6实验缓冲液必须要灭菌吗?

 A 是的!Yes! 未灭菌的实验缓冲液有较高的颗粒负荷,这会干扰xMAP系统的检测。它会导致高微粒聚集比率,读板时间可能会增加3-4倍。

Q7 ELISA洗板机可以用于MARIA™ 实验吗?

A 不可以。翻转板子或重新板中的孔会洗掉微球。所有的洗脱步骤都需要通过多头抽真空装置来过滤,试剂盒中有提供滤板。

Q8 在孵育过程中我需要摇动板子吗?

 A 不需要。在每步孵育前,微粒和事件要通过剧烈吹打使微粒和试剂充分混匀。不需要在孵育过程中晃动。

Q9 在暗室孵育的重要性是什么?我可以将板子放在工作台上吗?

A 所有的孵育必须在暗室中进行,否则微球会丧失其可被荧光辨别的标记。

Q10在孵育过程中我需要用铝箔纸封住板子吗?

 A 我们通常用配套的盖住封住板子,孵育时将其放在空的抽屉中。

Q11 我要用什么仪器读板?

 A 试剂盒只能与Luminex公司基于激光的荧光分析检测仪相配对:Luminex® 100, Luminex 200 和其他来自Luminex公司仪器或的经销商包括Bio-Rad 实验室(赫拉克勒斯, CA )Qiagen 公司 (巴伦比亚, CA) and MiraiBio (南旧金山, CA))Luminex仪器。我们使用Bio-Plex 仪器及其Bio-Plex管理软件(Bio-Rad, Hercules, CA).

 Q12 检测每个分析需要使用多少微粒?

A我们推荐每个分析物用100个微粒以求的重复性。

Q13 我应选择怎样的拟合曲线?

 A我们使用5个参数的logistic (5PL)曲线拟合。(该拟合曲线可以很容易的在Bio-Plex 管理软件中找到)

 Q14我应该怎样决定标准曲线中可用的部分?

 A1 如果曲线底端的荧光强度(FI)接近空白对照的FI,则不要使用在空白对照的FI加减3个空白对照标准差之内的FI

A2 我们通常不使用在曲线顶部平直部分内FI的数据。这意味着我们通常排除Der p 1, Der f 1, Der p 2, Fel d 1, Can f 1, Rat n 1 Mus m 1测得曲线顶部的2-3个点。Bla g 2 曲线的顶部是可用,然而底部的3-4个点就太接近空白对照数据了(看上)。

A3一些软件包,如Bio-Plex Manager® (Bio-Rad, Hercules, CA) 会在输出的Excel文档中自动显示期望值与实测标准值。我们使用这个功能作为额外的质量控制和*使用值,并且实测值和期望值的比率在15%之内。

A4 变异率(CV%)应在两个标准差之间没有超过15%。如果不是这样,您的移液器和移液过程的准确性需要被检测。

Q15用不同的样品稀释倍数我得到了不同的结果,我应该怎样选择正确的结果?

 A 从不同的样品稀释倍数获得不同的结果,这是取决于您样品中过敏原的浓度。有很多标准供您选择正确的结果。

只选择落入可用MFI范围的结果。如果多于一倍的稀释倍数得到相似的结果:取平均结果。除去Der f 1 外的所有分析物:如果稀释倍数增高而结果升高:选择基于zui高稀释倍数,含有很少Der f 1的样品与特定的灰尘提取物中底物出现低水平的干扰,并通过高稀释倍数的计算而增大。如果您观察到这样的结果如1/10= 7ng/ml, 1/100=74ng/ml, 1/10,000=4500ng/ml,那么就会出现上面所说的效应。在这种情况下,使用1/10稀释得到的结果,除非这个结果达到~100ng/ml ,若是这个点,则您可以信赖更高稀释倍数所得到的结果。这种异常现象在我们所检测样本中的比率<5%,并且只出现在Der f 1低水平的样本中。

 Q16 我可以获得 MARIA™ 技术的培训吗?
A可以的,我们在美国维吉尼亚州夏洛特维尔的公司中安排了一年两次的培训课程,请查询我们的以获得更多的信息。我们同样提供基于一年的循环MARIA™客户培训

ELISA

 

Q1 Der p 1 ELISA 试剂盒 EL-DP1和EL-DP1A的区别是什么?

 A INDOOR 推出的两个检测Der p 1 ELISA试剂盒,实验中与之结合的单抗是不同的。

EL-DP1:捕获单抗为5H8 ,生物素标记的单抗为4C1

EL-DP1A: 捕获单抗为10B9,生物素标记的单抗为5H8

 zui广泛使用的ELISA试剂盒为EL-DP1 (5H8/4C1)生物素4C1单抗在Der f 1 ELISA (EL-DF1)试剂盒中也有使用. EL-DP1推荐用于大多数常规灰尘和空气样本检测Der p 1。然而在EL-DP1实验中一定程度上存在与Der f 1的交叉反应,约为2% (参见 Luczynska et al, J Immunol Meth, 1989)。在常规分析中,这种水平的交叉反应不显著。

EL-DP1A试剂盒与Der f1的交叉反应<0.1% ,可应用于区分Der p 1 Der f 1。举例来说,过敏原生产商用于确定他们灰尘螨培养的样本没有交叉污染。EL-DP1A分析与EL-DP1试剂盒的敏感性水平相同(1-2ng/ml)

 Q2我们注意到实验显影非常慢(并且从未打到过 OD 2.0). 这有问题吗?

A 您的结果明显存在问题。控制曲线在zui高浓度的读值应在OD 2.0-2.4 ,敏感度应下至1-4ng/ml。如果您所有的实验,OD值都没有达到2.0 ,那么您实验的底物和显色方面可能存在问题。

A 在储存中所有生物素化的试剂是不是一直处于冷冻状态?这会减小这些单抗的敏感性

A 您是否混用了试剂或使用缓冲液片剂?我们发现一些缓冲液片剂不如新鲜制备的溶液有用。所有溶液通常在4℃保存不超过1个月,并不使用硫柳汞。

A 是否有试剂使用过*作为防腐?这会阻止显色,因为*是过氧化物酶的抑制剂。

 A 在为ABTS配置溶液B时,使用的磷酸钠形式是否正确?磷酸钠必须是二元的,即Na2HPO4·7H2

A ABST溶液中是否加了足量的过氧化氢?每毫升ABST溶液中要加入1µl 30% H2O2

A链霉菌抗生物素蛋白素过氧化物酶是否被正确稀释了?

A柠檬酸盐缓冲液的pH值是否正确? ABTS溶液的pH值应为4.2,并在调节前就应靠近这个pH。如果偏离较远,溶液A或溶液B或他们的组成就可能是错的。

A 洗板机污染有时可能会妨碍显色,导致显色非常缓慢,或达不到OD 2.0.洗板机应当定期清洁。

A直接通过窗户外的日光曝光会导致上述问题,孵育时让板子远离窗户。

Q3 我们实验的背景值很高,这是什么原因引起的?

 

A 通常当二抗是兔的多克隆抗体时,实验的背景较高。背景值通常在0.15OD左右。其他引起高背景的原因可能是:

A过氧化物酶标记的羊抗兔IgG抗体的来源问题。我们使用的为Biosource InternationalJackson实验室产品。这两个抗体的实验背景都非常低,BioSource: 1- (货号 # ALI4404) Jackson实验室为: 1- (货号 # 111-036-045)

A ABST底物在4°C能保持多久? 在冰箱中通常一个月内可以保持稳定。如果保存更长的时间试剂可能会变绿,并且出现高背景。ABST溶液在实验中应该差不多是无色的。其他溶液也应如此。所有溶液在4°C保存时间通常不超过1个月,并不含硫柳汞。

A 在加入过敏原溶液之前用1%BSA/PBS-T封闭板子30分钟。

A在某些情况下,出现高背景或在系列稀释时,zui初的几个样本稀释得太低或检测不到,却出现随机样本检测值高,可能是由于洗板机的污染。洗板机应当定期清洗预防一些随即孔污染和堵塞。

A 如果手动洗板,实验时增加清洗的次数会有助于降低背景。将各孔*填满不要溢出,然后小心的将板倾倒不要污染。然后在纸巾上温和的轻敲以去除剩余缓冲液。

Q4 我们重复的标准曲线和/或样品测试结果有很高的CV值,这是什么原因?

A 加入ABST后,读数确认显色值之前,要自始至终时常通过轻打板子两侧来温和摇晃。

A在进行ELISA实验室洗液是非常重要的。确认移液器特别是多孔道的在整块板倍比稀释时每个孔吸取和排出的量都一样。并且确认在移液时没有气泡。

Q5 我们可以保存微孔中包被的抗体吗?他们能被保存多久,我们应该怎样保存?

 A包被过的板子只能保存很短的一段时间,如一个周末,或长至1周。我们通常将用抗体溶液包被的板子用塑料薄膜抱住放入实验室冰箱中或冷室中。我们未尝试过更长的保存时间。

Q6 我们可以用OPD货TMB来代替ABST吗,按照Sigma的要求(放在干燥器中,含氩)保存ABST有些困难。

A 您可以用OPDTMB。我们不将ABST保存在氩中(这个不是很必要),同样得到了好的结果。

Q7 灰尘样本应该保存在 4°C吗,或是要冷冻?

 A 实验前我们通常将房屋灰尘样本保存在4°C,但一定提取过后应保存在-20°C

Q8在ELISA中我如何终止酶反应?

 A终止反应可以在每个孔内加入0.1ml 0.002M *。大部分ELISA读板机扫描板子的时间在5-20秒内,若未终止反应,OD值应达到。如果有大量的板子(5-10个板子)需要处理,或因其他原因如拍照需要保存时,可以加入叠氮化合物。

Q9 ELISA孵育的温度是多少?

 A用捕获抗体包被ELISA板的温度为4°C一晚.其他所有步骤都在室温下进行,通常为20-25°C

 Q10 一个ELISA试剂盒可以分析多少灰尘或空气样本?你们推荐分享多少?

A IndoorELISA试剂盒对10份或20份的96孔板来说包含足够的试剂(捕获mAb, 生物素化的检测mAb,的过敏原标准品),每块板子可以分析的样品数量取决于每个样本的稀释数量  

重复的标准曲线需要4个对照孔(PBS-T),占用24个孔,每个板剩余的72个孔检测样本。一般每个灰尘样本我们倍比稀释4个(螨过敏原1/10, 1/20, 1/40, 1/80),这意味着每块板可以检测18个样本。在这样的条件下一个20块板的ELISA试剂盒可以分析18 x 20 = 360个样本。

每个样本我们稀释四种,这样在大多数情况下,在一个单一实验中我们可以达到就>90%的检测结果。四个稀释度会增加每个样本控制曲线线性部分至少有两个点的可能性。,果样本已知过敏原水平范围,也可以用较少的稀释梯度。其他样本,如过敏原提取物,可能含有非常高的过敏原水平,那么在倍比稀释时,需要增加稀释的倍数,从1/100 1/1000开始,并可能需要在整个ELISA板上作梯度稀释。

空气样本通常过敏原水平较低,实验时可以以1/2, 1/4, 1/8, 1/16来稀释。

Q补充为什么没有单独检测Der p 2ELISA试剂盒呢?

A由于Der p 2Der f 2为相同抗原表位,所以使用的检测抗体无法区分这两种物质。我们有试剂盒EL-D2就是检测Der p 2Der f 2过敏原的

 

Environmental Testing

 Q1我想给Indoor邮寄一些样本做过敏原分析,你们需要多少量?

A 分析大量灰尘样本的过敏原水平,我们需要100mg的灰尘。我们近期的研究发现由于差异的可能性增加,除非至少有10mg的灰尘样品可用否则不能做过敏原分析。少于10mg可用灰尘不能做分析,会被邮寄退回(NES-不足量样本)

“Variability introduced into allergen immunoassays during the dust extraction process” 

如果用DUSTREAM™ 并在推荐的地区和时间采样也只有很少或没有灰尘,那么持续采样直到滤器达到1/4满。我们的过敏原结果不是基于地区的,而是基于每克灰尘中有多少微克过敏原。

 A对于过敏原提取物,或大量灰尘、空气过滤器中的的过敏原提取物,我们需要zui少0.5ml,特别是当要检测多个过敏原时。

A 对于空气采样录音带,整个过滤器要用1mlPBS提取溶液来提取,每个过滤器的结果据报道为ngµg 级。

 Q2我想给Indoor邮寄一些样本做内毒素分析,你们需要多少量

 A分析大量灰尘样本的内毒素水平,我们需要100mg的灰尘。如果少于20mg灰尘是无法做大量灰尘的分析的。如果用DUSTREAM™ 并在推荐的地区和时间采样也只有很少或没有灰尘,那么持续采样直到滤器达到1/4满。我们的内毒素结果不是基于地区的,而是基于每克灰尘中的内毒素单位。

A 我们收取的样本是要为提取过的,这点非常重要。提取的过程必须在一个干净的环境中进行,并且要用含0.05%吐温不含内毒素的水。样本的提取和分析应在同一天进行。这些步骤对于防止其他来源的内毒素污染非常重要。

A 空气过滤器样品也可邮来做内毒素分析。整个过滤器在1ml无内毒素含0.05%吐温的水中提取。结果报告形式为每个过滤器中含有多少内毒素单位。我们推荐同时邮寄一个空的过滤器检测作为使用后过滤器的基准。

Q3我在我的实验室中准备要分析的灰尘样本,我需要过滤这些灰尘吗?

A 是否过滤灰尘是由该灰尘的质量决定的。我们通常不过滤从床上和柔软的家具上收集的灰尘。地毯样本过滤(如用No.45,直径355um的筛子过滤)来分离纤维和灰尘中的大颗粒。我们推荐用DUSTREAM™收集器,可以大大减少过滤灰尘的需要。用DUSTREAM™收集器收集灰尘样本后,拆下含有灰尘样本的尼龙滤器,倒置滤器,轻拍,是灰尘落入一张称过重的纸上,灰尘会比纤维先从过滤器中出来。

Q4 灰尘样本和其提取物应该怎样保存?

A灰尘样本提取前应在室温下,保存在干燥的地方。灰尘提取物应在-20℃冰箱中冷冻保存。

Q5INDOOR分析服务的采样和委托程序是怎样的?

A 请看Collecting Dust SamplesSubmitting Samples.

A Download Analysis Request Form 

Q6你推荐用什么方法准备过敏原分析的灰尘提取物 ?

 A请看Sample Extraction Procedure.

 A用于内毒素实验的提取物需要在Indoor分析服务实验室中进行,同天进行分析,以防内毒素污染等多重风险。这项服务不应邮寄提取物,只要干的样本如大量灰尘和空气过滤器。

 
我们公司zui大优势是强大的采购,
1:基本什么都能进口,血清,抗体,耗材,还有部分限制进口的,
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凝血因子产品:Enzyme Research Chromogenix American Diagnostica Inc Quidel Haematologic Technologies ARBOR ASSAYS HYPHEN BioMed Technoclone
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动物模型:reseachdiets ALZET IRA Altromin  FormuMax Scientific list biological laboratories  harlan clodronaiposomes torpac Fine Science Tools
磷脂产品:avanti CordenPharma clodronaiposomes FormuMax Scientific
酶产品:Worthington Inspiralis BBI Glycotech TopoGen pentapharm arcticzymes
蛋白产品:bio-rad PIERCE GE hamptonresearch
聚合物:polymersource polysciences APSC
多肽产品:Peptides international  Anaspec bachem americanpeptide
临床检查:salimetrics 
荧光分子产品:Biosearch Technologies fluorochrome
细胞分选:Cedarlane  polysciences GE lonza macs life
血液产品:Pel-Freez Cedarlane life bovogen athensresearch Valley Biomedical
生化试剂:AMERSCO sigma MPBIO ICN applichem
染色产品: Hitobiotec FD NEURO TECHNOLOGIES polysciences