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polyplus-transfection DNA 转染试剂产品说明书

发表于由

 

Polyplus-transfection® SA 是家生物技术公司，通过创新的核酸转染解决方案支持基因和细胞治疗、生物制剂制造和生命科学研究。Polyplus-transfection 的优势在于在制造转染解决方案方面拥有20 年的经验，并提供量身定制的科学和监管支持以加速研究。

 

 polyplus-transfection DNA 转染试剂产品说明书

jetOPTIMUS ®

  •  高效：在难以转染的细胞中达到最大基因表达
  •  经济高效：使用最少的试剂量和 DNA 量
  •  生物学相关：保持出色的细胞活力和形态
  •  省时：使用优化的即用型方案进行转染

 

试剂

jetOPTIMUS ® DNA 转染试剂
分子交付

质粒DNA
应用

来自质粒 DNA 转染的瞬时和稳定基因表达
CRISPR 使用 DNA 方法进行基因组编辑
细胞类型

难以转染的贴壁哺乳动物细胞：
– 原代细胞（上皮细胞、肝细胞、内皮细胞、成纤维细胞等）
– 干细胞（胚胎、间充质、诱导多能
细胞）- 癌细胞系
转染次数

按照标准方案，1.5 ml jetOPTIMUS ®转染试剂足以在 24 孔板中进行 3000 次转染或在 6 孔板中进行 750 次转染
贮存

5°C ± 3°C，适当储存可稳定至少一年
提供

jetOPTIMUS ®缓冲液

概括

®在您需要的细胞模型中完成您的 DNA 转染！

作为转染专家，我们知道生物学家必须使用生理相关的细胞模型。对于基因表达研究，转染是在给定细胞模型中引入感兴趣基因的技术，因为与物理技术（例如微注射、电穿孔）相比，转染具有成本效益和使用简单性。

由于不同的原因，几种类型的细胞（原代细胞、干细胞或癌细胞系）仍然难以用 DNA 转染：分裂速度慢、细胞脆弱性和细胞防御机制。为了解决当前 DNA 转染的局限性并补充我们现有的基因表达产品组合（jetPEI®、jetPRIME®、jetMESSENGER®），Polyplus-transfection® 设计了一种创新的递送纳米颗粒：jetOPTIMUS®。

jetOPTIMUS® 是一种强大的转染试剂，可改善贴壁细胞（甚至难以转染的细胞）中 DNA 的细胞摄取和内体逃逸，从而提高转染效率。为了在相关生理条件下工作，使用 jetOPTIMUS® 进行转染需要最少的 DNA 量和试剂量，以保持出色的细胞活力和形态。

 

订购信息

参考编号 试剂大小 缓冲区大小
117-01 0.1 毫升 10 毫升
117-07 0.75 毫升 2 x 60 毫升
117-15 1.5 毫升 4 x 60 毫升
717-60 X 60 毫升

描述

优化难转染细胞的 DNA 转染效率

jetOPTIMUS ®是一种创新的阳离子纳米技术，旨在提高易转染和难转染细胞的 DNA 转染效率，用作体外细胞培养模型。在各种原代细胞和细胞系上进行了测试，jetOPTIMUS ®通过达到比主要竞争对手更高的转染效率和基因表达证明了其优越性。

图 1：jetOPTIMUS ®优于其主要竞争对手。在 24 孔板中用编码 GFP 蛋白的质粒转染 24 小时后，通过 FACS 分析在各种细胞系中评估转染效率。根据制造商对 Lipofectamine ® 3000 和 jetOPTIMUS ®的建议设置条件。

先进的纳米技术：使用更少的材料实现基因表达！

jetOPTIMUS ® 的开发旨在提高对多种细胞类型的转染效率，同时保持尽可能低的 DNA 量，并与主要竞争对手相比减少所需的试剂量。因此，科学家可以增加转染次数并将每次反应的成本降低多达七倍（表 1）。

表 1：在 24 孔板中，与 Lipofectamine ® 3000相比，所需的 jetOPTIMUS ®体积更小。

出色的细胞活力和形态

达到高转染效率通常以细胞完整性为代价，对细胞周期、代谢和信号通路产生不利影响。在 Polyplus-transfection，我们对细胞完整性不做任何妥协：jetOPTIMUS ®转染试剂对细胞温和，允许从基因表达研究中生成生物学相关数据。

图 2：细胞在转染后 24 小时保持健康并保持良好的形态。根据制造商对每种试剂的建议，用编码 GFP 蛋白的质粒转染 24 小时后，对 MDCK 和 VERO 细胞进行相差显微镜检查。

优化的转染方案

jetOPTIMUS ®是一种即用型转染试剂，自带复合缓冲液（jetOPTIMUS ® Buffer）。该方案针对使用简单（所有板尺寸）、培养基兼容性（抗生素、血清）和成本效益（DNA 量和试剂量）进行了优化。

图 3：24 孔板中用于 DNA 转染的 jetOPTIMUS ®方案的简单性。

 

应用

DNA转染

质粒是在细菌中常见的环状 DNA 小分子。质粒与染色体 DNA 分开存在和复制，并且在细菌中它们通常携带有利于细菌生存的基因。质粒可被有意引入所需细胞并用于在特定细胞系中过表达感兴趣的基因。此过程称为 DNA 转染，是研究基因功能或目标蛋白质的常用方法。

CRISPR基因组编辑

CRISPR/Cas9 系统在哺乳动物细胞中的使用最近成为一种在特定位点修改细胞基因组的非常方便的方法。它涉及将 (a) 一个或多个编码 Cas9、特定 gRNA 和最终插入序列的质粒瞬时转染到哺乳动物细胞中，或 (b) 一个或两个质粒和一个 RNA 分子（gRNA）的混合物.

病毒生产

jetOPTIMUS ®转染试剂对于在有血清的经典培养基（如 DMEM）中生长的贴壁细胞中 AAV 和慢病毒的常规病毒生产非常有效。

 

每批 jetOPTIMUS ®都按照标准方案在 HeLa 细胞中通过 DNA 转染进行内部测试。每批将提供分析证书。

Polyplus-transfection ®自 2002 年起获得 ISO 9001 质量管理体系认证；这一级别的认证向全球客户保证，供应商已为产品开发、制造、销售和客户支持建立了可靠且有效的流程

 

 

 

 

Polyplus-transfection常备货产品列表

发表于由

Polyplus-transfection®是家生物技术公司，通过创新的核酸转染解决方案支持基因和细胞治疗、生物制剂制造和生命科学研究。

Polyplus-transfection 的优势在于在制造转染解决方案方面拥有20 年的经验，并提供量身定制的科学和监管支持以加速研究。

Polyplus-transfection常备货产品列表

产品编号 名称 规格型号 品牌/生产厂家
101000046 （114-15）jetPRIME:emoji: 1.5 mL 1.5mLoftransfectionreagent+2x60mLofjetPRIME:emoji:buffer polyplus-transfection
114-15 jetPRIME 1.5 mL of transfection reagent + 2 x (60 mL of jetPRIME buffer) polyplus-transfection
PT-114-15 jetPRIME kit 1,5 ml of jetPRIME + 2 x (60 ml) of jetPRIME buffer polyplus-transfection
101000028 （409-10）INTERFERin 1 mL 1mL polyplus-transfection
116-010 FectoPRO 10 mL transfection reagent + 10 mL FectoPRO Booster polyplus-transfection
101000040 in vivo-jetPEI® 0.1 mL 10ml polyplus-transfection
101000007 10ml transfection reagent + 10ml FectoPRO Booster 10ml polyplus-transfection
101000030 in vivo-jetPEI® 0.5 mL 0.5ml polyplus-transfection
101000027 （114-01）jetPRIME® 0.1 mL 0.1mLoftransfectionreagent+5mLofjetPRIME®buffer polyplus-transfection
101000056 （150-01） jetMESSENGER:emoji: 0.1 mL 0,1mLtransfectionreagent+10mLmRNABuffer 0.1ml polyplus-transfection
101000051 （117-01）jetOPTIMUS 0.1 mL 0.1 mL polyplus-transfection
101000053 1mL polyplus-transfection
101000026 (115-100)PEIpro 100 mL 100mLtransfectionreagent polyplus-transfection
101000033 (115-010)PEIpro:emoji: 10 mL 10mLtransfectionreagent polyplus-transfection
101000014 (116-001)FectoPRO 1 mL 1 mL transfection reagent + 1 mL FectoPRO Booster polyplus-transfection
101000017 (115-0015)PEIpro:emoji: 1.5 mL 1.5mLtransfectionreagent polyplus-transfection
101000010 0.4 mL transfection reagent + 0,2 mL R-P control + 20 mL Hepes 0.4mL polyplus-transfection
101000006 （117-15）jetOPTIMUS 1.5 mL 1.5 mL transfection reagent + 4 x 60 mL jetOPTIMUS Buffer polyplus-transfection
101000021 (204-10)in vivo-jetRNA 1 mL 1 mL delivery reagent + 60 mL mRNA Buffer polyplus-transfection

PEI Transfection

发表于由

PEI Transfection

 

 

Transfection:

 

  1. Split 293T cells one day before transfection in DMEM/10% FBS medium:
    1. 6 well dish: 0.5×106 cells
    2. 10cm dish: 4.0×106 cells
    3. 15cm dish: 9.0×106 cells

 

  1. Prior to transfection bring all reagents to room temperature.

 

  1. In a sterile tube dilute total plasmid DNA (ug) in serum-free DMEM w/o phenol red (volume of media is 10% of final volume in culture vessel). Use transgene: viral packaging (psPAX2):viral envelope (pMD2G) constructs at 4:2:1 DNA ratio

 

  1. 6 well dish: 200ul + 3 ug of total DNA
  2. 10cm dish: 1mL + 7-8 ug of total DNA
  3. 15cm dish: 2mL +  11-12 ug of total DNA

 

  1. Add PEI (1ug/uL) to the diluted DNA. Mix immediay by vortexing or pipeting. The volume of PEI used is based on a 3:1 ratio of PEI (ug):total DNA (ug).

 

  1. 6 well dish: 9ul of PEI(1ug/ul) = 9ug
  2. 10cm dish: 21ul of PEI (1ug/ul) = 21ug
  3. 15cm dish: 33ul of PEI(1ug/ul) = 33ug

 

  1. Incubate 15 minutes at RT
  2. Add DNA/PEI mixture to cells

 

  1. Harvest transfected cells and/or viral supernatant at 48 hours post-transfection

 

 

Reagents:

 

PEI (1ug/ul) – PEI is Polyethylenimine 25kD linear from Polysciences (cat# 23966-2). To make a stock solution:

  • Dissolve PEI in endotoxin-free dH2O that has been heated to ~80°C.
  • Let cool to room temperature.
  • Neutralize to pH 7.0, filter sterilize (0.22um), aliquot and store at -20°C; a working stock can be kept at 4°C.
  • 货号 品名 价格￥ 规格 品牌 备注
    23966-2 POLYETHYLENIMINE LINEAR 2864 2 g polysciences 大量现货
    24765-2 POLYETHYLENEIMINE 'MAX' 3184 2 g polysciences 转染效率高30% 更好溶解
    78002qf01 线性PEI转染液 200 1ml jinpanbio 23966配制
    78002qf02 线性PEI转染液 600 50ml jinpanbio 23966配制
    78002qf03 线性PEI转染液 1800 500ml jinpanbio 23966配制
    78003qf01 线性PEI转染液 200 1ml jinpanbio 24765配制
    78003qf02 线性PEI转染液 700 50ml jinpanbio 24765配制
    78003qf03 线性PEI转染液 2200 500ml jinpanbio 24765配制
    78004qf01 POLYETHYLENIMINE LINEAR 1432 1g jinpanbio 23966分装
    78005qf01 POLYETHYLENEIMINE 'MAX'(40 000M.W.* 1592 1g jinpanbio 24765分装