生物制品*改变了制药行业。但这些药物，包括单克隆抗体 (mAbs)，当给予患者时可能会引发免疫反应，从而导致抗药物抗体 (ADAs)的发展。随着生物制品市场的繁荣和新型抗体形式的兴起，如双特异性抗体、抗体片段和抗体偶联物，免疫原性评估已成为重要标准。

决定生物药物免疫原性的因素可以是：

• 内在——分子结构、宿主细胞 DNA/蛋白质、配方；

• 外源性——剂量、途径、内源性对应物；

• 宿主相关——遗传特征、免疫状态、疾病状态。

了解可能对产品的药代动力学特征、药效学作用、临床疗效或安全性产生不利影响的 ADA 的发生率或影响，这在任何治疗性蛋白质产品开发计划中至关重要。因此，生物治疗药物产生的免疫原性引起了监管机构、行业和临床医生的极大关注。

如何检测和表征 ADA？

在接受生物药物治疗的患者中发生的 ADA 可分为两种主要类型：

1. 中和阻断，直接干扰药物与其靶点结合的能力；

2. 识别药物上其他表位但仍允许抗原结合活性的非中和性 ADA。例如，针对药物 Fc 区的抗体。

血清样品中中和和非中和 ADA 的测定对于药物开发的临床前和临床阶段非常重要。该过程涉及 (1) 筛选测定，(2) 确认测定，和 (3) 表征测定。

筛选试验

这些技术检测治疗性蛋白质中 ADA 的存在。在施用生物治疗产品后，筛选测定评估每个患者样本中和患者样本之间的多克隆抗体。酶联免疫吸附试验 (ELISA)、放射免疫沉淀试验 (RIPA) 等方法和电化学发光 (ECL)、珠基试验、Gyrolab 系统、表面等离子共振 (SPR)、生物层干涉测量等新技术均可用于确定免疫原性的初步筛选试验。

为筛选 ADA 开发的平台必须考虑：

• 适合治疗的格式和设计；

• 用于测定灵敏度的阳性对照；

• 检测具有所需特异性（IgM、IgG 亚类等）的抗体的能力；

• 来自治疗本身的潜在干扰、来自联合用药和/或疾病特异性问题（例如，类风湿因子 (RF)、药物靶标）的干扰。

为检测生物治疗产品而开发的所有筛选试验都必须在各自的实验室内进行优化 和验证，以确保重现性和准确性。 将筛选测定结果解释为抗体阳性或抗体阴性由“切点”（阈值）策略定义。

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验证性分析

这些测定证实了 ADA 对特定治疗性抗体的特异性。这种方法通过在同一测定中向处理和未处理的样品中添加过量抗原来消除筛选测定中鉴定的假阳性样品。样品中 ADA 的存在通过处理样品与未处理样品的信号降低来确认。

表征分析

一旦确认特定药物的 ADA 存在，表征 ADA 就很重要。阳性样品的表征、滴度测定、中和潜力的评估、免疫球蛋白类别和亚类、同种型的阐明等。这些因素有助于更好地了解生物药物的免疫原性及其临床影响。在这方面，中和测定对于评估 ADA 中和治疗性抗体的生物活性的能力至关重要。基于细胞的生物测定或基于非细胞的竞争性配体结合 (CLB) 测定是可用于检测中和 ADA 的两种主要体外方法，必须根据时间消耗、易于实施的方案和适当检测对药物疗效的影响。

抗特型抗体

抗特型抗体 (anti-IDs) 是在抗体药物的 Fv 区域（也称为特型）内特异性结合抗原结合位点的 ADA。当前一代获批的抗体药物是人源化或*人源化的，其中特型是“外来”序列。因此，抗 ID 通常是响应大多数抗体药物而产生的最常见的 ADA。

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除此之外，抗 ID 已成为免疫原性和药代动力学研究的重要体外诊断工具。对于分析开发，在动物模型中产生针对生物药物的抗 ID，通常是小鼠/兔单克隆或多克隆。根据anti-ID在抗体药物Fv上的结合位点，anti-ID抗体可以是中和的也可以是非中和的，分为三种类型：

1. 互补位特异性或抗原阻断抗-ID：直接与抗体药物的抗原结合位点结合，直接与靶抗原竞争。这些是中和抗 ID，可用于检测血清中游离/未结合的药物分子；

2. Non-blocking anti-IDs：结合位点不与抗体药物的互补位重叠，使药物与靶标结合。这些是非中和的，可以结合并检测血清中的总药物，包括游离药物和结合/部分结合的药物；

3. 复合物特异性抗 ID：仅与抗体药物靶复合物结合。这些是非中和的，可用于检测血清中的结合药物。

使用抗 ID 和多克隆 ADA 的体外测定用于免疫原性研究。然而，抗 ID 更常用于药代动力学 (PK) 研究。由于 PK 研究着眼于药物代谢，因此抗 ID 尤其有助于检测血清、尿液和其他体液中结合或未结合的药物。

此外，在生物仿制药开发方面，抗 ID 是免疫原性可比性研究的重要工具。在生物仿制药开发的早期阶段，使用抗 ID 的筛选和功能测定可以帮助确认候选生物仿制药对原研分子或参考产品的抗原特异性。用于确认生物仿制药特异性的一些常用检测方法包括：

• 桥接试验——抗 ID 用于捕获和检测生物仿制药；

• 流式细胞术——药物靶向特异性抗 ID 用于检测与其配体结合在细胞上的生物仿制药；

• 结合抑制——中和或阻断抗 ID 用于确认生物仿制药是否与细胞上的目标配体结合；

• 直接 ELISA 测试——抗 ID 可用于筛选候选生物仿制药，因为它不会与不适合 CDR 序列的 mAb 结合。

此外，还进行了比较临床试验，以评估生物仿制药和参考产品的免疫原性。这些试验必须在最敏感的患者群体中进行，并使用相同的临床方案（例如，给药途径、治疗计划、取样程序、取样时间点，包括基线/治疗前样品和储存条件）和抗体测定生成有效的比较数据。所需的免疫原性数据量取决于从参考产品和/或产品类别中获得的经验。这种基于证据的数据有助于临床医生/医师消除对将患者转换为生物仿制药或多种生物仿制药的担忧。

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Evidentic 等分试样是开发抗特型抗体、抗药物抗体 (ADA) 检测试验和其他利用抗人偶联二抗的体外 诊断试验的理想选择。